三酰甘油對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的影響

張光永，許 艷（四川省宜賓市中心血站 644000）

梅毒是由蒼白密螺旋體引起的一種性傳播疾病，具有較強(qiáng)的傳染性。梅毒螺旋體（TP）對(duì)人的黏膜及皮膚有很強(qiáng)的親和性，主要通過性接觸傳播，輸血也是重要傳播途徑，為我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血必查血清學(xué)項(xiàng)目。近年來，無(wú)償獻(xiàn)血者中感染梅毒的情況愈來愈多，給輸血安全帶來了嚴(yán)重挑戰(zhàn)。目前國(guó)內(nèi)血站最常用的TP檢測(cè)方法為TP-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），該方法簡(jiǎn)單快速、靈敏度高、特異性好，適合于儀器自動(dòng)化大批量血液樣本檢測(cè)。但ELISA影響因素多，標(biāo)本中內(nèi)源性干擾因素（包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等）和外源性干擾因素（如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全等）均會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性［1］。國(guó)內(nèi)對(duì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的干擾因素探討較多，容易忽略導(dǎo)致假陰性的干擾因素。無(wú)償獻(xiàn)血檢測(cè)的樣本是在采集血液時(shí)同步留取，血液采集時(shí)間跨度較大，采集到脂血樣本的現(xiàn)象較嚴(yán)重。本研究隨機(jī)收集不同滴度的TP抗體陽(yáng)性樣本，以蒸餾水和不同濃度乳糜血漿做稀釋，探討三酰甘油（TG）對(duì)ELISA檢測(cè)TP抗體的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)收集經(jīng)TP-ELISA檢測(cè)的高、中和低滴度TP抗體陽(yáng)性的無(wú)償獻(xiàn)血者血漿樣本各1例，TG在正常參考值范圍，陽(yáng)性樣本均經(jīng)過梅毒螺旋體明膠凝聚試驗(yàn)（TPPA）確認(rèn)；同時(shí)隨機(jī)收集TP抗體陰性且TG濃度為高、中、低不同的脂血漿各1份，TPPA確認(rèn)陰性。

1.2 試劑與儀器 以北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司TPELISA二步法檢測(cè)試劑盒，瑞士TECAN公司RSP150型全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)，瑞士哈美頓公司FAME24／20全自動(dòng)酶免儀進(jìn)行TP檢測(cè)，操作步驟和結(jié)果判讀按說明書要求進(jìn)行。以日本東芝公司TBA40-FRAccute全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測(cè)TG。

1.3 方法 將收集的3例TP抗體陽(yáng)性樣本用蒸餾水做1∶10倍稀釋，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，同時(shí)將3例TP抗體陽(yáng)性樣本均用3份不同TG濃度的脂血漿做1∶10倍稀釋，為高、中、低濃度TG實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組樣本進(jìn)行TP抗體和TG檢測(cè)，每例樣本平行檢測(cè)5次，記錄A值和TG濃度。TP抗體檢測(cè)陰性對(duì)照A值的均值為0.006，樣本A值大于或等于0.186為陽(yáng)性；TG正常參考值范圍為0.40～1.69mmol／L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

用不同TG濃度的脂血漿10倍稀釋樣本后與相應(yīng)對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組樣本TP抗體的A值均降低，不同滴度TP抗體陽(yáng)性樣本各實(shí)驗(yàn)組A值與相應(yīng)對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），高、中滴度TP抗體陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組之間A值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），低滴度TP抗體弱陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組之間A值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組TP-ELISA檢測(cè)A值結(jié)果見表1。高、中滴度TP抗體陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組定性判讀結(jié)果與對(duì)照組一致，均為陽(yáng)性；低滴度TP抗體弱陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組定性判讀結(jié)果與對(duì)照組不一致，對(duì)照組為陽(yáng)性，低滴度TP抗體弱陽(yáng)性樣本定性結(jié)果為陰性，見表1。

