青藤祛濕外敷散對豚鼠的長期毒性研究

夏 暢，郭玉巖，呂邵娃，張艷惠，崔東琦，李永吉

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040)

風(fēng)濕痹證是是臨床常見的疑難病，在國內(nèi)外均有較高發(fā)病率.西藥治療長期使用，會產(chǎn)生惡心嘔吐、皮疹、肝腎損害等不良反應(yīng).與西醫(yī)治療相比，中醫(yī)藥對風(fēng)濕痹證的治療研究，已積累了精辟的理論和實踐經(jīng)驗，高效、低毒的特點使其備受青睞.明代《普濟方》[1]第五冊諸疾治風(fēng)濕痹門中記載:青藤根三兩，防己一兩，右咀，酒瓶煮，徐徐服之，用于風(fēng)濕痹癥的治療.青藤祛濕外敷散是以此方為基礎(chǔ)，從方便患者使用和減小毒副作用角度，研制的適合于風(fēng)濕痹證的經(jīng)皮給藥制劑.為評價其臨床長期用藥的安全性，根據(jù)長期毒性實驗要求[2]，本實驗通過對豚鼠外敷給藥，來預(yù)測其可能對人體產(chǎn)生的不良反應(yīng)，降低臨床受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險.

1 材料與方法

1.1 受試藥物

青藤祛濕外敷散，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥劑實驗室自制.

1.2 實驗儀器

XT－2000i全自動血液細胞分析儀(SYSMEX公司)，CA－510血液凝固測定儀(SYSMEX公司)，Cobas C311全自動生化分析儀(羅氏公司).

1.3 實驗動物

白色英國種豚鼠80只，250～300 g，雌雄各半.由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，動物許可證號:SCXK(黑)2007－002.

1.4 動物分組

將80只豚鼠按體重隨機分為4組，每組20只，雌雄各半.分成一個對照組和青藤祛濕外敷散高劑量組、中劑量組、低劑量組三個給藥組.

1.5 給藥劑量及給藥方法

設(shè)計一個對照組(外敷本制劑自帶固定膠貼)和高劑量20.250 g/(kg·d)(臨床給藥量60倍)、中劑量組10.125 g/(kg·d)(臨床給藥量30倍)、低劑量組2.025 g/(kg·d)(臨床給藥量6倍)三個給藥組.給藥前24 h，于每只動物背部脫毛40 cm2(5 cm×8 cm)(約相當于總體表面積10%).給藥后用固定膠貼(本制劑自帶)和無刺激性醫(yī)用膠布固定.

1.6 給藥時間

每日給藥1次，每次貼敷16 h，每周給藥7 d.給藥91 d，即13周.

1.7 各種指標的檢測方法

1.7.1 一般癥狀觀察

觀察動物的外觀體征、被毛狀態(tài)、行為活動及步態(tài)，有無震顫、痙攣等癥狀，對聲音驚嚇的反應(yīng)，有無呼吸異常，糞便形狀及顏色等.動物有無排泄物污染，眼、鼻、口周圍的狀態(tài)，皮膚的狀態(tài).給藥期間和恢復(fù)期每周稱量體重1次.實驗期間豚鼠如有死亡及時解剖，記錄瀕死時間、體重和癥狀.

1.7.2 血液學(xué)指標

一半動物在給藥期結(jié)束檢測，另一半動物在恢復(fù)期結(jié)束檢測.具體測項目:紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、紅細胞容積(HCT)、平均紅細胞容積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白質(zhì)量分數(shù)(MCHC)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RET)、白細胞計數(shù)(WBC)、中性粒細胞(NE)、淋巴細胞(LY)、單核細胞(MO)、嗜酸性粒細胞(EO)、嗜堿細胞(BA)、血小板計數(shù)(PLT)、凝血酶原時間(PT).

1.7.3 血液生化學(xué)指標

一半動物在給藥期結(jié)束檢測，另一半動物在恢復(fù)期結(jié)束檢測.具體檢測項目:天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸磷酸激酶(CK)、尿素(Urea)、肌酐(Crea)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、總膽紅素(T－BIL)、總膽固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)、氯離子濃度(Cl－).

1.7.4 重要臟器質(zhì)量及臟體比值測定

將各組豚鼠進行系統(tǒng)解剖，將心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、睪丸與附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上腺等臟器完整取出，精密稱取臟器質(zhì)量，并計算臟器指數(shù)[3].

