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    益氣養(yǎng)陰方對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠免疫炎癥因子hs-CRP、sVCA M-1、s ICAM-1影響的實(shí)驗(yàn)研究

    2013-09-01 08:34:54竺春玲邵筱宏丁亞琴上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院上海200082
    江蘇中醫(yī)藥 2013年3期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)皮硬化中藥

    謝 心 吳 堅(jiān) 竺春玲 邵筱宏 丁亞琴(上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,上海200082)

    動(dòng)脈粥樣硬化是目前危害人類健康的主要疾病,具有很高的致死率和致殘率,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。許多學(xué)者認(rèn)為,動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與低水平慢性炎癥狀態(tài)密切相關(guān)[1-2]。目前,與動(dòng)脈硬化發(fā)病關(guān)系最密切、研究最多的炎癥因子是超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、可溶性細(xì)胞間黏附分子-1(sICAM-1)和血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(sVCAM-1)。 本研究通過(guò)觀察益氣養(yǎng)陰方對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠免疫炎癥因子hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1的影響,挖掘干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化免疫損傷的有效中藥復(fù)方,為中醫(yī)藥防治動(dòng)脈粥樣硬化提供一個(gè)研究思路。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供的SD雄性大鼠46只,4周齡,體重(200±10)g,清潔級(jí),許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0003。飼養(yǎng)地點(diǎn):上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物益氣養(yǎng)陰方(黃芪15g、黨參20g、麥冬15g、五味子6g、枸杞子15g、桑寄生15g)由上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑室制作,配成3g生藥/mL溶液備用。普伐他汀鈉,20mg/片,由上海三共制藥有限公司生產(chǎn)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1動(dòng)物分組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后,根據(jù)體重隨機(jī)分組編號(hào)。將46只SD大鼠隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組10只,模型組12只,中藥組12只,西藥組12只。

    1.2.2造模方法采用VitD3+高脂飼料喂養(yǎng):將150g維生素D3(VitD3,每克含VitD31×105IU)溶解于375mL蒸餾水中,配制成0.4g/mL,即4×104IU/mL的溶液。高脂飼料85kg,配方:80.3%大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料、2%膽固醇、2%魚(yú)粉、0.5%膽酸鈉、

    10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白砂糖(中國(guó)科學(xué)院上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司加工)。按7×105IU/kg的總劑量灌胃給予VitD3,分3d給完,之后每天喂高脂飼料15g,喂養(yǎng)8周。

    1.2.3 動(dòng)物飼養(yǎng)與給藥正常對(duì)照組只給予基礎(chǔ)飼料;其余各組動(dòng)物以VitD3灌胃3d,并每天喂高脂飼料15g,喂養(yǎng)8周。8周后,除正常對(duì)照組外,其余各組隨機(jī)取出2只殺死,解剖頸動(dòng)脈、胸主動(dòng)脈確定造模成功與否。在確定造模成功的前提下,以上各組在原有飼料喂養(yǎng)下,正常對(duì)照組、模型組給予同等劑量的生理鹽水灌胃,中藥組給予益氣養(yǎng)陰方,西藥組給予普伐他汀鈉。藥物劑量參照藥典,按動(dòng)物與成人的等效劑量換算。繼續(xù)喂養(yǎng)4周。所有動(dòng)物自由飲水。

    1.2.4 中藥血清的制備喂養(yǎng)滿4周結(jié)束時(shí)將大鼠麻醉,腹主動(dòng)脈取血,放入15mL離心管中,留作標(biāo)本,靜置1h后。3000r/min,離心0.5h,取上清,56℃水浴1h。用0.2μm濾器將各組血清分別注入1.5mLEppendorf管中,-20℃冰箱保存。

    1.2.5 檢測(cè)指標(biāo) 超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)采用乳膠免疫增強(qiáng)比濁法試劑盒,sVCAM-1、sICAM-1采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)。試劑盒購(gòu)自上海達(dá)安生物技術(shù)公司。以美國(guó)Bio-Rad公司的全自動(dòng)酶免分析儀檢測(cè)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。結(jié)果用(±s)表示。采用單因素方差分析,方差齊者用SNK法,方差不齊用Dunnett’s T3法。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    2.1 一般情況 整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間,各組動(dòng)物反應(yīng)靈敏,皮毛色白、致密有光澤,進(jìn)食活躍,活動(dòng)良好,體重增長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中正常對(duì)照組、模型組、中藥組及西藥組大鼠均無(wú)死亡。

