高效液相色譜法測定小兒清炎合劑中原兒茶醛的含量

涂 瓊，盧慶紅

（江西省兒童醫(yī)院藥劑科，南昌 330006）

小兒清炎合劑是江西省兒童醫(yī)院的特色制劑，由白花蛇舌草、烏蕨、地錦、鐵莧四味藥經(jīng)水煎煮、過濾、濃縮而成，具有清熱解毒、抗菌、抗病毒及消炎等作用，臨床上主要用于治療小兒細菌性或病毒性感染，如支氣管炎、肺炎、扁桃體炎及腸胃炎等，療效確切，不良反應小，十幾年被本院廣泛運用于臨床。烏蕨具有清熱、解毒、利濕、止血的功效，為方中的主藥之一，現(xiàn)有質(zhì)量標準中烏蕨的有效成分原兒茶醛只用薄層色譜法進行定性鑒別，未作含量測定，為更有效地保證醫(yī)院制劑的質(zhì)量，本研究建立高效液相色譜法測定小兒清炎合劑中原兒茶醛的含量[1-2]，方法簡便、可行、靈敏，結(jié)果準確，適用于小兒清炎合劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

SHIMDIU高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器，Class-vp色譜工作站（日本島津）；原兒茶醛對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：110810-200505），小兒清炎合劑（江西省兒童醫(yī)院制劑室，批 號 ：090515、090529、090610、090619、090626）， 甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm），流動相：甲醇-1%冰醋酸溶液（12∶88）；檢測波長：280 nm，流速 0.9 mL·min-1；進樣量 20 μL；柱溫：35 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取原兒茶醛對照品適量，加甲醇溶解制成1.3 g·L-1的溶液，作為儲備液，備用。

2.2.2 供試品溶液

精密量取小兒清炎合劑1 mL，置5 mL量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照液

按小兒清炎合劑處方比例及工藝制備方法，制備缺烏蕨的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含烏蕨的陰性對照液。

2.3 系統(tǒng)適應性及專屬性考察

分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，陰性對照品溶液在原兒茶醛峰位置無吸收峰，原兒茶醛與其他組分峰基線分離良好，理論塔板數(shù)按原兒茶醛計算應不于低于5 000，分離度大于1.5，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 線性關系考察

精密吸取原兒茶醛對照品儲備液適量，用流動相稀釋至 1.3、2.6，3.9、7.8、10.4、15.6 mg.L-16 個不同濃度，搖勻，分別吸取上述對照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀進行測定。將所測得的原兒茶醛峰面積Y與濃度X進行回歸，得方程：Y=6 3737.75X+15 198.57，r=0.999 6，n=6，表明原兒茶醛在 1.3～15.6 mg·L-1濃度范圍內(nèi)峰面積對濃度的線性關系良好。

2.5 精密度實驗

精密吸取“2.4”項下對照品溶液（每1 mL含原兒茶醛 0.0104 mg）20 μL，在上述色譜條件下，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積，結(jié)果測得原兒茶醛峰面積值為 663 243、659 577、677 131、665 055、665 680，RSD為0.60%，表明精密度良好。

2.6 重復性實驗

取同一批號樣品5份，按“2.2.2”項下供試品處理方法處理樣品，按上述色譜條件測定，測得樣品原 兒 茶 醛 含 量 分 別 為 36.20、35.85、36.15、36.47、36.02 mg·L-1，RSD 為 0.64%，表明重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取同一批號樣品溶液，按供試品溶液制備方法制備樣品，精密吸取供試品溶液20 μL，按上述色譜條件測定，在0、2、4、8 h分別按上述色譜條件進樣測定，測得峰面積的RSD為0.75%，結(jié)果表明，樣品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗

精密移取已知原兒茶醛含量（7.34 mg·L-1）的小兒清炎合劑9份，分別加入高、中、低3個濃度的原兒茶醛對照品儲備液各3份，按“2.2.2”項下制備樣品溶液，分別進樣20 μL測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

2.9 樣品含量測定

取小兒清炎合劑5批，按照“2.2.2”項下制配樣品溶液，進樣20 μL測定，記錄峰面積，以外標法計算樣品中原兒茶醛含量，其平均值分別為7.35、7.38、7.42、7.24、7.34 mg·L-1，RSD 值分別為 0.65%、0.82%、0.53%、0.78%、0.89%（n=3）。

3 討論

在流動相的配比中曾采用不同濃度甲醇-水系統(tǒng)、甲醇-醋酸溶液進行分離，最終發(fā)現(xiàn)采用甲醇-1%醋酸溶液作為流動相能做到較好分離，且穩(wěn)定性好。原兒茶醛對照品溶液用甲醇稀釋，有拖尾峰出現(xiàn)，而以流動相稀釋可得到較好的峰形。

提取方法考察采用將樣品用鹽酸調(diào)pH值為2～3，再用乙酸乙酯提取2次，合并乙酸乙酯液，水浴上蒸干，殘渣用流動相溶解、濾過、進樣，結(jié)果與將樣品直接用流動相稀釋后，濾過，進樣測定的結(jié)果相差不大。

小兒清炎合劑是經(jīng)水煎煮濃縮而成，原兒茶醛為從烏蕨葉中分離得到的主要成分之一[3]，溶于水，所以本實驗將樣品采用流動相直接稀釋，0.45 μm微孔濾膜過濾后測定，結(jié)果表明，本法分離效果好，重復性、回收率良好，方法簡便，易于操作，適用于小兒清炎合劑的質(zhì)量控制。

[1] 趙慶華，王寶全，王海龍.高效液相色譜法測定耳聰顆粒中原兒茶醛的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2008，28（12）：1039-1040.

[2] 齊永秀，曹明亮，萬建建，等.高效液相色譜法測定白花丹參根、莖、葉中丹參素和原兒茶醛的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27（12）：1772-1773.

[3] 任冰如，李維林.烏蕨的研究進展[J].中國野生植物資源，2006,25（2）:12-14.