高水平血清HCMV IgM在低齡兒童原發(fā)性HCMV感染診斷中的作用

孔輝江陽周裕林★

高水平血清HCMV IgM在低齡兒童原發(fā)性HCMV感染診斷中的作用

孔輝1江陽2周裕林1★

目的 探討血清人巨細胞病毒（HCMV）IgM水平在低齡兒童中診斷原發(fā)性HCMV感染的意義。 方法 收集臨床診斷為HCMV感染的患兒血標本56例，年齡為0.5～1歲，采用全自動化學發(fā)光法分別定量檢測血清HCMV IgG、IgM抗體水平，以及IgG親和力指數(shù)。 結(jié)果 HCMV IgG+患兒親和力檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其中IgM-/IgG+的5例患者都為高親和力IgG，而IgM+/IgG+的42例患者中25例是低親和力IgG，占59.5%。根據(jù)IgM定量檢測結(jié)果進一步將此47例HCMVIgG+患兒由低至高分成5組，分別為IgM陰性組（＜30 AU/mL），30～100 AU/mL組，100～170 AU/mL組，170～240 AU/mL組以及大于240 AU/mL組。隨著IgM抗體水平的增加，低親和力樣本所占比例呈增高趨勢，經(jīng)卡方檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.72，P＜0.05）。 結(jié)論 在0.5～1歲嬰兒中，HCMV IgM水平與HCMV原發(fā)感染呈正相關(guān)，臨床同時參考IgM定量檢測和HCMV IgG親合力檢測結(jié)果，將對0.5～1歲以內(nèi)嬰幼兒近期HCMV感染發(fā)生時間的判定起到有益的互補作用。先進行HCMV IgM定量檢測，再進行陽性病例的IgG親和力檢測是低齡兒童原發(fā)HCMV感染實驗室診斷的可行方案。

人巨細胞病毒；IgM；IgG；IgG親合力；原發(fā)性感染

人類巨細胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）屬于人皰疹病毒5型，在我國人群中感染極其廣泛。一般人群HCMV IgG陽性率為90%左右，嬰幼兒期的陽性率在60%左右。HCMV原發(fā)感染多發(fā)生在嬰幼兒期，主要來自他們的照護者[1]。HCMV原發(fā)感染和再發(fā)感染早期往往累及肝脾[2]，其中部分患兒可引起神經(jīng)發(fā)育異常，如聽力損傷和黃疸等臨床表現(xiàn)[3]，因此，及時可靠地診斷嬰幼兒是否存在近期HCMV活動性感染對于后續(xù)臨床治療至關(guān)重要。本研究采用全自動化學發(fā)光方法進行了血清HCMV IgM定量和HCMV IgG抗體親合力檢測，以探討CMV IgM定量檢測對診斷嬰幼兒近期HCMV原發(fā)性感染的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象

2010年7月～2011年8月福建省廈門市婦幼保健院醫(yī)院收治的臨床診斷為HCMV感染患兒56例，其中男嬰30例，女嬰26例，年齡6～12個月，平均9±0.8個月。

1.2 主要試劑與儀器

HCMV IgM、IgG及IgG親合力試劑盒，Liaison?全自動化學發(fā)光檢測平臺由意大利索靈公司（DiaSorin）提供。

1.3 人血清HCMV IgM、IgG定量檢測

按照說明書進行血清HCMV IgM、IgG抗體定量檢測。在Liaison?分析儀上進行自動檢測和報告結(jié)果，根據(jù)經(jīng)校準后的主曲線確定人血清和血漿中HCMV IgG或IgM抗體含量，分別以IU/mL（IgG）或AU/mL（IgM）為單位表示樣本中抗體含量。

1.4 人血清HCMV IgG 親合力檢測

采用化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測HCMV IgG親合力。以常規(guī)HCMV IgG檢測結(jié)果為分母，以尿素處理后HCMV IgG檢測結(jié)果為分子，得到親合指數(shù)（avidity index）。根據(jù)說明書，親合指數(shù)小于0.2是低親合力，位于0.2～0.3之間為灰區(qū)，大于0.3則為高親合力。低親合力IgG抗體提示HCMV感染發(fā)生在4個月內(nèi)，為原發(fā)感染。

