高效液相色譜法單波長切換測定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸、氯霉素的含量

王 敏，張瑞麟，王逢春，李 勝

復(fù)方氯霉素醇溶液是一種外用復(fù)方制劑，收載于2002年版的《中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范，》(以下簡稱《規(guī)范》)［1］，由水楊酸、氯霉素和75%乙醇配制而成，用于治療脂溢性皮炎、皮疹、瘙癢等?！兑?guī)范》中采用中和滴定法和高效液相色譜法分別測定溶液中水楊酸和氯霉素的含量，但在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)測定所需時(shí)間較長，造成生產(chǎn)效率較低。目前，陸續(xù)有研究者報(bào)道采用高效液相色譜法測定氯霉素醇中水楊酸和氯霉素的含量，但方法有一定的局限性，無法用于配備單波長的紫外檢測器的高效液相色譜儀［2-8］。本文采用單波長切換的高效液相色譜法測定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸和氯霉素的含量，較已報(bào)道的方法更加簡便、快捷，準(zhǔn)確度高，能更有效地控制復(fù)方氯霉素醇溶液的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200 型高效液相色譜儀(包括四元泵、VWD 檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器、ChemStation 化學(xué)工作站);Mettler AE240 電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥 水楊酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:100106-200303);氯霉素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:130555-200602);復(fù)方氯霉素醇溶液(北京軍區(qū)總醫(yī)院263 臨床部提供，批號:20120326、20120617、20121029)。甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(55∶45);流速:1.0 ml/min;檢測波長:303 nm(0～4 min)，278 nm(4～7 min);柱溫:30℃，進(jìn)樣量:10 μl;檢測時(shí)間:7 min。

2.2 混合對照品溶液制備 精密稱取氯霉素和水楊酸對照品各100 mg，置于100 ml 量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，作為混合對照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液制備 精密量取復(fù)方氯霉素醇溶液供試品1 ml，置于200 ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，0.22 μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取10 μl 注入液相色譜儀，測定，即得液相色譜圖(圖1)。

圖1 復(fù)方氯霉素醇溶液高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取混合對照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，置于10 ml 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得不同濃度的系列對照品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測定峰面積。分別以水楊酸及氯霉素的濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)(X)，以其各自的峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為水楊酸:Y=20.22X +0.1769(r=0.9999，n=6);氯霉素:Y=24.97X +0.2418(r=0.9999，n=6)。結(jié)果表明，水楊酸和氯霉素在10.00～200.0 g/ml 范圍內(nèi)與其各自的峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取100.0 g/ml 混合對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積。結(jié)果水楊酸峰面積RSD 為0.74%(n=6)，氯霉素峰面積RSD 為0.54%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液(批號:20120326)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、8、12、24 h 各進(jìn)樣1 次，測定峰面積。結(jié)果水楊酸峰面積的RSD 為0.53% (n=6)，氯霉素峰面積的RSD 為0.82%(n=6)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號為20120326 的樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果水楊酸的平均含量為2.02%，RSD 為0.78%(n=6)，氯霉素的平均含量為1.97%，RSD 為0.98%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密量取水楊酸和氯霉素對照品，按復(fù)方氯霉素醇溶液處方配成80、100、120 g/ml 3 個(gè)濃度水平的樣品溶液，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算氯霉素和水楊酸的含量回收率，結(jié)果見表1。

表1 復(fù)方氯霉素醇溶液加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測定 取批號為20120326、20120617、20121029 的3份樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測定，結(jié)果樣品中水楊酸的含量分別為2.02%、2.04%、2.07%，氯霉素的含量分別為1.97%、2.01%、2.06%。

3 討論

目前，高效液相色譜法已廣泛應(yīng)用于各種制劑的含量檢測，保證了制劑在臨床使用中的安全性和有效性［9-13］。本文采用高效液相色譜法單波長切換測定復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸和氯霉素的含量，方法簡單快捷、準(zhǔn)確度高。

《規(guī)范》中原有的復(fù)方氯霉素醇溶液中水楊酸的含量測定采用了滴定法，氯霉素的含量測定采用了高效液相色譜法，測定氯霉素的含量通常需要約30 min，而本實(shí)驗(yàn)條件的檢測時(shí)間僅為7 min，縮短了樣品檢測時(shí)間，可以同時(shí)完成水楊酸和氯霉素的含量測定。而且，色譜峰型和理論塔板數(shù)均較理想，能夠達(dá)到復(fù)方氯霉素醇溶液質(zhì)量控制的要求。

水楊酸和氯霉素的最大吸收波長分別為303 nm 和278 nm［14］，通常無法在配備紫外檢測器的高效液相色譜儀上同時(shí)進(jìn)行含量測定。紫外檢測器一般只能在某一固定波長下測定單一組分的含量，對于多成分的同時(shí)測定往往無法實(shí)現(xiàn)［15］。如果使用多波長檢測器，對儀器的要求較高，且方法準(zhǔn)確度相對較低。本試驗(yàn)通過采用單波長切換的方法，使用紫外檢測器分別在水楊酸和氯霉素的最大吸收波長處測定其含量，具有較高的靈敏度，對儀器的要求較低，具有較高的應(yīng)用推廣價(jià)值。

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