聯(lián)合應(yīng)用免疫法與化學(xué)法潛血試驗(yàn)對(duì)胃出血的診斷價(jià)值探討

路愛麗，齊振普，張 敏

(新鄉(xiāng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

目前潛血試驗(yàn)多針對(duì)檢測(cè)標(biāo)本內(nèi)由于少量出血而存在紅細(xì)胞破壞釋放的血紅蛋白(hemoglobin，Hb)。潛血檢測(cè)方法有免疫法(膠體金免疫層析法等)和化學(xué)法(匹拉米洞定量法等)[1-2]，2種方法相比，免疫法敏感性、特異性都有很大提高，不受飲食或相關(guān)藥物影響，已被廣泛應(yīng)用于臨床和批量人群的查體。實(shí)際應(yīng)用中，常發(fā)現(xiàn)胃出血者免疫法與化學(xué)法結(jié)果不一致，免疫法出現(xiàn)陰性結(jié)果。我們?yōu)轵?yàn)證方法的可靠性，對(duì)膠體金免疫層析法(免疫法)和匹拉米洞定量法(化學(xué)法)進(jìn)行比較。

材料和方法

一、研究對(duì)象

胃出血組為胃鏡檢查確診為胃出血患者30例，對(duì)照組為隨機(jī)抽取胃鏡檢查確診為無胃出血的消化科門診患者45例?？崭?2h，在胃鏡檢查過程中收集胃液約50 mL。胃鏡檢查和胃液檢驗(yàn)均征得患者同意，本研究也得到醫(yī)院倫理委員會(huì)的認(rèn)可。

二、試劑

免疫法潛血試帶由上海凱創(chuàng)生物技術(shù)有限公司提供。化學(xué)法試帶由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

三、方法

1.免疫法 采用膠體金免疫層析原理，Hb與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合后，再與固相抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-膠體金標(biāo)記抗體復(fù)合物(雙抗體夾心法)，在檢測(cè)區(qū)出現(xiàn)紅色條帶，同時(shí)出現(xiàn)紅色質(zhì)控條帶為陽性。單獨(dú)出現(xiàn)質(zhì)控條帶為陰性，不出現(xiàn)質(zhì)控條帶為試劑失效。操作與結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2.化學(xué)法 在酸及H2O2作用下，匹拉米洞與Hb反應(yīng)，產(chǎn)生紫藍(lán)-紫紅的顏色。操作與結(jié)果判斷按照說明書進(jìn)行。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，2種方法分別檢測(cè)對(duì)照組與胃出血組的胃液標(biāo)本，結(jié)果用Pearson χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、敏感性與檢測(cè)范圍

將已知Hb濃度的人抗凝全血用生理鹽水稀釋成濃度為 5000、2500、2000、1000、500、100、10、1.0、0.05、0.01 μg/mL 的 Hb 溶液，混勻，用 2種方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1?？梢奌b含量在0.05 ～2000 μg/mL 之間免疫法均可檢出。但Hb＞2000 μg/mL時(shí)，可能出現(xiàn)競(jìng)爭(zhēng)抑制而呈假陰性?；瘜W(xué)法只能檢出Hb含量在10 μg/mL以上的標(biāo)本。

二、特異性與方法比對(duì)試驗(yàn)

胃出血組30例與對(duì)照組45例胃液標(biāo)本分別用2種方法檢測(cè)，結(jié)果見表2。2種方法結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=114.466，P=0.000)。

有文獻(xiàn)報(bào)道，胃液中消化酶可消化Hb，使其失去免疫原性，從而使免疫法出現(xiàn)假陰性[3-6]。為了驗(yàn)證免疫法陰性、化學(xué)法陽性的結(jié)果是否由胃液消化作用引起，做了以下試驗(yàn)。在2 mL胃液中加入患者本人全血(Hb 142 g/L)100 μL，放入37℃水浴箱中，觀察不同時(shí)間免疫法和化學(xué)法的反應(yīng)結(jié)果。見表3。結(jié)果顯示，胃液消化作用的確可使免疫法出現(xiàn)假陰性。在2 mL胃液中加入患者本人全血100 μL，37℃反應(yīng)1 h，免疫法即為陰性?；瘜W(xué)法反應(yīng)至 8 h，結(jié)果仍呈強(qiáng)陽性(++++)。

表1 免疫法和化學(xué)法的檢測(cè)范圍

表2 2種方法胃出血組和對(duì)照組同時(shí)檢測(cè)胃液潛血結(jié)果比較

表3 免疫法與化學(xué)法胃液潛血比對(duì)試驗(yàn)(37℃)

討 論

2種方法潛血試驗(yàn)的敏感性、線性范圍和特異性比較，免疫法可檢出最低0.05 μg/mL的 Hb，化學(xué)法只能檢出10 μg/mL以上的Hb，二者敏感性相差200倍。Hb 量在0.05 ～2000 μg/mL范圍內(nèi)免疫法均可檢出。標(biāo)本中Hb＞2000μg/mL時(shí)，可因雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)抑制現(xiàn)象而呈假陰性?；瘜W(xué)法只能檢出Hb含量在10 μg/mL以上樣本。免疫法只與人Hb起反應(yīng)，不與動(dòng)物血和其他氧化劑發(fā)生假陽性反應(yīng)?；瘜W(xué)法易受氧化劑影響，要求試驗(yàn)前3 d禁食動(dòng)物血、肝，富含葉綠素食物，鐵劑和中藥，避免假陽性[7]。

