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    三種血清學(xué)方法在IgG抗體鑒定中的應(yīng)用比較

    2013-08-24 07:44:28聶益軍吳紅
    關(guān)鍵詞:抗人紅細(xì)胞抗體

    聶益軍,吳紅

    (1、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 南昌330006;2、江西省血液中心,江西 南昌330077)

    血清抗體鑒定是臨床輸血前一項(xiàng)重要的檢測(cè)工作。血清抗體通常采用聚凝胺法和間接抗人球法檢測(cè),間接抗人球法是經(jīng)典的IgG抗體檢測(cè)方法,但由于耗時(shí)較長(zhǎng)(約1h),在緊急情況下,采用此方法易耽誤病人的診斷與治療,LIM間接抗人球法檢測(cè)血清IgG抗體可大大縮短檢測(cè)時(shí)間。為了對(duì)上述3種檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)判,我們實(shí)驗(yàn)室特將聚凝胺法、間接抗人球法、LIM間接抗人球法進(jìn)行比較,分析評(píng)價(jià)這3種方法的優(yōu)缺點(diǎn)?,F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源 選取本院已確定的抗-D、抗-E及抗-Tja(效價(jià)分別為 1:4、1:16、1:32)3 種抗體。 3 種抗體分別來自:⑴抗-D抗體—孕期為16周的孕婦,有1次生育史及1次流產(chǎn)史;⑵抗-E抗體—患地中海貧血的6歲男孩,有多次輸血史;⑶抗-Tja抗體—有一次流產(chǎn)史的女性。

    1.2 試劑與儀器 儀器:離心機(jī)KA-2200(日本)、電熱恒溫水浴箱(廣東汕頭)。試劑均由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供:抗人球蛋白試劑 (批號(hào)為20130116);譜細(xì)胞(批號(hào)為 20130419);改良凝聚胺試劑盒(批號(hào)為20121212)。

    1.3 方法 將抗-D、抗-E及抗-Tja血清分別倍比稀釋至第8管,每管加入含相應(yīng)抗原的2%~3%的紅細(xì)胞懸液,分別采用聚凝胺法、間接抗人球法和LIM間接抗人球法3種方法進(jìn)行檢測(cè)[1]。將各種稀釋的抗血清做血清抗體鑒定試驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    觀察能檢出最后1+的凝集強(qiáng)度為標(biāo)準(zhǔn)的稀釋管號(hào)為判定結(jié)果,即后一管則達(dá)不到1+的凝集強(qiáng)度。結(jié)果見表1。

    表1 稀釋后的抗體鑒定結(jié)果

    3 討論

    血清抗體分為完全抗體(IgM類)和不完全抗體(IgG類),其中完全抗體多為天然產(chǎn)生的,而不完全抗體多為免疫抗體,通常由輸血和妊娠免疫刺激產(chǎn)生[2],本次調(diào)查的含有血清抗體的人群也均有妊娠史或輸血史(見材料1.1)。不完全抗體(IgG類)檢測(cè)方法常用酶法、間接抗人球蛋白試驗(yàn)、聚凝胺法和微柱凝膠技術(shù)等。由于酶法檢測(cè)抗體時(shí)必須要考慮不同的酶對(duì)不同血型系統(tǒng)的影響不盡相同甚至是迥然不同[3],所以在臨床一般是針對(duì)性的應(yīng)用。微柱凝膠技術(shù)靈敏性較高,但所需儀器設(shè)備及檢測(cè)費(fèi)用較高,不適宜在基層醫(yī)院開展應(yīng)用。臨床上較為常用的檢測(cè)IgG類抗體的方法是聚凝胺法和間接抗人球法。

    凝聚胺(Polybrene)是帶有正電荷的大分子物質(zhì),能夠中和紅細(xì)胞膜唾液酸組成的負(fù)電荷,減少細(xì)胞間靜電斥力,使細(xì)胞間距縮短,離心后可見凝集反應(yīng),非特異性的凝集可被帶負(fù)電荷的重懸液(枸櫞酸鈉)消除,而特異性的抗體引起的免疫性凝集則不會(huì)散開。聚凝胺法具有操作簡(jiǎn)便、快速、易推廣的特點(diǎn)。從表1可以看出,凝聚胺法的靈敏度較高,相對(duì)間接抗人球法而言平均高出2個(gè)滴度(2管)[4],可應(yīng)用于效價(jià)較低的抗體檢測(cè)。但由于聚凝胺法在判定結(jié)果時(shí)需要反向觀察,即從凝集塊輕輕搖動(dòng)直至其散開,判讀結(jié)果時(shí)對(duì)結(jié)果的凝集程度不易把控,而且按要求在1min內(nèi)觀察,對(duì)于臨界時(shí)間也不易判斷結(jié)果。因此聚凝胺法在判定結(jié)果時(shí)受主觀因素的影響較大,結(jié)果的準(zhǔn)確性方面不及間接抗人球法客觀。

    臨床常用的不規(guī)則抗體篩查技術(shù)中抗人球蛋白法被認(rèn)為是理論上最明確、最準(zhǔn)確的方法,是檢測(cè)血清中IgG類不規(guī)則抗體的金標(biāo)準(zhǔn),在與聚凝胺法結(jié)果存在不一致時(shí),通常以間接抗人球法為準(zhǔn)[1]。但由于費(fèi)時(shí),在時(shí)間緊迫或臨床搶救時(shí)其臨床運(yùn)用受限。在間接抗人球法的基礎(chǔ)上加上LIM使試驗(yàn)方法更加敏感。利用低離子強(qiáng)度溶液降低離子強(qiáng)度,加速分子運(yùn)動(dòng),減弱紅細(xì)胞靜電斥力,減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云,縮短紅細(xì)胞間距,從而促進(jìn)血清 (漿)中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合,37℃孵育時(shí)間大大縮短 (從30min減少至10min),檢測(cè)結(jié)果與經(jīng)典的間接抗人球蛋白法完全一致,見表1。因此在通常情況下采用LIM間接抗人球法可以替代間接抗人球法。由于采用LIM間接抗人球法時(shí)需要等比例加入LIM溶液,因此在有些試驗(yàn)中難以實(shí)現(xiàn)LIM溶液與血清等體積時(shí),建議不采用此種方法進(jìn)行試驗(yàn),如抗體鑒定檢測(cè)(血清在不斷稀釋),ABO放散液檢測(cè)(放散液的體積隨紅細(xì)胞的量而改變)。

    [1]胡麗華.臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:47-53.

    [2]劉福昌,陳火玲,王小紅.聚凝胺法篩選和鑒定不規(guī)則抗體的應(yīng)用[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2005,22(2):176-177.

    [3]張晨光,張婧婧,龐桂芝,等.血型不規(guī)則抗體檢測(cè)的方法學(xué)評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,25(12):929-933.

    [4]陳和平,向東,朱俊,等.改良聚凝胺方法對(duì)4份弱抗體特異性的檢測(cè)[J].中國(guó)輸血雜志,2001,14(3):158-159.

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