1.7.5 重要臟器肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查

給藥期和恢復(fù)期結(jié)束時，對豚鼠的腦(大腦、小腦、腦干)、脊髓、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、空腸、回腸、肝臟、腎臟、腎上腺、脾臟、胰腺、氣管、肺臟、主動脈、心臟、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢、乳腺、膀胱、坐骨神經(jīng)、骨髓、淋巴結(jié)、給藥局部進行取材并進行肉眼觀察.解剖時按順序逐一進行，觀察其臟器有無眼觀病理學(xué)改變.上述臟器經(jīng)福爾馬林固定液固定后，作病理組織切片，光學(xué)顯微鏡檢查.記錄病理學(xué)改變的種類及程度.

1.8 指標觀察時間

一般狀況和癥狀的觀察，每日觀察1次.每周稱量體重1次.給藥13周后，每組處死10只豚鼠，雌雄各半;恢復(fù)期結(jié)束(停藥2周后)，每組處死10只豚鼠，雌雄各半;各進行1次相關(guān)指標的檢測.對瀕死或死亡大鼠應(yīng)及時檢查.

1.9 統(tǒng)計處理

2 實驗結(jié)果

2.1 一般癥狀觀察

每天給藥前籠外觀察，各組動物的被毛光潔、活動自如，未見步態(tài)、頭部位置及眼部的異常，未發(fā)現(xiàn)震顫、痙攣等癥狀，對聲音反應(yīng)正常，無呼吸異常.給藥時觀察，下腹部、肛門處未見排泄物污染;眼、鼻、口圍無異常分泌物，皮膚無外傷、腫瘤等;胸腹部及肌肉緊張度正常.

2.2 對體重影響

各時間點給藥組所有動物體重與同期對照組比較無顯著性差異(見表1、2).

2.3 血液學(xué)檢測結(jié)果

給藥13周和恢復(fù)期兩周檢測結(jié)果所有動物的所有指標均在正常值參考范圍內(nèi)，各給藥組的動物各項血液學(xué)指標與對照組比較無顯著差異(見表3、4).

2.4 血液生化學(xué)檢測結(jié)果

給藥13周和恢復(fù)期兩周檢測結(jié)果所有動物的所有指標均在正常值參考范圍內(nèi)，給藥組與對照組比較，各項指標均無顯著性差異(見表5、6).

2.5 臟器系數(shù)

稱量以下器官的絕對質(zhì)量，并計算臟器質(zhì)量與剖檢時體重比(臟器系數(shù)).三個給藥組分別與對照組比較，給藥期和恢復(fù)期各個器官的臟器系數(shù)差異均無顯著性意義(P ＞0.05)，(見表7、8).

2.6 重要臟器肉眼觀察

給藥十三周結(jié)束尸體解剖，對照組及給藥組動物系統(tǒng)臟器組織均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的病理改變.

2.7 病理組織學(xué)檢查

給藥結(jié)束和恢復(fù)期結(jié)束時的對照組和青藤祛濕外敷散高劑量組進行組織病理學(xué)檢查，所檢查33個臟器未見與藥物毒性有關(guān)的病理學(xué)改變.

表1 豚鼠(♂)體重(g，±S)

表1 豚鼠(♂)體重(g，±S)

注:與對照組比較，均 P ＞0.05.

