產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌的篩選鑒定、純化及酶學(xué)性質(zhì)分析

陳 靜，郝偉偉，王春梅，陳 惠,*，吳 琦，韓學(xué)易

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與理學(xué)院，四川 雅安 625014；2.四川省華派生物制藥有限公司，四川 簡(jiǎn)陽(yáng) 641401)

β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)又稱(chēng)纖維二糖酶，屬于纖維素酶類(lèi)，是一種能催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖的酶[1]。作為纖維素酶水解纖維素過(guò)程中最后一步關(guān)鍵酶，把纖維二糖和短鏈的纖維寡糖分解為可利用的葡萄糖[2-3]。在水果、蔬菜、茶葉中，除含有萜烯醇類(lèi)香氣物質(zhì)外，還有大量以無(wú)香味非揮發(fā)性的前體物——β-糖苷(單萜烯基-β-D-葡萄糖苷)的形式存在，β-葡萄糖苷酶能將其水解為具有濃郁天然風(fēng)味的香氣物質(zhì)，以改良在加工、貯藏過(guò)程中對(duì)風(fēng)味的影響。另外，β-葡萄糖苷酶可與其他風(fēng)味酶協(xié)同作用釋放出揮發(fā)性糖苷配基，起到增香作用，從而提高果汁品天然風(fēng)味[4-6]。β-葡萄糖苷酶也可應(yīng)用于生產(chǎn)低聚龍膽糖，低聚龍膽糖比麥芽糖漿具有更高的吸水性和較低的黏度，使食物中淀粉不易被老化；它不易被人體纖維素酶消化，并對(duì)雙歧桿菌有增殖作用，可用于咖啡制品和巧克力制品中起味覺(jué)改良作用[7]。目前，食品工業(yè)中大多采用風(fēng)味添加劑來(lái)增加食品的風(fēng)味，β-葡萄糖苷酶可作為一種更健康更安全的食品添加劑。

1837年，β-葡萄糖苷酶首次在苦杏仁中發(fā)現(xiàn)。后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，β-葡萄糖苷酶普遍存在于如茶樹(shù)這類(lèi)植物[8]及白蟻、蚯蚓、螞蟻這類(lèi)昆蟲(chóng)中[9]，另外在酵母、曲霉及細(xì)菌體內(nèi)也廣泛存在。目前，國(guó)內(nèi)外用于研究的生產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的微生物大多屬于真菌，因?yàn)檎婢图?xì)菌以及放線(xiàn)菌相比較，真菌產(chǎn)β-葡萄糖苷酶多為胞外酶，分離純化都更為方便，適用于固體培養(yǎng)和液體深層發(fā)酵。這為酶制劑的生產(chǎn)提供了有利的條件，也為大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。但β-葡萄糖苷酶的酶活力普遍很低，產(chǎn)量不高。因此，尋找一種新的產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌是極其必要的。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

雅安市周公山海拔1500m處腐殖質(zhì)土壤。

1.2 培養(yǎng)基

1)富集培養(yǎng)基：(NH4)2SO40.4g、MgSO4·7H2O 0.05g、NaCl 0.2g、CaCO30.4g、KH2PO40.1g、纖維二糖0.5g、鏈霉素適量。2)初篩培養(yǎng)基(馬丁氏培養(yǎng)基)：KH2PO41g、MgSO4·7H2O 0.5g、蛋白胨10g、葡萄糖10g、瓊脂15～20g，用蒸餾水定容至1000mL，此培養(yǎng)液1000mL加1%孟加拉紅水溶液3.3mL滅菌待用。3)復(fù)篩培養(yǎng)基(剛果紅CMC-Na瓊脂培養(yǎng)基)[10]：蛋白胨1g、酵母粉1g、CMC-Na 1g、NaCl0.5g、KH2PO40.1g、剛果紅 0.02g、瓊脂1.6g，蒸餾水定容至100mL，pH值自然。4)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基[11]：麥麩粉2.0g、蛋白胨0.2g、Mandels無(wú)機(jī)鹽營(yíng)養(yǎng)液50mL。5) LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨1%、NaCl 1%、酵母粉0.5%，pH7.0～7.5；配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加入1.6%的瓊脂粉。6) LB-Amp培養(yǎng)基：在LB培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加入100μg/mL的氨芐青霉素鈉。

