煙草早花機(jī)理研究進(jìn)展

楊靜 陳杰 郭鴻雁 陳建軍 賀廣生 鄧世媛 王維

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣州 510642；2.廣東煙草韶關(guān)市有限公司，韶關(guān) 512000）

煙草早花指煙草植株未能達(dá)到正常生長(zhǎng)應(yīng)具有的高度和葉數(shù)就現(xiàn)蕾開(kāi)花。發(fā)生早花的煙株，過(guò)早地從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)入生殖生長(zhǎng)，導(dǎo)致生長(zhǎng)勢(shì)弱，葉數(shù)減少，葉片窄小，葉片的產(chǎn)量和質(zhì)量降低［1，2]。國(guó)內(nèi)外煙葉生產(chǎn)均存在煙草早花問(wèn)題［3，4]，嚴(yán)重影響著煙葉的生產(chǎn)。研究煙草早花問(wèn)題需要了解植物開(kāi)花機(jī)理，近百年來(lái)，人們?cè)陂_(kāi)花生理生化方面進(jìn)行了大量的探索，提出了光周期理論、開(kāi)花素學(xué)說(shuō)、養(yǎng)分分配假說(shuō)，并對(duì)光周期誘導(dǎo)、溫度影響等因素進(jìn)行了大量研究。在進(jìn)入20世紀(jì)70年代之后植物發(fā)育研究陷入低谷［5]，直到1990年，Yanofsky等［6]成功地分離了花器官發(fā)育控制基因AGAMOUS，從此打破了植物發(fā)育生物學(xué)研究的沉寂，植物發(fā)育生物學(xué)的機(jī)理研究由以生理生化為主轉(zhuǎn)變到以分子生物學(xué)及生理遺傳學(xué)為主。目前有關(guān)植物開(kāi)花的研究，國(guó)內(nèi)多集中在品種、溫度和光照三個(gè)方面［7]，側(cè)重于生理生化并且缺乏系統(tǒng)全面的研究；國(guó)外的研究則比較詳盡，且已由生理機(jī)理的研究深入到分子機(jī)理的研究。對(duì)煙草而言，由于種植區(qū)域廣、栽培品種多、栽培過(guò)程相對(duì)繁瑣且各地不一致，造成煙草早花的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，煙草早花的研究至今仍未能建立一個(gè)統(tǒng)一的理論體系。分子生物學(xué)的發(fā)展促進(jìn)了煙草成花基因的研究，也使得對(duì)煙草早花的研究更為深入和系統(tǒng)。總的來(lái)說(shuō)，煙草成花機(jī)理十分復(fù)雜，煙草是如何獲得信號(hào)、何時(shí)進(jìn)入花的發(fā)生和發(fā)育階段仍有待進(jìn)一步研究，煙草成花的分子機(jī)理研究將推動(dòng)煙草早花研究的進(jìn)一步發(fā)展［8]。

1 煙草成花的生理與分子機(jī)理

1.1 煙草的成花決定

植物開(kāi)花需要建立在成花決定態(tài)之上［9]。成花決定態(tài)指細(xì)胞具有分化為花的能力但還未開(kāi)始花的分化時(shí)所處的狀態(tài)。當(dāng)成花決定態(tài)細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量時(shí)就可以啟動(dòng)花的發(fā)生，開(kāi)始花的發(fā)育［10]。有觀點(diǎn)認(rèn)為，在正常生長(zhǎng)條件下 ，發(fā)育的遺傳特性有著決定性影響，煙草在形成花芽之前必須分化出可預(yù)測(cè)的節(jié)和節(jié)間數(shù)。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為：煙草的整個(gè)生育期按營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期至生殖生長(zhǎng)期的順序逐步完成［11]。李文安等［12]通過(guò)培養(yǎng)黃花煙草（N.rustica）葉肉原生質(zhì)體表明，從愈傷組織可直接產(chǎn)生正常的花與花蕾，而不需要先形成莖與葉片，且不同光周期處理對(duì)花芽的形成沒(méi)有影響。另外，他們?cè)诶脽煵莶煌l(fā)育時(shí)期，植株上不同部位的薄層組織配合一定的培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)期主莖薄層組織無(wú)花芽分化能力，隨著植株生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)入現(xiàn)蕾期、主莖薄層從花序頂端向下逐步出現(xiàn)花芽分化能力，在形成花芽的盛期時(shí)，幾乎主莖的所有節(jié)位均有形成花芽分化能力，植株在開(kāi)花盛期時(shí)，主莖表皮薄層形成花芽的能力，由下部節(jié)位向上部節(jié)位開(kāi)始逐漸減弱，至青果期主莖表皮薄層已完全失去分化花芽的能力，只有營(yíng)養(yǎng)芽出現(xiàn)，花序區(qū)內(nèi)的主莖已無(wú)分化花芽的能力。而花序枝梗，小枝梗卻表現(xiàn)出強(qiáng)有力的花芽分化現(xiàn)象［13]。綜上各種觀點(diǎn)及結(jié)果表明，細(xì)胞需要達(dá)到一定的狀態(tài)才能感受外界刺激，進(jìn)行花芽分化，但如何界定這個(gè)狀態(tài)至今仍未有明確統(tǒng)一的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 調(diào)控開(kāi)花的主要基因