給藥時間 動物數(shù)(n)對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組給藥前0 周 10 272.0 ±18.0 272.6 ±16.2 274.7 ±19.0 273.6 ±15.6給藥后1 周 10 287.8 ±21.8 290.0 ±19.6 288.2 ±22.3 290.3 ±19.4給藥后2 周 10 304..8 ±22.8 306.7 ±25.2 303.7 ±23.8 306.5 ±22.5給藥后3 周 10 317.4 ±26.4 322.6 ±29.2 317.1 ±25.3 318.7 ±27.0給藥后4 周 10 329.3 ±28.3 334.5 ±31.6 327.9 ±24.6 329.1 ±30.7給藥后5 周 10 338.1 ±28.9 342.5 ±33.0 337.7 ±25.7 339.6 ±31.3給藥后6 周 10 347.9 ±28.4 350.8 ±36.9 346.3 ±26.4 346.5 ±31.7給藥后7 周 10 356.1 ±31.4 358.6 ±37.9 354.6 ±27.8 356.6 ±34.1給藥后8 周 10 365.1 ±32.7 366.4 ±39.7 362.7 ±29.3 364.9 ±33.5給藥后9 周 10 372.2 ±35.2 374.5 ±41.1 371.3 ±30.5 374.3 ±35.6給藥后10 周 10 381.4 ±38.7 381.3 ±41.6 377.1 ±32.1 382.5 ±37.1給藥后11 周 10 391.8 ±38.6 387.1 ±41.9 385.2 ±31.4 392.1 ±38.1給藥后12 周 10 404.1 ±40.4 394.3 ±43.5 391.0 ±33.4 400.8 ±39.2給藥后13 周 10 413.8 ±38.6 401.8 ±45.3 401.6 ±35.3 408.6 ±40.4停藥后1 周 5 423.7 ±35.1 436.0 ±37.8 414.9 ±25.2 415.1 ±17.7停藥后2 周 5 438.1 ±34.7 444.3 ±40.0 433.4 ±22.0 425.0 ±21.3

表2 豚鼠(♀)體重(g，±S)

表2 豚鼠(♀)體重(g，±S)

注:與對照組比較，均 P ＞0.05.

給藥時間 動物數(shù)(n)對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組給藥前0 周 10 269.8 ±13.2 263.1 ±12.6 263.7 ±10.3 268.3 ±11.2給藥后1 周 10 285.9 ±14.0 276.9 ±15.2 276.4 ±10.0 282.6 ±13.1給藥后2 周 10 299.0 ±17.0 288.0 ±18.0 288.8 ±10.9 297.4 ±16.2給藥后3 周 10 309.9 ±19.3 301.6 ±20.4 299.6 ±13.5 310.0 ±18.2給藥后4 周 10 320.2 ±21.4 312.8 ±23.1 311.6 ±18.1 319.3 ±21.5給藥后5 周 10 329.5 ±24.2 320.6 ±23.4 321.0 ±20.1 328.4 ±20.2給藥后6 周 10 341.5 ±27.8 334.0 ±24.8 327.5 ±23.5 337.2 ±21.6給藥后7 周 10 349.6 ±27.3 341.0 ±26.6 337.1 ±27.6 347.7 ±24.4給藥后8 周 10 359.5 ±29.0 351.3 ±27.0 344.8 ±29.1 357.2 ±27.5給藥后9 周 10 369.4 ±29.4 359.1 ±28.9 354.5 ±30.7 364.7 ±29.8給藥后10 周 10 378.7 ±30.1 371.5 ±32.3 365.5 ±34.1 373.7 ±32.6給藥后11 周 10 389.0 ±33.1 379.6 ±32.5 374.5 ±35.7 384.4 ±35.8給藥后12 周 10 398.6 ±31.0 387.5 ±33.9 384.4 ±37.6 393.9 ±36.5給藥后13 周 10 411.8 ±29.6 395.6 ±35.1 392.7 ±39.3 405.0 ±34.6停藥后1 周 5 416.6 ±35.5 415.9 ±32.1 419.3 ±21.9 400.4 ±27.9停藥后2 周 5 433.0 ±42.9 425.1 ±32.8 428.5 ±22.5 417.5 ±24.3

表3 給藥十三周末豚鼠血液學(xué)結(jié)果(±S，n=10)

表3 給藥十三周末豚鼠血液學(xué)結(jié)果(±S，n=10)

注:給藥組與對照組比較，均P＞0.05.

