頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定碘佛醇原料藥中的殘留溶劑

李 超，張 勉，唐 華

（重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121）

碘佛醇最早由美國萬靈科公司研制開發(fā)，現(xiàn)國內(nèi)僅有一個生產(chǎn)廠家，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH19702004[1]，USP[2]也有收載，屬非離子型 X-線造影劑。原料制備工藝中使用了甲醇和正丁醇，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中使用的氣相色譜直接進(jìn)樣外標(biāo)法測定甲醇和正丁醇含量，溶劑為N，N-二甲基甲酰胺。為減小毒害和對儀器的污染，提高測定準(zhǔn)確度，更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，以水為溶劑，三類溶劑正丙醇為內(nèi)標(biāo)，對本品的殘留溶劑進(jìn)行了頂空毛細(xì)管氣相色譜測定?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N型氣相色譜儀，AgilentG1888型頂空進(jìn)樣器。所用試劑均為分析純；碘佛醇原料為江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司提供的3批樣品（批號分別為635101133，635101136，635101206，純度大于 99%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ZB-Wax 毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：200℃；分流比：5∶1；檢測器為 FID，溫度為 250℃；柱溫采用程序升溫：50℃保持3 min，然后以35℃ ／min升至200℃，保持 2 min；載氣為氮氣；流速：2 mL／min。頂空條件：頂空瓶加熱平衡時間為30 min；加熱溫度為80℃；進(jìn)樣環(huán)溫度為110℃；傳輸線溫度為120℃；進(jìn)樣體積為1 mL。

2.2 溶液配制

取正丙醇適量，精密稱定，加水制成0.1 mg／mL的溶液，搖勻，即得內(nèi)標(biāo)溶液。分別取甲醇和正丁醇適量，精密稱定，加上述內(nèi)標(biāo)溶液制成含甲醇和正丁醇均為0.6 g／L的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取本品約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，加上述內(nèi)標(biāo)溶液5.0 mL，加蓋密封，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：取對照品溶液 2.5 mL，置 20 mL頂空瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液 2.5 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進(jìn)行分析，記錄色譜圖，見圖1 A。取供試品溶液，照擬訂的方法進(jìn)行分析，記錄色譜圖，見圖1 B?？梢?，甲醇、正丙醇、正丁醇均能得到良好的分離（分離度＞1.5），說明上述色譜條件可用于測定碘佛醇原料中甲醇和正丁醇的殘留量。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密量取對照品溶液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置 20 mL頂空瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至 5.0 mL，加蓋密封，搖勻。照擬訂的方法進(jìn)行分析，記錄色譜圖；以對照品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為橫坐標(biāo)（X），對照品溶液質(zhì)量濃度與內(nèi)標(biāo)溶液質(zhì)量濃度（以1計算）的比值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸。甲醇的回歸方程為Y=377.8 X+11.813，線性范圍為122.2 ～ 366.6 μg／mL， r=0.998 3；正丁醇的回歸方程為 Y=68.962X+1.617 4，線性范圍為 128.4 ～385.2 μg／mL，r=0.999 3。結(jié)果表明，甲醇、正丁醇在相應(yīng)的檢測濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

檢測限考察：將對照品溶液逐步稀釋進(jìn)樣，以 S／N=3計算，測得甲醇、正丁醇的最低檢測質(zhì)量濃度分別為 0.66，0.04 μg／mL。

精密度試驗：取對照品溶液 2.5 mL，共 6份，置 20 mL頂空瓶中，分別用內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至5.0 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進(jìn)行分析。以對照峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計算，結(jié)果甲醇、正丁醇的 RSD 分別為 1.9%，0.7% （n=6），符合要求。