1.5 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 15.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。各組之間采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 IgG /IgM血清學分析

此56例臨床診斷為HCMV感染患兒IgG和IgM檢測結(jié)果見表1。其中血清HCMV IgM-/IgG+者占8.9%（5/56），IgM+/IgG+占75.0%（42/56），IgM-/IgG-占10.7%（6/56），IgM+/IgG-占5.4%（3/56）。

表1 HCMV感染患兒IgG，IgM血清學檢測結(jié)果（n=56）Table 1 Results of serological IgG and IgM from HCMV infected children (n=56)

2.2 親合力結(jié)果分析

HCMV IgG+患兒（包括IgM-/IgG+組和IgM+/ IgG+組）親合力檢測結(jié)果見表2。其中5例IgM-/IgG+患者都為IgG高親合力，而在42例IgM+/IgG+的患兒中25例是低親合力，占59.5%，17例為高親合力，占40.5%。

表2 HCMV IgG親合力結(jié)果Table 2 Results of HCMV IgG avidity tests

2.3 HCMV IgM含量與IgG親合力關(guān)系

根據(jù)IgM檢測結(jié)果，將47例HCMV IgG陽性患兒樣本（包括IgM-/IgG+組和IgM+/IgG+組）分成5組，分別為IgM陰性組（＜30 AU/mL），30～100 AU/mL組，100～170 AU/mL組，170～240 AU/mL組，以及＞240 AU/mL組，同時分層分析五組中IgG低親合力的樣本所占比例，結(jié)果見表3?？傮w低親合力的樣本數(shù)占53.2%（25/47），在IgM含量由低至高五組中，低親合力樣本所占比例分別是0，41.2%，58.3%，75.0%和100%。隨著IgM抗體水平的增高，低親合力IgG病例所占比例呈增高趨勢，經(jīng)卡方檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.72，P＜0.05）。

3 討論

HCMV是嬰幼兒期較易感染的重要病原之一，由于嬰幼兒的免疫系統(tǒng)尚未完全成熟，所以HCMV原發(fā)性感染（即初次感染）時易出現(xiàn)肝臟、肺臟、血液和消化系統(tǒng)等多臟器損害，并導致相應臨床癥狀[4]。HCMV一旦感染，則終生相伴，常呈潛伏感染狀態(tài)，但其中10～20%感染的新生兒會在出生后1～2年內(nèi)誘發(fā)激活而形成再次感染，造成神經(jīng)系統(tǒng)方面的損傷，尤其是影響聽力[5]。因此，臨床上能盡早準確診斷HCMV原發(fā)性感染，并給予及時治療是避免傷害的關(guān)鍵。

表3 HCMV IgM 含量與IgG親合力關(guān)系分析（n=47）Table 3 The relationship between quantitative IgM and IgG avidity tests (n=47)

目前，臨床上診斷原發(fā)性HCMV感染的最佳方法是動態(tài)檢測到HCMV IgG抗體的血清轉(zhuǎn)換，但由于在人群中HCMV既往感染的比率非常高，而且孕期母體IgG抗體可以經(jīng)胎盤傳給胎兒，母體來源的IgG抗體在出生后往往可以在嬰兒體內(nèi)保持半年才消失，所以在半歲內(nèi)嬰兒中單獨檢測HCMV IgG的診斷意義有限[6]。HCMV IgM也被作為實驗室診斷活動性HCMV感染的重要指標之一，其陽性僅提示近期有HCMV活動性感染，在原發(fā)和再發(fā)HCMV感染中都可產(chǎn)生IgM抗體[7]，且會受到其他因素的影響，如其他病毒株的交叉反應等[8]， 因此，HCMV IgM定性檢測結(jié)果并不能很好地評估HCMV原發(fā)感染。但HCMV IgM定量檢測是否在診斷HCMV原發(fā)感染中有作用呢？近年有專家在用定量HCMV IgM研究孕婦標本中研究發(fā)現(xiàn)，孕婦原發(fā)性CMV感染其IgM水平往往較高[9]。1989年Hedman等[10]根據(jù)宿主在初次接觸抗原時所產(chǎn)生的特異性IgG抗體的親合力隨著免疫時間的推移會逐漸升高的原理，首次采用尿素變性技術(shù)區(qū)分風疹病毒原發(fā)感染或再發(fā)感染，該法同樣適用于HCMV 和其它病毒感染的診斷[11]。