擬南芥是所有植物中開(kāi)花基因人們研究得最為透徹的一種植物，現(xiàn)已深入到各途徑各基因的分子機(jī)理研究，在擬南芥上的一系列研究結(jié)果表明，開(kāi)花主要是體內(nèi)抑制狀態(tài)在環(huán)境因子或體內(nèi)發(fā)育信號(hào)的誘導(dǎo)下逐步解除的過(guò)程，解除方式可通過(guò)多種途徑進(jìn)行。通常將擬南芥的開(kāi)花歸結(jié)為4條主要途徑［16]：光周期途徑、春化作用途徑、赤霉素途徑和自主途徑，與開(kāi)花時(shí)間相關(guān)的基因通過(guò)這四條途徑共同調(diào)控花分生組織特征基因的表達(dá)從而促使植物開(kāi)花。調(diào)控過(guò)程，如圖1所示。

光周期途徑的主要調(diào)控基因是CONSTANS（CO）、FLOWERING LOCUS T（FT）、LEAFY（LFY）和SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANS 1（SOC1）。經(jīng)過(guò)光刺激和生物節(jié)律調(diào)控之后，CO誘導(dǎo)其下游的基因FT、LFY（LEAFY）和SOC1，從而促進(jìn)植物開(kāi)花，其中最為主要的基因有FT、SOC1和LFY，它們整合了各途徑對(duì)開(kāi)花時(shí)間的影響［17-19]。春化作用途徑中的主要調(diào)控基因有：FRIGIDA（FRI）、FLOWERING LOCUS C（FLC）、VERNALIZATION 1（VRN1）、VERNALIZATION 2（VRN2）和VERNALIZATION INSENSITIVE3（VIN3）。FRI能促進(jìn)FLC的表達(dá)，抑制開(kāi)花［20，21]。FLC能直接抑制FT與SOC1的表達(dá)，從而造成植物晚開(kāi)花［22]。而自主途徑與春化作用途徑都能通過(guò)抑制FLC基因的表達(dá)來(lái)促進(jìn)開(kāi)花［23]。FT蛋白被認(rèn)為是一直在尋找的成花素，近年來(lái)的研究表明FT蛋白需要在FD的配合下整合調(diào)控莖尖端花芽分化［24]。大量研究表明，F(xiàn)T同源基因在擬南芥、水稻、柑橘、番茄、白楊、牽?；?、梨、向日葵和葫蘆中的過(guò)量表達(dá)都能促進(jìn)開(kāi)花，預(yù)測(cè)了FT基因具有促進(jìn)開(kāi)花的保守功能［25]。

表1 擬南芥中與開(kāi)花相關(guān)的基因

擬南芥開(kāi)花基因的研究開(kāi)啟了植物開(kāi)花基因研究的大門(mén)，在對(duì)擬南芥開(kāi)花基因研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)擬南芥開(kāi)花基因同源基因的搜尋，水稻、谷物、果樹(shù)中與開(kāi)花相關(guān)的基因的研究也已取得了很大的進(jìn)展，與開(kāi)花相關(guān)的基因相繼被克?。?6，27]。