回收率試驗：取甲醇0.065 1 g和正丁醇0.070 0 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。取已測定結(jié)果的樣品約0.5 g，精密稱定，共9份，置20 mL頂空瓶中，分別加入對照品貯備液 1.5，2.0，2.5 mL，各 3 份，加入內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至5.0 mL，加蓋密封，搖勻，照擬訂的方法進(jìn)行分析，按內(nèi)標(biāo)法計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 甲醇和正丁醇回收率試驗結(jié)果

2.4 樣品測定

分別取3個批號的樣品，按擬訂的方法制備供試品溶液，照擬訂的方法進(jìn)行分析，記錄色譜圖，以峰面積按內(nèi)標(biāo)法計算樣品中甲醇、正丁醇的殘留量。并與廠家提供的按原標(biāo)準(zhǔn)檢驗的測定結(jié)果比較，結(jié)果見表2。按國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH19702004[1]的規(guī)定，甲醇、正丙醇的限度均為0.3%，結(jié)果均符合規(guī)定。

表2 樣品檢測結(jié)果與廠家標(biāo)準(zhǔn)檢測結(jié)果比較（%）

3 討論

原標(biāo)準(zhǔn)方法中采用的溶解后直接進(jìn)樣測定，會對色譜柱產(chǎn)生較大的污染，縮短色譜柱的使用壽命。頂空進(jìn)樣避免了難揮發(fā)物質(zhì)的污染及不必要的干擾，并且使殘留溶劑氣化后進(jìn)樣，濃度增大，靈敏度高，非常適用于揮發(fā)性殘留溶劑的分析。由于本方法使用水作溶劑，且甲醇、正丙醇、正丁醇揮發(fā)性都比較強，根據(jù)《中國藥典(二部)》[3]附錄62-63對頂空溫度和平衡時間的指導(dǎo)原則，選擇了頂空瓶加熱平衡時間30 min，加熱溫度80℃的條件進(jìn)行，壓力適中，靈敏度亦滿足要求。

原標(biāo)準(zhǔn)方法中溶劑使用的是N，N-二甲基甲酰胺，有毒性。選擇水為溶劑，各組分包括碘佛醇均有較好的溶解性，既環(huán)保又降低了成本，操作簡便。

有機(jī)殘留溶劑在樣品中為微量存在的物質(zhì)，原標(biāo)準(zhǔn)方法采用外標(biāo)法，精密度和準(zhǔn)確度都較差；本法中采用內(nèi)標(biāo)法定量可以減少由于儀器系統(tǒng)或操作過程中帶來的誤差。試驗中對多種溶劑進(jìn)行篩查，正丙醇是三類溶劑，毒性小，且與溶劑水混溶，保留時間也介于甲醇和正丁醇之間，且分離度良好。因此最終選擇正丙醇為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。

原標(biāo)準(zhǔn)方法中甲醇、正丁醇的限度均為0.3%，甲醇的限度與ICH中關(guān)于有機(jī)溶劑殘留量的指導(dǎo)原則[4]和《中國藥典》[3]附錄62-63的規(guī)定一致，正丁醇的限度比上述兩個文獻(xiàn)規(guī)定的0.5%限度更嚴(yán)格。測定結(jié)果均低于規(guī)定限度。

該廠家在原料生產(chǎn)工藝中使用了氯乙醇，原標(biāo)準(zhǔn)方法中未作控制，ICH中關(guān)于有機(jī)溶劑殘留量的指導(dǎo)原則[4]和《中國藥典(二部)》[3]附錄62-63也未有相應(yīng)的規(guī)定。因此，參照《中國藥典(二部)》[3]1025明膠空心膠囊中氯乙醇的測定方法，采用直接進(jìn)樣考察了碘佛醇中氯乙醇的殘留，結(jié)果3批樣品均未檢出氯乙醇，故未在本方法中測定氯乙醇。

[1]YBH19702004.國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].

[2]United States Pharmacopeial Convention.United States Pharmacopeia[S].Thirty － second Revision[M].Rockville：United States Pharmacopeia Convention，2009：2677.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4]周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：87.