解毒通脈膠囊抗心肌缺血效應(yīng)的工藝篩選研究*

張 麗 雷亞賢 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 （咸陽 712000）

不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）屬于中醫(yī)“胸痹、心痛”范疇。依其證候表現(xiàn)，屬于熱毒、痰濁、瘀血互相交阻，痹阻心脈，“不通則痛”，此為標(biāo)急之證。按“急則治其標(biāo)”之原則，當(dāng)以清熱解毒，化痰祛瘀，宣痹通脈為主。解毒通脈膠囊具有清熱解毒、化痰祛瘀、宣痹通脈之功效，尤適于熱毒痰瘀型冠心病不穩(wěn)定型心絞痛。故本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代化學(xué)提取方法結(jié)合藥理學(xué)效應(yīng)，對比觀察不同提取工藝的解毒通脈膠囊對心肌缺血的保護(hù)作用，以期篩選出解毒通脈膠囊抗心肌缺血的最佳工藝。

1 材料與儀器 1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康SPF級SD大鼠，體質(zhì)量（245±15）g，合格證號：陜醫(yī)動字第08－25號；ICR小鼠，體質(zhì)量18～22g，合格證號：陜醫(yī)動字第07－002號，均由陜西省西安市長安區(qū)斗門實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖場提供。

1.2 藥物與試劑 所有藥材均由西安盛興中藥飲片有限公司提供；陽性對照藥血塞通膠囊為云南省玉溪市維和制藥有限公司生產(chǎn)（批號：20100201）；心得安為西安利君制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)（批號20100305）；垂體后葉素為上海第一生化藥業(yè)有限公司（批號：100904）；烏拉坦，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司分裝（批號：20100412），0.9%氯化鈉注射液，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司分裝（批號：20100412）。鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110766－200011），乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

1.3 儀器日立L－2000型高效液相色譜儀，L－2400型紫外檢測器，L－2130型泵，EZStart工作站。METTLER AE240電子分析天平（上海梅特勒－托利多儀器有限公司）。KQ 3200E型超聲波清洗器。

2 方 法 2.1 三種提取工藝樣品的制備 工藝樣1制備：取5倍處方量，三七烘干，粉碎成細(xì)粉，備用；丹參、黃連、蓮子心、瓜蔞、半夏、萊菔子、赤芍七味藥材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，濾過，合并濾液，加入三七細(xì)粉，濃縮至360mL（每1mL含1g原藥材），備用。

工藝樣2制備：取5倍處方量，三七烘干，粉碎成細(xì)粉，備用；取丹參，黃連、赤芍三味加8倍量的50%乙醇回流提取2次，每次1.5h，濾過，得濾液①，備用。蓮子心、瓜蔞、半夏、萊菔子四味藥材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，濾過，與濾液①合并，加入三七粉，濃縮至360mL（每1mL含1g原藥材），備用。

工藝樣3制備：取3倍處方量，三七烘干，粉碎成細(xì)粉，備用；取丹參加8倍量的95%乙醇回流提取1.5h，濾過，得濾液①，藥渣與黃連、赤芍二味加8倍量的50%乙醇回流提取1次，每次1.5h，濾過，得濾液②，備用。藥渣再與蓮子心、瓜蔞、半夏、萊菔子四味藥材加水煎煮提取2次，每次2h，加8倍量的水，濾過，與濾液①、②合并，加入三七粉，濃縮至360mL（每1mL含1g原藥材），備用。

2.2 對垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的影響 取健康SD大鼠，體重180～220g，烏拉坦腹腔注射麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺，將4個針形電極按規(guī)定位置分別插于大鼠四肢皮下（紅－右前肢，黃－左前肢，藍(lán)－左后肢，黑－右后肢），II聯(lián)導(dǎo)描記正常心電圖，選取心電圖正常的大鼠60只，隨機(jī)均分為模型對照組、樣品1、2、3組（9.6g／kg）、血塞通組（0.3g／kg）。樣品1、2、3組及血塞通組、按設(shè)定的劑量給大鼠灌胃，模型對照組給水，連續(xù)5d，從第6d開始，每組大鼠給藥后30min，然后腹腔注射垂體后葉素（0.6U／kg）造成心肌缺血，描記缺血后1、5、15、30S、1、3、5、10min各時間點(diǎn)心電圖，以給藥后心電圖ST段變化的毫米數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)，表示心肌缺血程度。