目前對(duì)煙草中存在的與開(kāi)花時(shí)間相關(guān)基因的研究比較少。Kelly等［37]從煙草中克隆了FLORICAULA（FLO）和LFY的同源基因NFL1和NFL2（Nicotiana FLO/LFY），但試驗(yàn)證明它們與植株開(kāi)花并無(wú)直接關(guān)系。Smykal等［38]從煙草中克隆了與開(kāi)花時(shí)間相關(guān)的基因Nicotiana SOC1（NtSOC1）和NicotianaFUL（NtFUL），并經(jīng)過(guò)試驗(yàn)表明它們與光周期特性有關(guān)，其過(guò)表達(dá)能引起煙草提早開(kāi)花。王小彥等［39]通過(guò)低溫等處理煙草后，分析了低溫誘導(dǎo)煙草早花中的SOC1以及一些與代謝相關(guān)的酶、部分植物生長(zhǎng)物質(zhì)的基因表達(dá)變化。李元元［40]根據(jù)不同植物MADS-box家族基因的保守區(qū)序列，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，從烤煙品種NC82中克隆出了MADS-box家族的同源基因。

表2 其他作物中與擬南芥開(kāi)花基因具有同源性的基因

1.3 影響開(kāi)花的生理信號(hào)物質(zhì)

調(diào)控植物開(kāi)花的生理信號(hào)物質(zhì)多種多樣，但其作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。傅永福等［41]研究歸納了多種成花生理信號(hào)物質(zhì)，這些信號(hào)物質(zhì)可分為促進(jìn)型和抑制型，同一信號(hào)物質(zhì)在不同植物的成花誘導(dǎo)過(guò)程中，或起促進(jìn)作用，或起抑制作用，或二者兼而有之，這取決于植物的特性、信號(hào)物質(zhì)的濃度及其狀態(tài)（自由態(tài)或束縛態(tài)），不同植物或同一植物不同發(fā)育時(shí)期對(duì)同一物質(zhì)的敏感性不同。Eriksson等［42]通過(guò)研究赤霉素促進(jìn)開(kāi)花基因的表達(dá)證明，在沒(méi)有受到溫度和光照誘導(dǎo)的條件下，擬南芥可以通過(guò)自身合成的赤霉素促進(jìn)開(kāi)花。Martinez等［43]通過(guò)研究開(kāi)花基因表達(dá)量的變化，證明水楊酸能調(diào)節(jié)植物開(kāi)花，缺乏水楊酸能導(dǎo)致植物晚開(kāi)花，并且水楊酸在光周期途徑與自主途徑中有一定的調(diào)節(jié)作用，但不影響與開(kāi)花時(shí)間相關(guān)的基因的表達(dá)。上述研究表明，不同的生理信號(hào)物質(zhì)對(duì)成花的影響程度、調(diào)控方式存在差異，有的物質(zhì)能夠直接影響與開(kāi)花時(shí)間相關(guān)的基因的表達(dá)，有的則通過(guò)影響其他生理機(jī)能間接調(diào)控開(kāi)花。成花信號(hào)物質(zhì)種類(lèi)繁多且機(jī)理復(fù)雜，各種成花信號(hào)物質(zhì)是怎樣調(diào)控植物開(kāi)花時(shí)間的仍有待更深入的研究且與分子技術(shù)相結(jié)合。