1.3 方法

1.3.1 菌株篩選

1.3.1.1 富集

稱(chēng)取5g土樣至無(wú)菌三角瓶中，加入10倍無(wú)菌水振蕩混勻，取5mL懸浮液于50mL富集培養(yǎng)基中，30℃、180r/min培養(yǎng)48h。

1.3.1.2 平板初篩

將富集后的培養(yǎng)液按10-2、10-3、10-4、10-5共4個(gè)梯度稀釋?zhuān)魅?00μL涂布于初篩培養(yǎng)基上，30℃倒置恒溫培養(yǎng)，直至出現(xiàn)單菌落。

1.3.1.3 平板復(fù)篩

將單菌落轉(zhuǎn)接至剛果紅CMC-Na瓊脂培養(yǎng)基上，30℃倒置恒溫培養(yǎng)96h，挑選有透明水解圈的菌落繼續(xù)于剛果紅CMC-Na瓊脂培養(yǎng)基上劃線(xiàn)培養(yǎng)，得到純培養(yǎng)。

1.3.1.4 菌種保存

保存純培養(yǎng)的菌株于PDA斜面培養(yǎng)基中，待進(jìn)一步篩選。

1.3.1.5 酶活力測(cè)定

各挑取一環(huán)已篩選到的菌株于10mL發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，30℃、180r/min培養(yǎng)24h后，分別轉(zhuǎn)接5mL種子液于50mL(250mL三角瓶)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，30℃、180r/min培養(yǎng)96h。將發(fā)酵液于4℃、4000r/min離心10min，取上清測(cè)定β-葡萄糖苷酶酶活力[12]。

酶活力單位定義：1mL酶液在lmin內(nèi)使底物產(chǎn)生1μmol還原糖(以葡萄糖計(jì))所需的酶量為1個(gè)酶活力單位(U)。

1.3.2 菌株鑒定

1.3.2.1 菌株形態(tài)觀察

在PDA固體培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)3d，觀察其外部形態(tài)；采用插片培養(yǎng)法，顯微鏡下觀察菌絲體形狀、大小，孢子大小、形狀、類(lèi)型、顏色。

1.3.2.2 菌株分子生物學(xué)鑒定

采用r D N A I T S 基因序列分析，以提取的真菌的總DNA[13]為模板，采用ITS通用引物(ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCT-3’；ITS4：5’-TCCTCCGC TTATTGATATGC-3’)通過(guò)PCR擴(kuò)增其ITS序列，反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5min；95℃變性45s，50℃退火45s，72℃延伸2.5min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。

PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離后，用Omega公司膠回收試劑盒回收目的DNA片段，DNA片段與pMD19-T Vector連接，并轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆送至北京諾賽生物技術(shù)有限公司測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果通過(guò)BLAST程序與GenBank中核酸數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)分析，選取同源性高的模式菌株的ITS rDNA序列，利用Clustal X和MEGA 4.0軟件進(jìn)行多序列比對(duì)，用Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.3.3 酶的分離純化