由表2可見，免疫法對(duì)照組出現(xiàn)1例、化學(xué)法出現(xiàn)7例假陽性，經(jīng)隨訪得知，6例陽性者在檢測(cè)前均食入了動(dòng)物肉類和菠菜。2種方法同時(shí)陽性1例是鼻出血者部分血液咽下入胃所致。胃出血組化學(xué)法均陽性，免疫法出現(xiàn)2例假陰性，對(duì)該2例樣本第1次稀釋液再稀釋1次重新檢測(cè)，結(jié)果陽性，原因是胃液中Hb過高出現(xiàn)雙抗體夾心法的“競(jìng)爭(zhēng)抑制”現(xiàn)象導(dǎo)致假陰性。因此取標(biāo)本時(shí)量宜少不宜多，以避免假陰性。

胃液可消化Hb，使其失去免疫原性，導(dǎo)致免疫法出現(xiàn)假陰性結(jié)果。由表3可見，當(dāng)胃液中出血量 ＜50 μL/mL(相當(dāng)于 Hb 7000 μg/mL)時(shí)，免疫法可出現(xiàn)假陰性結(jié)果?；瘜W(xué)法是Hb中Fe3+具有類過氧化物酶作用，催化H2O2與色原而顯色，不受胃液消化影響，不易出現(xiàn)假陰性。免疫法反應(yīng)結(jié)果還與血液在胃液中停留時(shí)間有關(guān)[3-4，6-7]。由表3 可見，在2 mL 胃液中加入100 μL患者本人的血液，37℃反應(yīng)1 h，免疫法為陰性?；瘜W(xué)法反應(yīng)至8 h，結(jié)果仍呈強(qiáng)陽性(++++)。免疫法與化學(xué)法聯(lián)合應(yīng)用，可起到優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)作用。在分析免疫法和化學(xué)法結(jié)果時(shí)，要結(jié)合臨床癥狀綜合考慮。

目前，免疫膠體金層析法只是定性試驗(yàn)，僅給出陽性或陰性結(jié)果，不能對(duì)胃出血患者進(jìn)行療效觀察[8-9]，很難確定定量反應(yīng)關(guān)系，因此不能指導(dǎo)臨床判斷出血量。而化學(xué)法可根據(jù)反應(yīng)時(shí)間和顏色深淺大致估計(jì)出血量多少(半定量)，適合對(duì)臨床的正確引導(dǎo)。

免疫法的高敏感性、特異性和檢測(cè)范圍，但又存在Hb過高出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)和胃液消化Hb導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象。雖然化學(xué)法敏感性、特異性較差，但可彌補(bǔ)免疫法的缺陷。聯(lián)合應(yīng)用免疫法與化學(xué)法進(jìn)行胃液潛血試驗(yàn)，對(duì)檢測(cè)胃出血結(jié)果更可靠，可起到優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的作用。

總之，聯(lián)合應(yīng)用免疫法與化學(xué)法進(jìn)行胃液潛血試驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)2個(gè)結(jié)果不一致的情況。如何解釋檢驗(yàn)結(jié)果，需要結(jié)合臨床體征和其他檢查(胃鏡、腸鏡等)結(jié)果綜合考慮。如果臨床癥狀高度懷疑出血，但胃液潛血試驗(yàn)結(jié)果免疫法陰性、化學(xué)法陽性，應(yīng)考慮免疫法的競(jìng)爭(zhēng)抑制現(xiàn)象或胃液消化作用所致的假陰性。如果胃鏡或其他檢查不支持胃出血，化學(xué)法陽性時(shí)，應(yīng)考慮其他氧化劑導(dǎo)致的假陽性。出現(xiàn)免疫法與化學(xué)法結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)及時(shí)與臨床溝通，指導(dǎo)臨床正確解讀檢驗(yàn)結(jié)果，避免臨床醫(yī)師對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的誤會(huì)，從而對(duì)患者做出正確的診斷。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:310-311.

[2]吳 鵬，李 艷，陳 進(jìn)，等.聯(lián)合免疫法和化學(xué)法檢測(cè)糞便隱血的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(3):176-178.

[3]張國(guó)祥，許文龍，楚 旭.免疫法糞便潛血試驗(yàn)用于上消化道出血性疾病診斷的評(píng)價(jià)[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2007，25(4):381-382.

[4]邵維杰，曹丹如，陳 悅，等.一種檢測(cè)糞便隱血的改良化學(xué)法[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24(4):286-288.

[5]畢紅琳，林 玲.3種大便隱血檢測(cè)方法的比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(22):2495-2497.

[6]蔡鋼強(qiáng)，陳化禹，李 冬，等.胃液對(duì)免疫膠體金隱血試驗(yàn)影響的實(shí)驗(yàn)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2008，23(1):113.

[7]韋常麗.糞便潛血單克隆抗體法臨床應(yīng)用的探討[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，6(4):56-57.

[8]Kabir S.Review article:clinic-based testing for Helicobacter pylori infection by enzyme immunoassay offaeces，urine and saliva[J].Aliment Pharmacol Ther，2003，17(11):1345-1354.

[9]唐 衡，桂滿元.兩種方法檢測(cè)糞便隱血比較與評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，29(9):840.