±4.12 10.07 ±4.17 11.00 ±4.48 9.90 ±3.93 8.28 ±4.05 NE/% 46.73 ±11.53 44.91 ±14.60 56.39 ±18.27 44.46 ±11.81 LY/% 48.58 ±13.96 48.26 ±14.28 39.65 ±16.99 46.56 ±14.21 MO/% 4.46 ±1.21 4.50 ±1.46 3.67 ±1.15 4.18 ±1.28 E0/% 2.21 ±0.69 2.28 ±0.68 2.14 ±0.70 2.19 ±0.80 BA/% 0.36 ±0.11 0.37 ±0.13 0.29 ±0.07 0.40 ±0.13 RBC/(1012·L －1) 5.09 ±0.56 4.80 ±0.53 5.31 ±0.35 5.11 ±0.32 Hb/(g·L－1) 124.30 ±9.13 118.80 ±13.03 130.50 ±7.25 126.50 ±7.84 HCT/% 40.45 ±4.26 38.68 ±3.73 42.78 ±2.66 40.92 ±2.38 MCV/fL 80.51 ±4.66 80.71 ±2.08 80.63 ±2.77 80.53 ±3.30 MCH/Pg 24.84 ±0.91 24.78 ±0.59 24.72 ±0.85 24.74 ±1.18 MCHC/(g·L －1) 305.40 ±10.55 306.70 ±6.53 305.70 ±8.15 305.20 ±5.29 PLT/(109·L－1) 394.16 ±45.54 425.35 ±97.79 367.21 ±69.92 412.47 ±54.94 RET/% 1.80 ±0.57 2.00 ±0.36 1.67 ±0.46 1.88 ±0.37 PT/S 24.83 ±2.92 23.97 ±2.41 25.34 ±3.01 24.02檢測項目 對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組WBC/(109·L－1)

表4 恢復(fù)期二周末豚鼠血液學(xué)結(jié)果(±S，n=10)

表4 恢復(fù)期二周末豚鼠血液學(xué)結(jié)果(±S，n=10)

注:給藥組與對照組比較，均P＞0.05.

檢測項目 對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組WBC/(109·L－1)±5.49 9.44 ±3.09 9.15 ±4.08 10.37 ±3.48 8.59 ±3.34 NE/% 49.90 ±8.69 45.55 ±9.37 49.66 ±9.80 51.07 ±9.41 LY/% 42.96 ±8.69 48.91 ±9.16 44.97 ±9.43 41.96 ±8.50 MO/% 4.72 ±1.10 5.22 ±1.08 4.30 ±1.25 4.57 ±0.82 E0/% 2.53 ±0.81 2.08 ±0.61 2.58 ±0.66 2.45 ±0.77 BA/% 0.44 ±0.13 0.49 ±0.14 0.43 ±0.13 0.45 ±0.14 RBC/(1012·L －1) 4.94 ±0.46 5.00 ±0.52 5.06 ±0.33 4.98 ±0.54 Hb/(g·L－1) 124.80 ±6.46 127.00 ±11.60 128.80 ±6.55 125.70 ±12.72 HCT/% 40.33 ±2.02 40.31 ±5.01 41.19 ±2.28 40.43 ±4.41 MCV/fL 81.30 ±3.03 80.07 ±2.98 81.15 ±3.17 82.04 ±2.03 MCH/Pg 25.44 ±0.79 25.18 ±0.27 25.40 ±0.64 25.49 ±0.51 MCHC/(g·L －1) 313.20 ±5.69 311.70 ±5.46 315.00 ±6.00 311.30 ±8.39 PLT/(109·L－1) 415.88 ±87.52 417.67 ±120.00 415.19 ±59.44 469.54 ±126.20 RET/% 2.32 ±0.67 1.96 ±0.69 2.12 ±0.63 2.14 ±0.55 PT/S 24.85 ±2.39 25.69 ±5.87 25.34 ±2.87 24.58

表5 給藥十三周末豚鼠血液生化結(jié)果(±S，n=10)

表5 給藥十三周末豚鼠血液生化結(jié)果(±S，n=10)

注:給藥組與對照組比較，均P＞0.05.