發(fā)酵液經(jīng)離心去沉淀，上清液用飽和度為60%的飽和硫酸銨沉淀，置于4℃，靜置12h后，4℃、5000r/min離心10min，去上清。用醋酸鹽緩沖液(pH4.8)溶解沉淀，溶解后的酶溶液放入透析袋經(jīng)透析除鹽，用Ba2+檢驗(yàn)是否鹽離子已除盡，使用聚乙二醇20000將酶溶液濃縮至1～2mL。上經(jīng)20mmol/L、pH 4.8醋酸緩沖液平衡好的Sephadex G-100柱(45.0cm×Φ3.5cm)，用平衡緩沖液洗脫，流速為1mL/min，每管收集3mL。收集活性峰，用透析袋除鹽，聚乙二醇20000濃縮。在上以20mmol/L、pH4.8醋酸緩沖液預(yù)先平衡的DEAE Cellulose 52弱陰離子交換柱(28.0cm×Φ3.0cm)，把20mmol/L、pH4.8醋酸緩沖液和0.5mol/L NaCl溶液分別置于磁力攪拌梯度混合器的A、B容器，形成0～0.5mol/L NaCl溶液，進(jìn)行梯度洗脫，流速為1mL/min，每管收集3mL。收集活性峰，以透析袋除鹽，聚乙二醇20000濃縮，放置4℃中保存，用于酶學(xué)性質(zhì)研究。

1.3.4.1 蛋白含量測(cè)定

采用考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定。

1.3.4.2 β-葡萄糖苷酶酶活力測(cè)定

按1.3.1.5節(jié)所提方法進(jìn)行測(cè)定[12]。

1.3.4.3 酶分子質(zhì)量測(cè)定

采用SDS-PAGE法，4%濃縮膠，12%分離膠。

1.3.5 酶學(xué)性質(zhì)分析

臘肉是一種腌制食品，具有較強(qiáng)的防腐能力，能長(zhǎng)時(shí)間保存。壯族人喜歡制作和食用臘肉，每到春節(jié)前夕，各家各戶(hù)都將剛宰殺好的新鮮豬肉制作成臘肉。對(duì)于住在偏遠(yuǎn)山區(qū)且條件艱苦的人們來(lái)說(shuō)，臘肉既方便又實(shí)惠，逢年過(guò)節(jié)或招待客人時(shí)買(mǎi)些新鮮肉類(lèi)配合臘肉，平時(shí)的葷食常以臘肉為主。

1.3.5.1 最適反應(yīng)溫度的測(cè)定

將適當(dāng)稀釋的酶液0.5mL與0.5mL水楊苷(0.5g/100mL、pH4.8)分別在30、40、50、60、70、80、90℃環(huán)境下反應(yīng)20min，并測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.2 熱穩(wěn)定性的測(cè)定

將適當(dāng)稀釋的酶液分別在30、40、50、60、70、80、90℃環(huán)境下保溫1h，取0.5mL與0.5mL水楊苷(0.5g/100mL、pH4.8)混合，于55℃環(huán)境下反應(yīng)20min，并測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.3 最適反應(yīng)pH值的測(cè)定

將適當(dāng)稀釋的酶液0.5mL與0.5mL 0.5g/100mL pH值分別為3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的水楊苷在55℃反應(yīng)20min，測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.4 pH值穩(wěn)定性的測(cè)定

將酶液用pH值分別為3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的緩沖液稀釋一定倍數(shù)，放置1h后，調(diào)節(jié)pH值至7.0，取0.5mL與0.5mL水楊苷(0.5g/100mL、pH4.8)在55℃反應(yīng)20min，測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.5 金屬離子對(duì)β-葡萄糖苷酶活力的影響

粗酶液用含1mmol/L的K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Mn2+、Ba2+、Fe3+、Fe2+、Zn2+、Li+、Ag+、Cu2+、Co2+醋酸緩沖液(0.1mol/L、pH4.8)稀釋到一定倍數(shù)，以不加金屬離子的緩沖液為空白對(duì)照。取0.5mL與0.5mL水楊苷(0.5g/100mL、pH4.8)在55℃反應(yīng)20min，測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.6 β-葡萄糖苷酶活力底物特異性

分別以羧甲基纖維素、微晶纖維素、纖維二糖、水楊苷為底物，溶解于0.1mol/L pH4.8醋酸緩沖液中為底物，質(zhì)量濃度為0.5g/100mL。將適當(dāng)稀釋的酶液0.5mL與0.5mL底物緩沖液在55℃反應(yīng)20min，測(cè)定各組酶活力。