本研究以HCMV IgG親合力檢測結(jié)果為對照，探討了HCMV IgM定量檢測在診斷原發(fā)性感染中的應用價值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在56例臨床診斷為HCMV感染的半歲至一歲患兒中，IgG或IgM至少一項指標陽性的有50例（89.3%）。其中IgG/IgM雙陽性的占大多數(shù)，有42例（75.0%）；IgM單陽性有3例（5.4%）；IgG單陽性有5例（8.9%）。 在47例IgG陽性患者（包括IgG/IgM雙陽性及IgG單陽性的患者）中，就其親合力檢測結(jié)果進行分析認為：（1）IgG低親合力的樣本有25例，占IgG/IgM雙陽性（42例）的59.5%?？梢娫诎霘q至一歲嬰幼兒HCMV感染中，有一半以上是HCMV原發(fā)感染。（2）3例IgM單陽性病例應為HCMV原發(fā)感染早期，此時其IgG抗體尚未表達。（3）5例IgG單陽性的患者其IgG親合力都表現(xiàn)為高親合力，提示患兒HCMV感染可能發(fā)生在檢測時間點的四個月之前，或所測IgG抗體是來自于母體的尚未消失的抗體。另外，對47例IgG陽性樣本，進一步分析其IgM含量變化與IgG低親合力病例所占比例之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IgM含量越高的研究組中其IgG低親合力病例所占比例也越高，經(jīng)卡方檢驗分析，卡方值χ2=12.72，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。因此IgM定量檢測有助于判斷HCMV感染的時期，HCMV IgM水平越高則發(fā)生4個月內(nèi)HCMV原發(fā)性感染的風險越大。

綜上所述，血清HCMV IgG親合力檢測是判定HCMV原發(fā)感染較特異的方法，尤其對于半歲至一歲的兒童具有不可替代的作用，但由于此檢測方法操作過程復雜，檢測成本較高，目前尚難以在臨床廣泛開展。本研究發(fā)現(xiàn)HCMV IgM水平越高的HCMV感染病例組其IgG低親和力所占比例也越高，提示在半歲至一歲的兒童中，高HCMV IgM水平也有助于臨床判斷近期HCMV原發(fā)感染。若臨床同時參考IgM定量檢測和HCMV IgG低親合力檢測結(jié)果，將對0.5～1歲以內(nèi)嬰幼兒近期HCMV感染發(fā)生時間的判定起到有益的互補作用。鑒于我國育齡婦女HCMV既往感染率在95%以上，且來自于母體的IgG抗體可通過胎盤進入胎兒血液循環(huán)，直接進行IgG抗體親和力檢測成本高、樣本量大。先進行HCMV IgM定量檢測，再進行IgM陽性病例的IgG親和力檢測是低齡兒童原發(fā)HCMV感染實驗室診斷的可行方案。

[1] 中華醫(yī)學會兒科學分會感染學組，全國兒科臨床病毒感染協(xié)作組,《中華兒科雜志》編輯委員會. 兒童巨細胞病毒性疾病診斷和防治的建議[J]. 中華兒科雜志, 2012, 50(4): 290-292.

[2] Gaytant M A, Rours G I, Steegers E A, et al. Congenital cytomegalovirus infection after recurrent infection: case reports and review of the literature[J]. Eur J Pediatr, 2003,162(4): 248-253.