2.3 解毒通脈膠囊對正常小鼠耐缺氧時間的影響 取ICR小鼠72只，體質(zhì)重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對照組（給予等容量水溶液）、不同工藝1～3組（12g／kg），心得安組（20mg／kg）、血塞通組（37mg／kg）。不同工藝1～3組按設(shè)定的劑量給小鼠灌胃，連續(xù)5d，第6d給藥后30min，測小鼠耐缺氧生存時間，試驗(yàn)用磨口瓶，容積125mL，每瓶內(nèi)加入鈉石灰70g，用凡士林瓶口密封，以小鼠呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠生存時間（min）。

3 結(jié) 果 3.1 工藝樣品指標(biāo)性成分的測定對3種工藝樣品中鹽酸小檗堿、芍藥苷、丹參酮ⅡA三個指標(biāo)性成分，分別按《中國藥典》的相應(yīng)色譜條件及方法進(jìn)行測定，計(jì)算轉(zhuǎn)移率，綜合上述評價(jià)結(jié)果，故選擇工藝3的提取方法，較為理想。結(jié)果如下。

表1 指標(biāo)成分測定結(jié)果（n＝2）

3.2 對垂體后葉素致心肌缺血大鼠第Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段變化的影響 結(jié)果如表2、3所示，在與模型組比較，各給藥組在垂體后葉素舌下注射后不同時段均有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01），其中解毒通脈膠囊工藝1在注射后1S、3S、5S、30S、1min、3min有顯著差異（P＜0.05）；工藝2在注射后10S、15S、30S有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）；工藝3在注射后1S、3S、30S、1min、3min有顯著差異（P＜0.05）；血塞通在注射后1S、3S、5S、30S、1min、3min有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果提示，解毒通脈膠囊工藝1、2、3組有一定程度改善Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段異常變化作用。

表2 對垂體后葉素致急性心肌缺血心電圖的影響（，n＝10－12）

表2 對垂體后葉素致急性心肌缺血心電圖的影響（，n＝10－12）

注：與對照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

表3 對垂體后葉素致急性心肌缺血心電圖的影響（，n＝10－12）

表3 對垂體后葉素致急性心肌缺血心電圖的影響（，n＝10－12）

注：與對照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

組 別給藥后不同時間點(diǎn)ST抬高的變化值／（mV）30s 1min 3min 5min 10min模型組 0.039±0.049 0.064±0.046 0.044±0.048 0.031±0.046 0.031±0.046工藝1 0.112±0.138△ 0.039±0.055△ 0.045±0.052△ 0.052±0.066 0.009±0.030工藝2 0.036±0.048△ 0.031±0.058 0.008±0.029 0.042±0.045 0.025±0.045工藝3 0.036±0.048△ 0.044±0.056 0.036±0.044 0.050±0.052 0.039±0.049血塞通 0.039±0.049△ 0.064±0.046▲ 0.044±0.048△0.031±0.046 0.031±0.046

3.3 對正常小鼠耐缺氧時間的影響 結(jié)果如表4所示，解毒通脈膠囊工藝2、3組，心得安及血塞通組小鼠耐缺氧時間顯著延長，與對照組比較有顯著差異（P＜0.05或P＜0.01），解毒通脈膠囊工藝1與對照組比較無顯著性變化。結(jié)果提示，解毒通脈膠囊工藝2、3組有一定抗小鼠缺氧的作用。

表4 對正常小鼠耐缺氧能力的影響（，n＝10－12）

表4 對正常小鼠耐缺氧能力的影響（，n＝10－12）

注：與對照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

工藝1 工藝2 工藝3心得安組 血塞通組生存時間／min 13.80±1.61 15.97±3.5116.98±3.71△ 17.60±3.23▲ 19.34±2.83▲ 23.60±3.47▲

