不同來(lái)源枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸含量比較研究

郭 娜 徐榕青 林文津 張亞敏 林玉霖

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350003;2.福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，福建省醫(yī)學(xué)測(cè)試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350001;3.福建省莆田市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，福建 莆田 351100

枇杷葉為薔薇科枇杷屬常綠小喬木枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Linld.干燥葉，是常用傳統(tǒng)中藥，也是福建道地藥材之一。枇杷葉味苦，微辛，性微寒，歸肺、胃經(jīng)，具有清肺鎮(zhèn)咳、降逆止嘔的治療功效［1］?，F(xiàn)代藥理研究表明，枇杷葉主要成分為三萜酸類的齊墩果酸、熊果酸，具有抗炎、抗病毒、降低血糖等作用［2－4］?，F(xiàn)行版中國(guó)藥典已將齊墩果酸、熊果酸含量測(cè)定列入枇杷葉項(xiàng)下質(zhì)量控制項(xiàng)目。福建枇杷葉不僅資源儲(chǔ)量大，而且枇杷葉種源極為豐富。本研究采用HPLC法比較福建不同種源枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸含量，旨在為枇杷葉的采收及品質(zhì)評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 材料 不同種源枇杷葉共23份，其中19份采自福建莆田常太枇杷葉GAP生產(chǎn)基地，樹(shù)齡5年;4份采自莆田常太鎮(zhèn)野生枇杷樹(shù)。所有樣本經(jīng)福建莆田市中醫(yī)藥研究所林力強(qiáng)鑒定，憑證標(biāo)本存于福建莆田醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所標(biāo)本室。

1.2 儀器及試劑 LC－20A液相色譜儀(島津公司);AL204型電子分析天平(梅特勒－托利多公司);5L/H50w型超純水機(jī)(艾科浦公司);KQ2200E型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。齊墩果酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110709－201206)、熊果酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110742－200519)，乙腈、甲醇(色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 齊墩果酸、熊果酸含量測(cè)定多采用HPLC法［5－8］，齊墩果酸和熊果酸是一對(duì)結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)相近的同分異構(gòu)體，常以結(jié)合或游離的形式同時(shí)存在于植物中，較難分離［9］。為了同時(shí)檢測(cè)出兩種成分，并得到較高的響應(yīng)，選擇210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

色譜條件:色譜柱為 Inertsil ODS－SP(5μm，4.6×250mm);乙腈－甲醇－醋酸銨(67:12:21)為流動(dòng)相;柱溫:室溫;進(jìn)樣量10μl;檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。此色譜條件下齊墩果酸與熊果酸分離度良好，理論塔板數(shù)不低于5000。

2.2 溶液的制備 取枇杷葉粉末1g，精密稱定，按料液比1:50加入95%乙醇，超聲萃取30min，過(guò)濾，濾液濃縮，靜置備用。加95%乙醇定容至5ml，用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱量齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別制成0.5mg·ml－1的對(duì)照品溶液。

2.3 線性關(guān)系 精密吸取齊墩果酸與熊果酸對(duì)照品溶液，分別制成濃度為 0.3125、0.625、1.25、2.5、5μg·ml－1和1.25、2.5、5、10、20μg·ml－1的溶液，用 0.45μm 的微孔濾膜，取續(xù)濾液進(jìn)樣，以色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=49287x－18238，R2=0.9919(n=5)，熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=41244x+1546，R2=0.9981(n=5)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一濃度對(duì)照品溶液，反復(fù)進(jìn)樣6次，齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD分別為0.6%和0.8%，表明儀器的精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一供試樣品粉末6份，按上述方法分別獨(dú)立制備供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)。齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD值分別為1.4%與1.3%，方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶，分別在0、1、2、4、6、10、24h進(jìn)樣檢測(cè)，齊墩果酸與熊果酸色譜峰峰面積的RSD值分別為1.8%與2.0%，24小時(shí)內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率 齊墩果酸、熊果酸平均加樣回收率分別為98.5%(n=6)和101.2%(n=6)。

2.8 樣品測(cè)定 取23個(gè)福建不同種源枇杷葉樣本，按上法制備供試品溶液產(chǎn)并進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 福建不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸含量

3 討論

23個(gè)不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸總量具有顯著差異性?？偭孔罡哒邽榻夥喷姺N源枇杷葉(1.78%)，最低者為湖南白沙種源枇杷葉(0.57%)，兩者相差三倍多。齊墩果酸、熊果酸含量最高的均為解放鐘種源枇杷葉，分別為0.29%和1.49%;齊墩果酸含量最低的為夾腳種源枇杷葉(0.09%)，熊果酸含量最低為湖南白沙種源枇杷葉(0.45%)。

解放鐘、早鐘6號(hào)、長(zhǎng)紅3號(hào)為福建枇杷主栽品種，也是福建枇杷葉的主要來(lái)源，實(shí)驗(yàn)表明這三個(gè)種源枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸總量較高，平均高達(dá)1.60%，是中國(guó)藥典含量規(guī)定的2倍以上，提示解放鐘、早鐘6號(hào)、長(zhǎng)紅3號(hào)福建枇杷葉具有較高的藥用品質(zhì)。

與采自福建枇杷葉GAP基地的樣本相比，單邊種、湖南白沙、軟條白沙、夾腳4個(gè)野生枇杷葉中齊墩果酸、熊果酸總量較低，平均僅為0.72%。其中湖南白沙、夾腳的總量低于中國(guó)藥典含量規(guī)定(齊墩果酸、熊果酸總量不低于0.7%)，為不合格品。對(duì)于同一種源枇杷葉野生品與栽培品的化學(xué)成分比較，有待進(jìn)一步研究。

枇杷品種極為豐富，初步統(tǒng)計(jì)有14個(gè)種，1個(gè)新變種，600多個(gè)品種［10］。枇杷作為經(jīng)濟(jì)作物，近年來(lái)主要從其果實(shí)的豐產(chǎn)性、抗逆性、商品性及耐貯性等角度出發(fā)，選育推廣了一系列新品種，但品種繁雜也給枇杷葉的藥用品質(zhì)帶來(lái)重要影響。實(shí)驗(yàn)表明不同種源枇杷葉中齊墩果酸與熊果酸總量具有顯著性差異，因此枇杷葉藥材的采收有必要考慮種源因素，以保證福建主要道地藥材枇杷葉的優(yōu)良品質(zhì)。

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