1.3.5.7 動(dòng)力學(xué)參數(shù)

將底物纖維二糖和水楊苷終濃度分別分別調(diào)到0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L，按酶活力測(cè)定方法測(cè)定還原糖以計(jì)算酶反應(yīng)的初速率。以底物濃度的倒數(shù)(1/[S])為橫坐標(biāo)，酶反應(yīng)初速率的倒數(shù)(1/[V])為縱坐標(biāo)，作Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選

經(jīng)剛果紅染色后，得到3株有透明光圈的菌株，命名為giF-2、giF-7、giF-10。經(jīng)測(cè)定，其酶活力分別為0.903、0.714、2.522U/mL，其中菌株giF-10產(chǎn)纖維素酶活力最高，故下面選擇菌株giF-10進(jìn)行鑒定。

2.2 菌種鑒定

2.2.1 菌株菌落形態(tài)鑒定

菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生長(zhǎng)很快，菌落質(zhì)地疏松，初白色、黃色，后變?yōu)榈G褐色，出現(xiàn)輪狀的菌絲密實(shí)產(chǎn)孢區(qū)，見(jiàn)圖1A。背面褐色。分生孢梗分枝較少，末端放射狀，頂囊近球狀，產(chǎn)生綠色孢子，孢子呈卵圓形。分生孢子壁光滑，菌絲體透明，如圖1B。

圖 1 菌株giF-10的培養(yǎng)性狀和形態(tài)Fig.1 Morphology and cultural characteristics of strain giF-10

2.2.2 分子生物學(xué)鑒定

PCR擴(kuò)增得到長(zhǎng)度為594bp的ITS序列，在NCBI上進(jìn)行BLAST比對(duì)，giF-10 Aspergillus oryzae strain UPM A22同源性達(dá)99%，參考在GenBank的比對(duì)結(jié)果，利用MEGA4.0軟件以Neighbor-Joining計(jì)算方式生成系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，如圖2所示，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果與ITS分析結(jié)果，將真菌giF-10初步鑒定為米曲霉(Aspergillus oryzae)。

圖 2 菌株giF-10的ITS系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree of stain giF-10 and corresponding strains based on ITS sequence

2.3 酶的分離純化

由圖3可知，粗酶液經(jīng)硫酸銨沉淀、Sephadex G-100凝膠層析、DEAE Cellulose 52離子交換層析得到了純的β-葡萄糖苷酶，分子質(zhì)量大約為90kD。從表1可以看出，活力損失較大的是在硫酸銨沉淀這一步，可能是因?yàn)樵诹蛩徜@沉淀過(guò)程中局部鹽飽和度過(guò)高造成酶蛋白失活，或者在蒸餾水中脫鹽時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的緣故。β-葡萄糖苷酶最終純化倍數(shù)為11.31。

圖 3 純化產(chǎn)物的SDS-PAGE分析Fig.3 SDS-PAGE analysis of purified products

表 1 菌株giF-10產(chǎn)β-葡萄糖苷酶純化結(jié)果Table 1 Purification of β-glucosidase from strain giF-10

2.4 酶學(xué)性質(zhì)

2.4.1 酶的最適溫度

圖 4 β-葡萄糖苷酶的最適溫度Fig.4 Optimal reaction temperature of β-glucosidase

由圖4可知，β-葡萄糖苷酶的最適溫度約為55℃。溫度低于55℃時(shí)，酶活力隨溫度的升高而增大；溫度高于60℃時(shí)，酶活力隨溫度的升高而降低。溫度高于80℃時(shí)酶已近全部失活。