4 討 論 解毒通脈膠囊由黃連、三七、蓮子心、全瓜蔞、半夏、萊菔子、丹參和赤芍八味中藥組成。該處方是由我院張翠英教授在《傷寒論》“小陷胸湯”基礎(chǔ)上加味而成。小陷胸湯方由黃連、半夏、瓜蔞三味中藥組成，具有清熱滌痰開結(jié)之功。在此基礎(chǔ)上加味形成的解毒通脈膠囊組方，以黃連、三七為主藥，黃連清熱解毒祛痰，三七活血化瘀止痛；蓮子心輔黃連清心熱、解郁毒，瓜萎、半夏、萊菔子寬胸散結(jié)化痰，丹參、赤芍活血化瘀，均為輔藥。全方雖主輔二類，但味少力專，具有清熱解毒、化痰祛瘀、宣痹通脈之功效，尤適于熱毒痰瘀型冠心病不穩(wěn)定型心絞痛。本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代化學(xué)提取方法結(jié)合藥理學(xué)效應(yīng)，篩選出解毒通脈膠囊抗心肌缺血的最佳工藝，對該處方的成藥性進(jìn)行研究。

結(jié)果表明解毒通脈膠囊工藝2、3中黃連、丹參、赤芍醇提中鹽酸小檗堿轉(zhuǎn)移率（%），芍藥苷轉(zhuǎn)移率（%）和丹參酮ⅡA轉(zhuǎn)移率（%）均較工藝1（水提）高，藥理學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)工藝2、3具有改善ST段異常升高（或降低）作用，顯著延長小鼠耐缺氧時間。因此，我們推測黃連、丹參、赤芍酯溶性成分可能是其防治心肌血的物質(zhì)基礎(chǔ)。經(jīng)文獻(xiàn)研究，鹽酸小檗堿具有對快速型室性心律失常具有良好的對抗作用；芍藥苷明顯降低垂體后葉素致心肌缺血大鼠T波變化的絕對值；明顯縮小冠脈結(jié)扎致急性心肌梗死犬心肌梗具有抗心肌缺血作用［3，4］；丹參酮ⅡA對大鼠急性心肌缺血具有顯著的保護(hù)作用，其機(jī)制與增加冠脈流量，抑制脂質(zhì)過氧化和改善心肌能量代謝有關(guān)。丹參酮ⅡA及混合物對急性心肌缺血的作用優(yōu)于丹酚酸B，尤其是對垂體后葉素所致的一過性心肌缺血［6］。故此，我們認(rèn)為解毒通脈膠囊的工藝2、3具有保護(hù)心肌缺血作用，可能的物質(zhì)基礎(chǔ)是鹽酸小檗堿，芍藥苷和丹參酮ⅡA。下一步將通過實(shí)驗(yàn)研究解毒通脈膠囊防治心肌缺血的作用機(jī)制，為其開發(fā)利用提供具體參考。

［1］王燕凌，苗智慧，牛麗靜，等.不同劑量黃連素對心肌缺血大鼠的抗氧化損傷作用［J］.河北中醫(yī)，2010（02）：267－9.

［2］白彩艷.鹽酸小檗堿對大鼠急慢性心肌缺血的保護(hù)作用［D］.吉林大學(xué)，2011：25.

［3］馮巧巧.中藥單體化合物—芍藥苷抗心肌缺血的作用及機(jī)制探討［D］.山東大學(xué)，2006：28.

［4］馮巧巧，劉玉娥，周亞偉，等.芍藥苷對冠脈結(jié)扎致實(shí)驗(yàn)性心肌梗死犬的保護(hù)作用［A］.中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集，2007.

［5］王守濤，史國兵，周 娟，等.丹參酮ⅡA靜脈乳劑對大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，（12）：1699－701.

［6］黃凱文，祝維峰，蘇 寧，等.丹參酮ⅡA和丹酚酸B抗心腦缺血的比較研究［J］.中國醫(yī)院用藥評價(jià)與分析，2009，（06）：449－52.