酶聯(lián)免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應(yīng)用

盛小皓

四川省阿壩州九寨溝縣疾病預(yù)防控制中心 623400

為了探討酶聯(lián)免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應(yīng)用效果，本研究于2012年1月～2012年6月對我院接受的臨床樣本應(yīng)用沙門氏菌特異性單抗3～47～26建立競爭ELISA法來進行沙門氏菌檢測，通過與國標(biāo)法對樣品進行比較檢測，分析該方法在沙門氏菌檢測中的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性，現(xiàn)將分析結(jié)果報道如下。

資料與方法

樣本來源:2012年1月～2012年6月選擇我院接受的臨床糞便樣本105份。

檢測方法:①用碳酸鹽緩沖液(0.05mol/L pH9.6)稀釋腸炎沙門氏菌LPS～poly～L～Lysine 80g/L包被96孔酶標(biāo)板，100μl/孔，用封板膜封板后置37℃溫育1h。②小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。③取未致敏的40孔酶標(biāo)板，將樣品和酶標(biāo)抗體室溫作用90min［1］。④取包被好的酶標(biāo)板，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。⑤將作用后的樣品與酶標(biāo)抗體混合液移入包被板，每樣加兩孔，100μl/孔。留下3孔分別設(shè)陽性、陰性、空白對照。用封板膜封板后置37℃溫育1h。⑥取包被好的酶標(biāo)板，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。⑦取出酶標(biāo)板，迅速加入50μl終止液，加入終止液后應(yīng)立即在酶標(biāo)儀上測定OD490光吸收讀值。⑧以國標(biāo)法作為金標(biāo)準(zhǔn)進行ELISA方法的敏感性和特異性分析，另外采用稀釋法進行國標(biāo)法和ELISA試驗的檢測限測定［2］。

數(shù)據(jù)處理:所有統(tǒng)計均在Windows SPSS17.0中完成，以抑制率的大小判定樣品的陰陽性，抑制率按以下公式計算樣品抑制率(%)=(陰性對照 OD值 ～樣品 OD值)/陰性對照 OD值 ×100%。敏感性為真陽性/(真陽性+假陰性)，特異性為真陰性/(真陰性+假陽性)，準(zhǔn)確性為(真陽性+真陰性)/總數(shù)。

結(jié) 果

檢測限的確定結(jié)果:國標(biāo)法的檢測限為4.9×101CFU/g糞便;C～ELISA為5.0×104CFU/g糞便。

樣品的檢測結(jié)果:ELISA法檢測的敏感性為94.4%，特異性為97.7%，準(zhǔn)確性為97.1%。見表1。

表1 樣品的ELISA檢測結(jié)果［份］

討 論

沙門氏菌(Salmonella)沙門氏菌病屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌，是中一種重要的人畜共患病原菌，是細(xì)菌性食物中毒的重要致病菌［3］。沙門氏菌屬有的專對人類致病，有的只對動物致病，也有對人和動物都致病?？梢允谷祟惏l(fā)生傷寒、副傷寒、敗血癥、胃腸炎和食物中毒，給國家經(jīng)濟造成巨大損失，同時嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。所以，沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一;在公共衛(wèi)生、食品衛(wèi)生、畜牧獸醫(yī)和出入境檢驗檢疫中均有重要意義。酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immnosorbent assay，ELISA)是1971年ENGVELL等建立在免疫酶基礎(chǔ)上的一種新型免疫測定技術(shù)，是目前最常見的檢測手段之一。為了探討酶聯(lián)免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應(yīng)用效果，本研究于2012年1月～2012年6月對我院接受的臨床樣本應(yīng)用沙門氏菌特異性單抗3～47～26建立競爭ELISA法來進行沙門氏菌檢測，通過與國標(biāo)法對樣品進行比較檢測，分析該方法在沙門氏菌檢測中的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。研究結(jié)果顯示國標(biāo)法的檢測限為4.9×101CFU/g糞便;C～ELISA為5.0×104CFU/g糞便。ELISA法檢測的敏感性為94.4%，特異性為97.7%，準(zhǔn)確性為97.1%。上述研究結(jié)果表明酶聯(lián)免疫吸附法在沙門氏菌的臨床檢測中具有良好的特異性、準(zhǔn)確性和敏感性，值得推廣使用。

1 石穎，楊保偉，師俊玲，等.陜西關(guān)中畜禽肉及涼拌菜中沙門氏菌污染分析［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2011，20(7):22 ～27.

2 張江英.沙門氏菌檢測方法的研究進展［J］.家禽科學(xué)，2012(10):47～50.

3 孫園園，趙鵬，劉駿，等.沙門氏菌檢測方法研究進展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2011，38(1):218 ～221.