一種藥物用高效液相色譜法檢測的方法學考證

孫崇華 吳偉 孫寶生

【摘 要】本文論述了藥物用高效液相色譜法含量測定的基本過程，為許多條件有限的實驗室進行相關研究提供了一種可行的實用方法。

【關鍵詞】含量測定；高效液相

本藥物收載于中華人民共和國衛(wèi)生部標準第十四冊，按照《藥品注冊管理辦法》、中藥、天然藥物分類及申報資料要求，已有國家標準的中成藥和天然藥物制劑的注冊申請，質(zhì)量標準應當有所提高。為此，對本藥物質(zhì)量標準進行了研究提高工作，除保留了原產(chǎn)品中華人民共和國衛(wèi)生部所規(guī)定的檢驗項目外，又建立了蛇床子素的含量測定，并進行了方法學考察。

1.成分

蠶蛾渣、海龍、蛇床子等。

2.含量測定方法

2.1儀器與材料

2.1.1儀器

島津高效液相儀（泵LC-10ATVP 紫外檢測器SPD-10AVP）。

2.1.2材料

實驗樣品、蛇床子素對照品、其它試劑均為分析純。

2.2試驗的條件及方法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙晴-水（65：35）為流動相；檢測波長為322nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計算應不底于3000。

對照品溶液的制備：精密稱取蛇床子素對照品適量，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品適量，研細，取約2g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25ml。稱定重量，放置兩小時，超聲處理（功率300w，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量。精密量取上清液5ml，置10ml的量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖均，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3考察項目

2.3.1空白試驗

按處方組成份量，取蛇床子外的其余藥味按工藝要求制成缺蛇床子樣品，同供試品溶液制備方法制得空白對照溶液。

取空白對照溶液與供試品溶液及對照品溶液各10μl，依次注入液相色譜儀，測定?？瞻讓φ杖芤涸谂c對照品溶液相應的位置上不出峰，說明空白無干擾。

2.3.2線性關系考察

（1）相關系數(shù)及直線回歸方程：

相關系數(shù)：是表示兩個變量間直線關系親密程度和相關方向的統(tǒng)計指標，用γ表示。

直線回歸方程：在直線回歸分析得到一個直線方程，成為直線回歸方程.公式如下：

Y=b+aX

（2）分析方法：

分別取對照品溶液濃度為2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml各10μl注入液相色譜儀，測得峰面積，以點樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得一直線。

2.3.3精密度試驗

同一供試品溶液依法測量8次，考察儀器的精密度。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗

按擬定的含量測定方法，取同一批樣品6份，同一供試品溶液依法測量2次.計算相對標準偏差（RSD），檢驗方法的重現(xiàn)性。

2.3.5回收率試驗

取同一批樣品6份準確稱取蛇床子對照品適量加入已知含量的樣品（約為測定方法中樣品的半量）中，按正文含量測定方法測定，計算回收率。

3.結(jié)果

3.1空白試驗的結(jié)果

表1 空白試驗結(jié)果

按處方組成份量，取蛇床子外的其余藥味按工藝要求制成缺蛇床子樣品，注入液相色譜儀，測定。樣品溶液在與對照品溶液相應的位置上不出峰，說明空白無干擾。

3.2線性回歸方程與相關系數(shù)

表2 不同濃度對照品含量測定的試驗結(jié)果

根據(jù)上述濃度與峰面積的關系，得出：

γ=0.9999 b=20245.8737 a=-1677.5911

線性回歸方程：

y=-1677.5911+20245.8737x

3.3精密度試驗的結(jié)果

表3 樣品測量8次的試驗結(jié)果

同一供試品溶液依法測量8次， RSD=1.91%。說明儀器的精密度較好。

3.4重現(xiàn)性試驗結(jié)果

表4 重現(xiàn)性的試驗結(jié)果

取樣品6份，按正文含量測定法操作， RSD=1.50%。說明儀器的精密度較好。

3.5回收率試驗結(jié)果

表5 已知樣品含量的測定結(jié)果

表6 加入蛇床子對照品后樣品的試驗結(jié)果

表7 回收率測定結(jié)果

回收率平均值102.54%，RSD=1.81%。

4.結(jié)論

本品的含量測定使用高效液相色譜儀，有較好的線性。試驗測得精密度，重現(xiàn)性，回收率均符合規(guī)定。說明高效液相色譜儀能夠完成對本藥物的含量測定。

通過前述的空白、線性關系、精密度、重現(xiàn)性和回收率五項試驗，根據(jù)求得的RSD的結(jié)果可知，本次試驗的設計方法是可行的、結(jié)果是準確可靠的，對本藥物的含量測定方法做出有效的論證。建議今后藥品生產(chǎn)企業(yè)對本藥物的含量測定可根據(jù)上述方法進行。

【參考文獻】

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[2]中華人民共和國國家藥典委員會中藥材顯微鑒別彩色圖鑒一冊.二冊.人民衛(wèi)生出版社，2010.

[3]呂圭源，王一濤.中藥新產(chǎn)品開發(fā).人民衛(wèi)生出版社.