2 影響煙草開(kāi)花的環(huán)境因素

2.1 光照

光對(duì)植物開(kāi)花的影響包括光周期的影響、光質(zhì)的影響和光照強(qiáng)度的影響。人們對(duì)煙草光周期特性進(jìn)行了大量的研究，但由于品種、區(qū)域、試驗(yàn)方法各不相同，不同人的試驗(yàn)結(jié)果不同，對(duì)同一品種，由于地區(qū)和試驗(yàn)方法差異，說(shuō)法也存在差異。曹顯祖等［44]研究認(rèn)為，烤煙品種K326為日中性。顏合洪等［45]通過(guò)試驗(yàn)表明K326對(duì)光周期的反應(yīng)具有短日性，經(jīng)短日照處理后，煙株現(xiàn)蕾明顯提前。在影響開(kāi)花時(shí)間的因素中，光周期起著重要的調(diào)控作用。研究認(rèn)為，藍(lán)光和遠(yuǎn)紅光比紅光更易促進(jìn)植物開(kāi)花［46]。Eskins［47]的研究顯示，藍(lán)光能促進(jìn)擬南芥提早開(kāi)花，紅光則不能。魏勝林等［48]研究顯示，藍(lán)光下培育的菊花花期可提前12 d，紅光處理提前6 d，藍(lán)光促進(jìn)花芽分化和開(kāi)花比紅光效果明顯。肖金香等［49]通過(guò)在煙株旺長(zhǎng)后期覆蓋遮陽(yáng)網(wǎng)研究表示，煙株生長(zhǎng)中后期降低光照強(qiáng)度會(huì)使烤煙現(xiàn)蕾、開(kāi)花期推遲。而生產(chǎn)上煙草移栽季節(jié)遇低溫陰雨天氣易早花有可能是因?yàn)楣庹詹蛔闼?。光?duì)煙草各個(gè)時(shí)期的影響如何值得研究和探討，各品種煙草的光周期性，尤其是各地區(qū)主栽烤煙品種的光周期特性仍需進(jìn)行針對(duì)性的研究，只有針對(duì)各地、各品種進(jìn)行具體試驗(yàn)，才能有效指導(dǎo)生產(chǎn)。

2.2 溫度

有關(guān)溫度對(duì)煙草開(kāi)花的影響，大多數(shù)研究認(rèn)為低溫對(duì)煙草早花具有誘導(dǎo)和促進(jìn)作用［50]。韓錦峰等［51]以K326為材料，研究了低溫對(duì)煙株頂芽發(fā)育及頂芽?jī)?nèi)激素含量的影響，結(jié)果表明到第6片真葉時(shí)，K326才對(duì)低溫敏感，且低溫誘導(dǎo)只有持續(xù)到7葉時(shí)才能有效。金磊等［52]對(duì)低溫誘導(dǎo)后烤煙莖端分生組織的花芽分化過(guò)程的研究則發(fā)現(xiàn)，在相同時(shí)間的苗期低溫逆境下，其他品種可提前開(kāi)花以保持生育周期正常完成，而K326沒(méi)有早花，但整個(gè)生育周期都會(huì)受到不良影響。這與陳衛(wèi)國(guó)等［53]的烤煙品種耐寒性研究結(jié)果一致。不過(guò)也有試驗(yàn)結(jié)果表明，溫度對(duì)烤煙成花的影響無(wú)本質(zhì)作用且沒(méi)有直接關(guān)系［54]。總的來(lái)說(shuō)，低溫誘導(dǎo)煙草早花需要建立在一定的條件下，煙苗的葉齡、溫度的范圍、誘導(dǎo)的時(shí)間長(zhǎng)短以及煙草品種的耐寒性對(duì)是否造成早花均有影響，溫度對(duì)煙草早花的影響與光對(duì)煙草生長(zhǎng)發(fā)育的影響一樣，仍需進(jìn)一步系統(tǒng)的研究。

2.3 水分和養(yǎng)分

一般來(lái)說(shuō)，適當(dāng)?shù)母珊涤欣诨ㄑ糠只寥罎n水或干旱、移栽時(shí)的肥害、過(guò)量施用化學(xué)藥劑、某些微量元素的過(guò)量吸收等都可以造成一定程度的早花［55，56]。有研究顯示，低水平的氮有助于一些長(zhǎng)日照作物的提早開(kāi)花；而重金屬元素鉛和鐵、鉬等微量元素可影響光周期誘導(dǎo)及小麥等的春化作用［57]。洪鯤等［58]通過(guò)試驗(yàn)表明，不同配比的N、P、K、Ga會(huì)對(duì)馬纓杜鵑花芽發(fā)育和花期產(chǎn)生影響，適量的施用N、P、K、Ga能調(diào)節(jié)植物的花期。借鑒其他作物的施肥研究不難發(fā)現(xiàn)，通過(guò)調(diào)控水肥管理或許能有效協(xié)調(diào)煙草的開(kāi)花時(shí)間，目前這方面的研究很少。任雅君等［59]在對(duì)煙草噴施葉面肥KH2PO4的研究中發(fā)現(xiàn)，2.0% KH2PO4不利于煙草開(kāi)花，0.5% KH2PO4有助于促進(jìn)煙草開(kāi)花，因此，當(dāng)煙草種植中施用葉面肥時(shí)需注意把握施用量，以達(dá)到保證煙株正常生長(zhǎng)并適時(shí)發(fā)育的目標(biāo)，防止因化肥施用不當(dāng)引起煙草早花。