2.4.2 酶的熱穩(wěn)定性

由圖5可知，β-葡萄糖苷酶在30～50℃穩(wěn)定性最好，溫度超過(guò)50℃，酶活力急劇下降，60℃時(shí)酶活僅為最高酶活力的9%。

圖 5 β-葡萄糖苷酶的熱穩(wěn)定性Fig.5 Thermal stability of β-glucosidase

2.4.3 酶的最適pH值

圖 6 β-葡萄糖苷酶的最適pH值Fig.6 Optimal pH of β-glucosidase

由圖6可知，β-葡萄糖苷酶的最適pH值為4.5。在pH4.0～6.0范圍內(nèi)，酶活性較好；當(dāng)pH值低于4.0時(shí)，酶活力迅速降低；pH3.0環(huán)境下，β-葡萄糖苷酶活力僅為最適pH值條件下的17.8%；pH值高于6.0時(shí)，酶活力隨pH值的升高而降低；當(dāng)pH值升至8.0時(shí)，酶活力降為最高酶活力的34.1%。

2.4.4 酶的pH值穩(wěn)定性

圖 7 β-葡萄糖苷酶的pH值穩(wěn)定性Fig.7 pH stability of β-glucosidase

由圖7可知，β-葡萄糖苷酶的pH值穩(wěn)定性較好，在pH4.0～6.0范圍內(nèi)酶活力可達(dá)最高酶活的90%以上。當(dāng)pH值低于4.0時(shí)，酶的穩(wěn)定性隨著pH值的降低而降低，在pH3.0的緩沖液中處理1h，酶活力還有最高酶活力的49.5%；當(dāng)pH值高于6.0時(shí)，酶穩(wěn)定性隨著pH值的升高而降低，在pH8.0的緩沖液中處理1h，酶活力僅為最高酶活力的15.2%。

2.4.5 金屬離子對(duì)β-葡萄糖苷酶活力的影響

緩沖體系中加入1mmol/L的離子后，對(duì)β-葡萄糖苷酶酶活性產(chǎn)了一定影響。由表2可知，Mn2+對(duì)β-葡萄糖苷酶活力有很強(qiáng)的激活作用，加入Mn2+后，β-葡萄糖苷酶活力為對(duì)照的238%。Fe2+、Ag+、Zn2+、Co2+對(duì)酶活力也有一定的激活作用。而Fe3+、Cu2+對(duì)β-葡萄糖苷酶活力有較強(qiáng)的抑制作用，使得酶活力僅為對(duì)照的6%、39%。K+對(duì)β-葡萄糖苷酶也有一定的抑制作用。Ca2+、Mg2+、Ba2+、Li+、Co2+、Na+對(duì)酶活力影響不明顯。

表 2 金屬離子對(duì)β-葡萄糖苷酶活力影響Table 2 Effect of metal ion on β-glucosidase activity

2.4.6 酶的底物特異性

圖 8 β-葡萄糖苷酶的底物特異性Fig.8 Substrate specificity of β-glucosidase

由圖8可知，β-葡萄糖苷酶對(duì)不同纖維素底物具有不同的分解能力。它不能分解羧甲基纖維素和微晶纖維素。但對(duì)纖維二糖和水楊素的特異性很高。

2.4.7 動(dòng)力學(xué)參數(shù)

圖 9 β-葡萄糖苷酶的雙倒數(shù)圖Fig.9 Lineweaver-Burk plot of β-glucosidase

由圖9可知，利用雙倒數(shù)作圖法，分別測(cè)得該β-葡萄糖苷酶對(duì)水楊素的動(dòng)力學(xué)參數(shù)：Km為0.676mmol/L，Vmax為0.0206μmol/(L·min)；對(duì)纖維二糖的動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：Km為2.906mmol/L，Vmax為0.138μmol/(L·min)。

3 結(jié)論與討論

本研究采用以CMC-Na為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基富集，并利用剛果紅平板染色法進(jìn)行高效纖維素降解細(xì)菌的初篩，可以根據(jù)菌落周?chē)该鲿炄ρ杆俨东@目的菌株。β-葡萄糖苷酶的酶活力確證篩選菌株，獲得了1株高效纖維素降解菌giF-10，其酶活力為2.522U/mL。該酶酶活力高于一般報(bào)道[14]，具有研究?jī)r(jià)值。