.40 ±37.05 ALT/(U·L－1) 56.33 ±12.66 60.91 ±8.80 54.04 ±8.32 58.37 ±9.48 ALP/(U·L－1) 97.60 ±17.17 92.30 ±26.86 93.70 ±30.76 96.90 ±26.03 TP/(g·L －1) 48.32 ±2.99 48.73 ±4.97 48.14 ±2.61 48.71 ±2.96 ALB/(g·L －1) 25.72 ±1.41 25.85 ±1.65 24.39 ±2.08 24.72 ±1.75 T －BIL/(μmol·L－1) 0.60 ±0.12 0.55 ±0.18 0.54 ±0.13 0.61 ±0.17 UREAL/(mmol·L－1) 11.92 ±2.14 11.62 ±1.46 11.32 ±1.97 11.32 ±2.06 Cr/(μmol·L －1) 33.32 ±7.06 34.23 ±4.24 31.75 ±6.66 34.03 ±4.09 GLU/(mmol·L －1) 13.21 ±3.30 13.13 ±2.87 12.50 ±2.23 13.62 ±3.20 TG/(mmol·L －1) 0.44 ±0.19 0.37 ±0.06 0.44 ±0.14 0.40 ±0.05 CHO/(mmol·L－1) 1.01 ±0.20 0.93 ±0.18 0.88 ±0.15 0.99 ±0.21 CK/(U·L－1) 1 727.44 ±507.95 1 645.37 ±532.76 1 767.42 ±576.60 1 668.89 ±479.01 K/(mmol·L －1) 4.80 ±0.73 4.60 ±0.40 4.58 ±0.45 4.80 ±0.44 Na/(mmol·L－1) 137.70 ±4.11 136.00 ±1.63 137.20 ±1.87 135.30 ±1.34 Cl/(mmol·L －1) 96.80 ±3.58 98.90 ±2.18 98.80 ±1.23 97.20 ±2.15檢測項目 對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組AST/(U·L－1) 122.90 ±39.81 123.50 ±39.68 135.40 ±45.16 119

表6 恢復(fù)期二周末豚鼠血液生化結(jié)果(±S，n=10)

表6 恢復(fù)期二周末豚鼠血液生化結(jié)果(±S，n=10)

注:給藥組與對照組比較，均P＞0.05.

26.76 ALT/(U·L－1) 66.06 ±21.12 59.56 ±13.38 61.72 ±18.11 64.66 ±15.45 ALP/(U·L－1) 138.80 ±34.58 138.00 ±30.53 138.50 ±43.63 131.10 ±24.52 TP/(g·L －1) 51.71 ±3.16 50.62 ±3.89 50.81 ±3.11 54.42 ±6.52 ALB/(g·L －1) 26.24 ±2.72 26.31 ±1.93 26.30 ±2.55 27.80 ±2.92 T －BIL/(μmol·L－1) 0.57 ±0.09 0.66 ±0.22 0.58 ±0.18 0.59 ±0.18 UREAL/(mmol·L－1) 16.58 ±2.29 14.38 ±3.48 14.40 ±3.42 16.59 ±3.22 Cr/(μmol·L －1) 42.97 ±6.44 42.77 ±10.26 42.58 ±12.25 41.44 ±6.64 GLU/(mmol·L －1) 6.38 ±0.87 5.92 ±1.28 5.24 ±1.96 6.16 ±0.59 TG/(mmol·L －1) 0.49 ±0.11 0.44 ±0.13 0.49 ±0.15 0.46 ±0.13 CHO/(mmol·L－1) 1.41 ±0.38 1.45 ±0.39 1.40 ±0.19 1.44 ±0.36 CK/(U·L－1) 1 611.87 ±501.64 1 781.28 ±584.25 1 453.71 ±508.08 1 734.13 ±558.99 K/(mmol·L －1) 5.09 ±0.40 5.09 ±0.66 5.03 ±0.41 5.02 ±0.59 Na/(mmol·L－1) 139.10 ±1.73 139.20 ±1.39 139.60 ±1.43 139.40 ±1.17 Cl/(mmol·L －1) 101.30 ±1.34 101.70 ±2.45 101.70 ±1.77 101.50檢測項目 對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組AST/(U·L－1) 93.80 ±23.61 96.10 ±29.34 92.20 ±26.15 91.60 ±±1.43

表7 給藥十三周末豚鼠主要臟器系數(shù)(±S，n=10)

表7 給藥十三周末豚鼠主要臟器系數(shù)(±S，n=10)

注:“Δ”代表左右合并測定;與對照組比較，均P＞0.05.