3 煙草早花基因的研究技術(shù)

隨著分子生物技術(shù)的不斷發(fā)展，在了解了擬南芥等植物的開(kāi)花基因序列及功能的基礎(chǔ)上，可通過(guò)已知的基因序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR（reverse transcription PCR）及電泳檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)基因的相對(duì)表達(dá)量，通過(guò)測(cè)序分析未知基因片段與已知基因是否具有同源性、再通過(guò)克隆和轉(zhuǎn)基因的方式與功能基因突變體相比較，檢測(cè)該基因是否具有影響植物開(kāi)花的功能，這些研究已得到了廣泛的運(yùn)用［60-63]。但是，由于植物生長(zhǎng)發(fā)育是一個(gè)十分復(fù)雜的過(guò)程，涉及到眾多基因的表達(dá)和調(diào)控，以往的研究局限于某一種或某一類(lèi)基因的行為和功能，不能監(jiān)測(cè)該基因或該類(lèi)基因與其他基因的互作，無(wú)法從整個(gè)基因組水平進(jìn)行研究，利用基因芯片技術(shù)，可以自動(dòng)、快速、平行地檢測(cè)目的材料中成千上萬(wàn)個(gè)基因的表達(dá)情況［64]。利用基因芯片檢測(cè)作物中相關(guān)基因的表達(dá)的方法是多種多樣的。許州達(dá)等［65]在分析了小麥與水稻基因的同源性后，利用水稻的基因芯片檢測(cè)了小麥耐旱的相關(guān)基因的表達(dá)。曾黎瓊等［66]通過(guò)GenBank搜索已發(fā)布的花序發(fā)育基因序列，設(shè)計(jì)特異性的引物，采用PCR法擴(kuò)增，獲得了相應(yīng)的基因片段后利用這些基因片段制備基因芯片，然后用此芯片與已標(biāo)記的非洲菊cDNA雜交，用以分析同一基因在非洲菊不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況和同一基因在不同肥料條件下的表達(dá)情況，但自行設(shè)計(jì)合成芯片的技術(shù)要求與合成成本較高。目前一些生物技術(shù)公司已合成了煙草基因芯片，其中包含了上萬(wàn)個(gè)煙草的基因，但很多基因的功能都還未知，其中許多與開(kāi)花相關(guān)的基因的研究仍需要通過(guò)合成引物，利用RT-PCR檢測(cè)、測(cè)序、序列比對(duì)等技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的探索，以明確煙草中存在的開(kāi)花基因。

4 小結(jié)

早花問(wèn)題一直困擾著煙葉的生產(chǎn)，傳統(tǒng)的研究思路單從環(huán)境因素和生理生化角度進(jìn)行分析，但由于不同的產(chǎn)區(qū)氣候條件的不同、栽培的煙草品種不一致而使研究結(jié)果難以定論。但是，就生產(chǎn)需要和目前的研究成果來(lái)說(shuō)，有針對(duì)性地就某個(gè)地區(qū)、某特定品種進(jìn)行早花研究仍然很有必要且需要更為深入的研究。結(jié)合各煙區(qū)氣候條件不同，主栽品種不同，栽培習(xí)慣不一樣，大田生產(chǎn)中煙草早花的預(yù)防需要結(jié)合各煙區(qū)實(shí)際情況。對(duì)煙草早花生理的理論研究則需要突破地域、品種的限制，除了對(duì)品種、光照、溫度等因素進(jìn)行單一的研究之外，還應(yīng)將影響煙株生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)因素整合起來(lái)，結(jié)合地區(qū)、品種得到系統(tǒng)的研究結(jié)果，為實(shí)踐提供有價(jià)值的參考信息。