    2.2 各組大鼠治療后血清sVCAM,sICAM-1及hsCRP含量情況 結(jié)果顯示,與模型組比較,益氣養(yǎng)陰方能明顯降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1指標(biāo)水平 (P<0.01);與西藥組比較,在降低模型大鼠sVCAM和hsCRP方面亦具有一定優(yōu)勢(shì)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 各組大鼠治療后血清sVCAM、sICAM-1及hsCRP水平

    3 討論

    益氣養(yǎng)陰方是在經(jīng)典名方生脈散基礎(chǔ)上加減化裁而來(lái),由黃芪、黨參、麥冬、五味子、枸杞、桑寄生等6味中藥組合而成。方中黃芪益氣帥血,黨參補(bǔ)中益氣為君;麥冬、五味子滋陰養(yǎng)心;桑寄生、枸杞子滋補(bǔ)肝腎以培陰精之本。諸藥合用,切中脈痹病機(jī),藥專力宏,共奏益氣養(yǎng)陰之功。反映中醫(yī)辨證論治的臨床特色,抓住動(dòng)脈粥樣硬化“本虛標(biāo)實(shí)”的病機(jī)特點(diǎn)[3],體現(xiàn)治病必求本,益氣養(yǎng)陰為先的特色。

    超敏CRP是最廣泛應(yīng)用的炎癥標(biāo)志物,是反映低度、持續(xù)炎癥的指標(biāo)[4]。動(dòng)脈粥樣硬化常伴有炎癥病變,超敏CRP可直接影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊與血栓形成,且已被證實(shí)是慢性炎癥引發(fā)心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[5-6]。它在體外可激活補(bǔ)體,誘導(dǎo)內(nèi)皮產(chǎn)生單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1),上調(diào)ICAM-1、VCAM-1,介導(dǎo)巨噬細(xì)胞攝入天然LDL,使單核細(xì)胞組織因子增加,引起動(dòng)脈內(nèi)膜損傷,最終導(dǎo)致斑塊和血栓形成。非活化內(nèi)皮細(xì)胞有低于正常的VCAM-1表達(dá)。標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化方法檢測(cè)不到正常血管上VCAM-1表達(dá),在體內(nèi)炎癥的病理?xiàng)l件下血管內(nèi)皮有VCAM-1表達(dá)[7]。VCAM-1在以上這些細(xì)胞表達(dá)同時(shí)分泌相應(yīng)的sVCAM-1。研究認(rèn)為VCAM-1介導(dǎo)的炎癥過(guò)程在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中起著極其重要的作用[8],在病變?cè)缙?,VCAM-1主要是促單核細(xì)胞向內(nèi)皮黏附、遷移,在進(jìn)展期,則促進(jìn)已遷入病灶的單核細(xì)胞位移,T淋巴細(xì)胞的激活,增加其他細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用。動(dòng)脈粥樣硬化被認(rèn)為是炎癥損傷的反應(yīng),血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后表達(dá)黏附分子,VCAM-1介導(dǎo)炎癥細(xì)胞黏附和侵入血管壁是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的早期步驟。隨著病程進(jìn)展,VCAM-1介導(dǎo)更多的細(xì)胞進(jìn)入斑塊,促使斑塊發(fā)展,同時(shí)影響斑塊的穩(wěn)定性。尤其在糖尿病病人sVCAM-1的水平越高,其心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)就越大。

    本研究發(fā)現(xiàn),益氣養(yǎng)陰方能明顯降低動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清hs-CRP、sVCAM-1、sICAM-1表達(dá),這為我們挖掘干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化免疫損傷的有效中藥復(fù)方來(lái)防治動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展提供了一個(gè)研究思路。

    [1] 王瑞英,禹遠(yuǎn)遠(yuǎn),王棉,等,血管內(nèi)皮功能與2型糖尿病患者大血管病變的關(guān)系.中國(guó)老年學(xué)雜志,2010,30(12):1730

    [2] 蔡穗珍.2型糖尿病內(nèi)皮功能紊亂與動(dòng)脈粥樣硬化.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,40(4):416

    [3] 孟國(guó)凡.動(dòng)脈粥樣硬化的中醫(yī)病因病機(jī)初探.云南中醫(yī)中藥雜志,2004,25(2):55

    [4] 惠玉芬,王興寧.超敏CRP與2型糖尿病及合并冠心病的關(guān)系分析.實(shí)用醫(yī)技雜志,2008,15(8)1013

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