[3] 朱啟镕, 方峰. 小兒傳染病學[M]. 第3版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2009: 63-67.

[4] Gandhi M K, Khanna R. Human cytomegalovirus: clinical aspects, immune regulation, and emerging treatments[J]. Lancet Infect Dis, 2004, 4(12): 725-738.

[5] 梁國平, 郭樹青. 巨細胞病毒與先天畸形及新生兒疾病[J].國外醫(yī)學(兒科學分冊), 1984, 16(1): 15-18.

[6] Nigro G, Adler S P, La Torre R, et al. Passive immunization during pregnancy for congenital cytomegalovirus infection[J]. N Engl J Med, 2005, 353(13): 1350-1362.

[7] Mendelson E, Aboudy Y, Smetana Z, et al. Laboratory assessment and diagnosis of congenital viral infections: Rubella, cytomegalovirus (CMV), varicella-zoster virus (VZV), herpes simplex virus (HSV), parvovirus B19 and human immunodeficiency virus (HIV)[J]. Reprod Toxicol, 2006, 21(4): 350-382.

[8] De Paschale M, Agrappi C, Manco M T, et al. Positive predictive value of anti-HCMV IgM as an index of primary infection[J]. J Virol Methods, 2010, 168(1-2): 121-125.

[9] Dollard S C, Staras S A, Amin M M, et al. National prevalence estimates for cytomegalovirus IgM and IgG avidity and association between high IgM antibody titer and low IgG avidity[J]. Clin Vaccine Immunol, 2011, 18(11): 1895-1899.

[10] Hedman K, Rousseau S A. Measurement of avidity of specific IgG for verification of recent primary rubella[J]. J Med Virol, 1989, 27(4): 288-292

[11] Revello M G, Gorini G, Gerna G. Clinical evaluation of a chemiluminescence immunoassay for determination of immnoglobulin G avidity to human Cytomegalovirus[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 2004, 11(4): 801-805.

Diagnostic role of high HCMV IgM level in serum for HCMV primary infection

KONG Hui1, JIANG Yang2, ZHOU Yulin1★
(1.Central Laboratory of Pregnatal Diagnosis, Xiamen Meternal & Children's Hospital, Fujian, Xiamen 361003, China; 2.Shanghai Institute of Immunolog, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025, China)

Objective To study the diagnostic role of human cytomegalovirus (HCMV) IgM level for HCMV primary infection in lower aged children. Methods 56 serum samples were collected from 0.5～1 years old new borns, who were clinically diagnosed as HCMV infection. HCMV IgM/IgG and IgG avidity were quantitatively detected by automatic CLIA. Results Among the HCMV IgG positive samples, 5 samples, which were IgM-/IgG+, showed high HCMV IgG avidities. In the remaining 42 samples, which were IgM+/ IgG+, 25 samples (about 59.5%) showed low IgG avidities. Based on the HCMV IgM level, the samples were further divided into 5 groups: IgM negative group (＜30 AU/mL), 30～100 AU/mL group, 100～170 AU/mL group, 170～240 AU/mL group and ＞240 AU/mL group. It was found that the percentage of HCMV IgG low avidity samples were increased with increases of IgM levels. The difference was statistically significant (χ2=12.72,P＜0.05). Conclusion High HCMV IgM level in serum are positively correlated to HCMV primary infection among newborns of 0.5～1 age. Quantitative IgM assay could be complimentary to diagnosis of primary HCMV infection in paralle with IgG avidity test. This data imply that quantitatively detection of HCMV IgM antibody followed by IgG avidity detection is practical proposal for laboratory diagnosis of HCMV primary infection in lower aged children.

Human cytomegalovirus; IgM; IgG; IgG avidity; Primary Infection

1.福建省廈門市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心實驗室，福建，廈門 361003 2.上海交通大學醫(yī)學院免疫學研究所，上海 200025

★通訊作者：周裕林，E-mail:zhou_yulin@126.com