臟器系數(shù)g/100 g體重 對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組腦0.940 ±0.108 1.015 ±0.062 0.995 ±0.217 0.915 ±0.007 0.113心0.344 ±0.043 0.351 ±0.040 0.349 ±0.041 0.317 ±0.039肝4.237 ±0.705 4.439 ±0.287 4.146 ±0.864 5.046 ±1.052脾0.184 ±0.038 0.170 ±0.014 0.170 ±0.028 0.180 ±0.034肺0.908 ±0.132 0.900 ±0.067 0.896 ±0.162 0.828 ±0.101腎Δ 0.934 ±0.121 0.961 ±0.084 0.983 ±0.110 0.923 ±0.131腎上腺Δ 0.092 ±0.014 0.098 ±0.011 0.104 ±0.018 0.096 ±0.010胸腺 0.030 ±0.006 0.040 ±0.008 0.034 ±0.014 0.032 ±0.011睪丸和附睪Δ 0.486 ±0.091 0.465 ±0.056 0.502 ±0.120 0.507 ±0.163子宮 0.142 ±0.024 0.136 ±0.015 0.147 ±0.028 0.134 ±0.020卵巢Δ 0.047 ±0.008 0.045 ±0.005 0.049 ±0.009 0.045 ±

表8 恢復(fù)期二周末豚鼠主要臟器系數(shù)(±S，n=10)

表8 恢復(fù)期二周末豚鼠主要臟器系數(shù)(±S，n=10)

注:“Δ”代表左右合并測定;與對照組比較，均P＞0.05.

臟器系數(shù)g/100 g體重0.009±0.059心0.359 ±0.042 0.389 ±0.053 0.338 ±0.050 0.384 ±0.051肝3.856 ±0.250 4.031 ±0.380 4.079 ±0.359 3.658 ±0.226脾0.176 ±0.025 0.179 ±0.030 0.190 ±0.022 0.184 ±0.023肺0.835 ±0.064 0.866 ±0.085 0.867 ±0.097 0.882 ±0.108腎Δ 0.939 ±0.041 0.969 ±0.147 0.943 ±0.082 0.985 ±0.086腎上腺Δ 0.090 ±0.008 0.101 ±0.020 0.088 ±0.013 0.095 ±0.016胸腺 0.027 ±0.007 0.027 ±0.005 0.025 ±0.005 0.028 ±0.007睪丸和附睪Δ 0.550 ±0.098 0.579 ±0.097 0.648 ±0.053 0.564 ±0.107子宮 0.125 ±0.016 0.124 ±0.015 0.135 ±0.012 0.125 ±0.027卵巢Δ 0.042 ±0.005 0.041 ±0.005 0.044 ±0.004 0.042 ±對照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組腦0.876 ±0.068 0.0892 ±0.083 0.885 ±0.053 0.899

本實驗研究了青藤祛濕外敷散13周反復(fù)外敷給藥豚鼠長期毒性實驗.結(jié)果表明，在高劑量20.250 g/(kg· d)(臨床給藥量60倍)、中劑量組10.125 g/(kg· d)(臨床給藥量30倍)、低劑量組2.025 g/(kg·d)(臨床給藥量6倍)劑量下，連續(xù)給藥13周，三各給藥組豚鼠的一般行為活動、外觀未見異常;體重與攝食量變化與對照組比較無明顯差異;各給藥組豚鼠血液學(xué)和血液生化學(xué)指標、臟器指數(shù)與對照組比較無明顯差異;對照組和高劑量組進行組織病理學(xué)檢查，所檢查的33個臟器未見與藥物毒性有關(guān)的病理學(xué)改變，未發(fā)現(xiàn)明確的毒性靶器官.可以認定，其最大無毒劑量為高劑量組20.250 g/(kg·d).

3 結(jié)語

青藤祛濕外敷散是以古方為基礎(chǔ)，將傳統(tǒng)中藥材青風(fēng)藤、防己提取的有效部位與新型的經(jīng)皮給藥系統(tǒng)相結(jié)合進行研制，以期開發(fā)出療效確切、給藥方便，可增強患者的依從性的治療風(fēng)濕痹癥的新藥.長期毒性實驗是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容，本實驗由于急性毒性實驗未測出LD50，根據(jù)對抗腫瘤藥、鎮(zhèn)痛藥和外用藥等較有參考意義的等效劑量法，按照人和動物的等效劑量比值，再按一定倍數(shù)擴大[4－5]，來確定長期毒性的給藥劑量.并用與臨床一致的外敷給藥途徑，以擬臨床用藥劑量的6、30、60倍為給藥劑量，對青藤祛濕外敷散的長期用藥進行考察.研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)青藤祛濕外敷散長期應(yīng)用可引起的毒性作用，提示其長期用藥安全，為其臨床研究打下良好基礎(chǔ).

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