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    尿素包合法提純d——亞麻酸的研究

    2013-09-04 06:18:04李佩洪張紅粒吳銀明
    四川農(nóng)業(yè)科技 2013年11期
    關(guān)鍵詞:亞麻酸籽油石油醚

    □李佩洪 龔 霞 唐 偉 張紅粒 吳銀明

    四川是花椒生產(chǎn)和消費(fèi)的主要地區(qū),目前花椒已經(jīng)被開(kāi)發(fā)出了形式多樣的產(chǎn)品,但是花椒籽卻沒(méi)有被很好地利用起來(lái)。其實(shí),花椒籽中含有豐富的油脂(2 0%~2 5%),其油脂中含有1 7%~2 4%的α-亞麻酸和2 5%~3 2%的亞油酸,多種不飽和脂肪酸總量達(dá)4 2%~5 6%,經(jīng)精煉、脫色的花椒籽油中A L A的含量可達(dá)3 0%以上。A L A是人體必需的脂肪酸,對(duì)維持人體大腦和視網(wǎng)膜的正常發(fā)育具有重要作用。因此,花椒籽油中A L A的純化有可能成為花椒籽的有效利用途徑。

    一、尿素包合法原理

    尿素包合法分離混合脂肪酸酯,是基于脂肪酸的不飽和程度和碳鏈長(zhǎng)度不同的特點(diǎn)而進(jìn)行的。當(dāng)尿素溶解于乙醇等有機(jī)溶劑中,遇到直鏈脂肪酸、酯、醇等有機(jī)物時(shí),尿素分子之間通過(guò)強(qiáng)大的氫鍵,在有機(jī)物分子周?chē)纬蓪挻蟮牧骄担茨蛩匕衔?。尿素與脂肪族化合物形成包合物的基本條件是:第一,碳鏈必須大于4個(gè)碳原子;第二,碳鏈必須是直鏈。尿素包合法是一種較好的混合脂肪酸分離純化的方法,其尿素包合能力:棕櫚酸>硬脂酸>油酸>亞油酸>A L A,由于A(yíng) L A雙鍵較多,具有一定的空間結(jié)構(gòu),不易被尿素包合,采用過(guò)濾方法將尿素包合物除去,就可得到富含A L A的脂肪酸產(chǎn)品。

    二、材料與方法

    1.原料 花椒籽油,由陜西韓城顏聯(lián)祥老師提供。

    2.儀器與試劑 高效液相色譜儀(安徽皖儀)、真空泵(鞏義瑞德S H Z-D(Ⅲ))、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鞏義瑞德)、恒溫水浴鍋(鞏義瑞德R E-3 0 1)、電子天平(上海越平J A 2 0 0 3 B)、低溫冰箱(海爾)、干燥箱(B P G-9 0 1 0 A);氫氧化鈉、鹽酸、尿素、乙醇、石油醚、無(wú)水硫酸鈉均為分析純,冰乙酸、乙腈、甲醇均為色譜級(jí),超純水,α-亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)品。

    3.實(shí)驗(yàn)方法

    (1)花椒籽油混合脂肪酸制備 椒籽油∶1.0 m o L/LNa OH-乙醇1∶4,在6 0℃水浴上加熱回流4 0分鐘至溶液澄清透明。取下燒瓶,冷卻至室溫后,加入適量石油醚以除去不皂化物。然后放入冰箱,使皂析出,減壓抽濾除去過(guò)量乙醇。加入適量水,使皂溶解,再用1 0%鹽酸調(diào)其p H值至2~3,轉(zhuǎn)移到分液漏斗中,用石油醚萃取,靜置分層,分取上層有機(jī)相水洗至中性,通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的漏斗,濾液于5 0℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),回收石油醚,即得混合脂肪酸(F F A)。

    (2)方法 ①單因素試驗(yàn)。按照不同的F F A∶尿素,尿素:乙醇比例,首先量取一定量的乙醇(9 5%),放入錐形瓶中,加入不同量的尿素,于6 5℃水浴。待尿素完全溶解后,加入一定量的混合脂肪酸(F F A),混合均勻后,取出,于設(shè)定溫度下包合不同時(shí)間。所得尿素包合物結(jié)晶抽濾分離,濾液加入適量石油醚,用1 0%鹽酸酸化至p H值2~3,再加入適量水,充分萃取,靜置分層,分離有機(jī)相,用石油醚多次萃取水相,合并有機(jī)相,用蒸餾水反復(fù)沖洗至中性。最后將石油醚層通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的漏斗脫水干燥,濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)完石油醚,即得分離樣品。②正交設(shè)計(jì)。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,按L 9(3 4)正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn)。