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A值和TP定性判讀結(jié)果

3 討 論

從1998年起我國(guó)實(shí)行無(wú)償獻(xiàn)血制度，血液全部來源于健康公民自愿無(wú)償獻(xiàn)血，為了滿足臨床用血需求，血站加大采血力度，延長(zhǎng)流動(dòng)采血車街頭采血時(shí)間，獻(xiàn)血者也方便在街頭流動(dòng)獻(xiàn)血車參加獻(xiàn)血。流動(dòng)采血由于條件限制只能操作簡(jiǎn)單快速的篩查，采集前未能進(jìn)行TG檢測(cè)，采集到高脂血液比例在增加，脂血離心后血漿呈明顯乳白色渾濁不透明，嚴(yán)重影響血液檢測(cè)和血液質(zhì)量，主要的影響物質(zhì)就是內(nèi)源性TG。

近年來，我國(guó)各地獻(xiàn)血者梅毒陽(yáng)性率的報(bào)道均呈逐年上升趨勢(shì)［2-3］。據(jù)衛(wèi)生部發(fā)布的全國(guó)法定傳染病疫情概況，最近幾年梅毒一直是處在報(bào)告發(fā)病數(shù)第3位。血液在4℃條件儲(chǔ)存24～72hTP失去活性，經(jīng)輸血感染的危險(xiǎn)性小，但由于濃縮血小板等儲(chǔ)存時(shí)間短，要求在24h內(nèi)輸注，儲(chǔ)存條件也不是4℃，輸入含有TP的此類血液可導(dǎo)致TP的感染，我國(guó)規(guī)定獻(xiàn)血者必須進(jìn)行TP檢測(cè)。TP常用的檢測(cè)方法有非特異性的方法包括快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)和甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)，特異性的方法包括TP血球凝集試驗(yàn)、TPPA和ELISA［4］。ELISA具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、便于自動(dòng)化檢測(cè)以及標(biāo)本量大等優(yōu)點(diǎn)，非常適合血站對(duì)血液的篩查［5-6］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高濃度TG明顯影響ELISA檢測(cè)TP抗體，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組TP抗體的A值明顯降低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。高、中滴度TP抗體陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組之間A值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高濃度TG對(duì)高、中滴度陽(yáng)性樣本TP抗體檢測(cè)有影響，但A值并不隨TG濃度的增加而顯著下降。高、中滴度TP抗體陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組定性判讀均為陽(yáng)性，與對(duì)照組一致。低滴度TP抗體弱陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)組之間A值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著TG濃度的增加A值顯著下降，定性判讀對(duì)照組結(jié)果為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)組結(jié)果為假陰性，且TG濃度越高對(duì)TP抗體的A值和定性判讀影響越大。

脂濁血漿樣本為渾濁外觀，血漿黏度加大，主要為含有大量TG的脂蛋白引起。含有大量TG的脂蛋白體積比TP抗體大，在孵育過程中具有屏蔽效應(yīng)，阻礙了TP抗體與固相的充分結(jié)合，從而導(dǎo)致A值降低，弱陽(yáng)性樣本甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果。振蕩孵育加速了反應(yīng)杯中物質(zhì)的運(yùn)動(dòng)，有利于梅毒抗體和固相的結(jié)合，能夠提高檢測(cè)靈敏度，但是現(xiàn)在缺乏專用的設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)。為了加強(qiáng)血液質(zhì)量，防止經(jīng)輸血傳染疾病，我國(guó)部分血站已采取核酸聯(lián)合檢測(cè)輸血傳染病指標(biāo)，核酸檢測(cè)不受脂血、溶血等影響，但由于投入高，對(duì)人員和試驗(yàn)條件要求嚴(yán)格，在基層血站還不能很快推廣，也有報(bào)道核酸檢測(cè)不適合梅毒的血清學(xué)診斷［7-8］，我國(guó)血站主要還是采用ELISA檢測(cè)梅毒。

健康成人空腹12～14h后TG就恢復(fù)正常，無(wú)償獻(xiàn)血者均要求為健康成人。TG是血漿中固有的成分，不能完全從血液中清除，只要控制在正常水平就不會(huì)影響血液檢測(cè)。健康成人最好的控制方式就是注意飲食的合理搭配，減少高脂高蛋白過量攝入。全國(guó)采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)該加大無(wú)償獻(xiàn)血宣傳力度，獻(xiàn)血者減少獻(xiàn)血前高脂高蛋白的攝入，做好固定定時(shí)獻(xiàn)血準(zhǔn)備，減少高脂高蛋白餐后街頭流動(dòng)不規(guī)則獻(xiàn)血，增加定期獻(xiàn)血，有利于減少脂血比例。

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