菌株giF-10的形態(tài)特征與曲霉相似，通過(guò)ITS序列分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)可確定菌株giF-10為米曲霉(Aspergillus oryzae)。目前國(guó)內(nèi)以米曲霉為纖維素酶的產(chǎn)生菌的報(bào)道較少。米曲霉是美國(guó)食品與藥物管理局和美國(guó)飼料公司協(xié)會(huì)在1989年公布的40余種安全微生物菌種之一[15]，由于高安全性，其產(chǎn)物酶的應(yīng)用范圍將非常廣范，尤其在食品領(lǐng)域?qū)⒕邆漭^大應(yīng)用前景。目前，對(duì)該酶的研究多以木霉(Trichoderma)為主，但木霉產(chǎn)酶慢，酶系比活力不高，普遍存在β-葡萄糖苷酶酶活力很低的缺陷[16]。有研究者[17]在木霉纖維素酶中添加曲霉的β-葡萄糖苷酶，極大地提高了纖維素酶的降解能力。并且，曲霉中β-葡萄糖苷酶具有更高的活性和穩(wěn)定性。

本研究表明，純化后的β-葡萄糖苷酶最終純化倍數(shù)為11.31，純化酶的比活力為40.84U/mg。相比黑曲霉中β-葡萄糖苷酶的最終純化倍數(shù)8.42，酶的比活力65.06U/mg[18]，本研究的純化倍數(shù)較高，但酶活力較低，可能是在硫酸銨沉淀過(guò)程中β-葡萄糖苷酶損失較多。經(jīng)SDS-PAGE分析，β-葡萄糖苷酶分子質(zhì)量約為90kD，菌株A.oryzae sp.100的β-葡萄糖苷酶分子質(zhì)量為77kD[19]，分子質(zhì)量的不同可能是表達(dá)調(diào)控的不同造成的。該酶最適pH值為4.5，在pH4.0～6.0穩(wěn)定性較好，活力均可達(dá)最高酶活的90%以上。說(shuō)明β-葡萄糖苷酶在酸性條件下活性高且較為穩(wěn)定，因此該酶適合在酸性介質(zhì)中應(yīng)用，如添加在果汁、果酒等果制品中作為風(fēng)味劑。但其熱穩(wěn)定性較差，需進(jìn)一步運(yùn)用基因工程手段對(duì)其進(jìn)行改造，以獲得熱穩(wěn)定性提高的工程菌。

酶是一種蛋白質(zhì)，它的催化效果受諸多因素影響。本研究中Mn2+、Fe2+、Ag+、Zn2+、Co2+對(duì)β-葡萄糖苷酶有不同程度的激活作用，特別是Mn2+可以使酶活提高1.38倍，這些激活劑可能是作為酶的輔酶存在，或者形成共價(jià)物，使底物更加易參加反應(yīng)；Fe3+、Cu2+對(duì)β-葡萄糖苷酶活力有抑制作用，可能是這些金屬離子引起了酶構(gòu)象的改變，使酶喪失了部分生物活性。根據(jù)文獻(xiàn)[20]報(bào)道來(lái)源于曲霉N0.5.1的β-葡萄糖苷酶，K+、Na+、Mg2+和Zn2+對(duì)其有激活作用，而Ag+和Fe2+對(duì)其具有明顯的抑制作用。來(lái)自黑曲霉(Aspergillus sp. NL-1)的β-葡萄糖苷酶，Ag+對(duì)該酶具有強(qiáng)的抑制作用，其他金屬離子對(duì)酶的活性影響不大[21]。不同金屬離子對(duì)酶活力的影響不同，離子對(duì)酶活力的影響作用可應(yīng)用于酶制劑的加工和處理中，用以保持酶的穩(wěn)定性。

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