    (3)色譜條件 用固定相為C 1 8柱,流動(dòng)相為乙腈:1%乙酸溶液(9∶1);檢測(cè)波長(zhǎng)為2 0 5 n m;流速為1.0 m L/分鐘;柱溫2 5℃;進(jìn)樣量2 0 μL。

    三、結(jié)果與分析

    1.混合脂肪酸與尿素的比例對(duì)提純率的影響 尿素與9 5%乙醇的比例為1∶3,包合時(shí)間為1 2小時(shí),包合溫度0℃,F(xiàn) F A與尿素的比例對(duì)提純率的影響如圖1:

    圖1

    由圖1可知,F(xiàn) F A與尿素的比例越高,A L A的提取純度越高,當(dāng)F F A:尿素為1∶4時(shí),A L A的濃度達(dá)到6 8.1 8%。

    2.尿素與乙醇的比例對(duì)提純率的影響 在F F A與尿素的比例為1∶2,包合時(shí)間為1 2 h,包合溫度0℃,尿素與乙醇的比例對(duì)提純率的影響如圖2:

    圖2

    由圖2可知,A L A的純度隨尿素與乙醇的比例增大而增大,當(dāng)尿素:9 5%乙醇為1∶3時(shí),A L A的提取純化率最高,達(dá)到5 8.2 4%,繼續(xù)增大尿素與乙醇的比例,A L A的純化率呈緩慢下降的趨勢(shì),可能是F F A更多的溶解在溶劑中沒(méi)有被尿素包合。

    3.包合溫度對(duì)提純率的影響 尿素與9 5%乙醇的比例為1∶2,在F F A與尿素的比例為1∶3,包合時(shí)間為1 2小時(shí),包合溫度對(duì)提純率的影響如圖3:

    圖3

    由圖3可知,整體呈現(xiàn)的趨勢(shì)是包合溫度越低,A L A純化率越高,當(dāng)溫度為-2 0℃時(shí),A L A的純化率最高,達(dá)到了5 8.3 3%。在5℃時(shí),A L A純化率為5 4.7 7%,比2 0℃時(shí),A L A純化率5 4.9 6%時(shí)低,可能是試驗(yàn)中的誤差導(dǎo)致的。

    4.包合時(shí)間對(duì)提純率的影響 尿素與9 5%乙醇的比例為1∶2,在F F A與尿素的比例為1∶3,包合溫度0℃,包合時(shí)間對(duì)提純率的影響如圖4:

    圖4

    由圖4可知,包合時(shí)間對(duì)A L A純化率的影響呈不規(guī)則變化,在包合1 2小時(shí),A L A純化率達(dá)到最大,為5 8.1 9%。這種不規(guī)則變化可能是由于尿素的包合過(guò)程與乙醇的溶解過(guò)程的相互轉(zhuǎn)換造成的。

    5.正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計(jì)L 9(3 4)正交試驗(yàn)表(如表1)。

    表1 正交試驗(yàn)因素水平表

    正交試驗(yàn)結(jié)果及分析見(jiàn)下表2、表3:

    表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

    表3 方差分析表

    F檢驗(yàn)結(jié)果表明,3個(gè)因素對(duì)產(chǎn)量的影響都不顯著。由于各因素對(duì)A L A提取純化率影響都不顯著,不必再進(jìn)行各因素水平間的多重比較。故從表2中選擇平均數(shù)大的水平A 3、B 1、C 3組合成最優(yōu)水平組合A 3 B 1 C 3。綜合單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)可以得出尿素包合法分離純化花椒籽油脂中A L A的最佳工藝參數(shù)是:F F A:尿素=1∶5,尿素∶9 5%乙醇=1∶2.5,包合溫度-2 0℃,包合時(shí)間為1 4小時(shí),A L A的濃度百分比可達(dá)6 6.2 9%。

    四、結(jié)論

    試驗(yàn)結(jié)果表明,尿素包合法作為初步分離多不飽和脂肪酸的一種方法,具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效等特點(diǎn),所用試劑易得,均可回收,適合于工業(yè)化生產(chǎn)。但與其它富含α-亞麻酸的植物油脂,如亞麻籽油(4 0%~6 0%)、紫蘇子油(5 6.1 4%~6 4.8 2%)等相比,花椒籽油中的α-亞麻酸,含量較低,分離難度較大,因此,要得到純度較高的α-亞麻酸,還需結(jié)合其它分離方法,如低溫結(jié)晶、多次尿素包合、硝酸銀-硅膠柱層析等方法進(jìn)一步純化。

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