分子生物學(xué)的發(fā)展推動(dòng)了遺傳育種研究的發(fā)展，研究煙草的開(kāi)花基因，不僅能從分子機(jī)理角度解釋調(diào)控開(kāi)花的主要因素和過(guò)程，將各個(gè)途徑整合成一個(gè)相互聯(lián)系的系統(tǒng)。同時(shí)，若能在了解煙草開(kāi)花基因的基礎(chǔ)上利用分子設(shè)計(jì)育種技術(shù)選育出抗早花的煙草品種，對(duì)大田生產(chǎn)來(lái)說(shuō)將是預(yù)防煙草早花更為直接、簡(jiǎn)潔的手段。值得注意的是，已知的開(kāi)花基因的同源基因并不一定具有調(diào)控開(kāi)花的作用，且不同作物中，同源基因的調(diào)控機(jī)理是存在一定差異的［68，69]，利用已知的開(kāi)花基因?qū)ふ移渌魑镩_(kāi)花基因的研究需要通過(guò)基因克隆、測(cè)序以及轉(zhuǎn)基因等手段調(diào)整目標(biāo)基因在植物中的表達(dá)，再對(duì)其表型進(jìn)行觀測(cè)才能得出可靠結(jié)論。在煙草開(kāi)花基因的研究基礎(chǔ)上，考慮到基因表達(dá)最終是通過(guò)蛋白質(zhì)的形式來(lái)表現(xiàn)，而且由于密碼子的簡(jiǎn)并性，單憑DNA序列的測(cè)定不能完全說(shuō)明問(wèn)題，因此，對(duì)煙草進(jìn)行蛋白質(zhì)組的研究并將其與基因研究結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，能使研究結(jié)果更為可靠，但目前的研究水平離煙草開(kāi)花蛋白的研究還有很長(zhǎng)的一段路要走。

開(kāi)花基因的研究為煙草早花的研究打開(kāi)了一扇新的大門(mén)，但是，分子水平的研究只有在結(jié)合生理水平研究的基礎(chǔ)上，將形成早花的生理機(jī)制、分子機(jī)制和環(huán)境因素相結(jié)合，才能全面真實(shí)的闡述并解決早花問(wèn)題。隨著煙草基因組測(cè)序的完成，我們相信煙草分子研究的時(shí)代已經(jīng)到來(lái)，生理生化研究未能解決的問(wèn)題，將在傳統(tǒng)研究結(jié)合分子機(jī)理的研究中找尋到答案。

［1] 劉建鋒.煙草早花產(chǎn)生的原因及生產(chǎn)對(duì)策［J] .陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2005（2）：91, 130.

［2] 金磊, 晉艷, 周冀衡, 等.煙草早花機(jī)理及控制的研究進(jìn)展［J] .中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2008, 14（1）：58-62.

［3] Steinberg RA. Premature blossoming：effects of vernalization,seedling age and environment on subsequent growth and flowering of transplanted tobacco［J] . Plant Physiokogv, 1952, 27（4）：745-753.

［4] 張國(guó), 朱列書(shū), 王奎武, 等.煙草早花研究進(jìn)展［J] .作物研究,2005（5）：383-385.

［5] 種康, 雍偉東, 譚克輝.高等植物春化作用研究進(jìn)展［J] .植物學(xué)通報(bào), 1999, 16（5）：481-487.

［6] 郜愛(ài)玲, 李建安, 劉儒, 等.高等植物花芽分化機(jī)理研究進(jìn)展［J] .經(jīng)濟(jì)林研究, 2010, 28（2）：131-136.

［7] 高川, 周清明. 煙草早花研究進(jìn)展［J] .現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2009（8）：101-104.

［8] 方樂(lè)金.植物開(kāi)花機(jī)理研究進(jìn)展及展望［J] .黃山學(xué)院學(xué)報(bào),2007, 9（5）：75-78.

［9] McDaniel CN. Developmental physiology of floral initiation inNicotiana tabacumL［J] . J Exp Bot, 1996, 47（4）：465-475.

［10] 白素蘭, 謝中穩(wěn), 劉永勝, 等.植物的成花逆轉(zhuǎn)［J] .植物生理學(xué)通訊, 2000, 36（3）：252-257.

［11] 岳彩鵬, 韓錦峰, 陳衛(wèi)華.煙草開(kāi)花研究進(jìn)展［J] .煙草科技,2001（9）：36-40.

［12] 李文安, 徐瑞娟, 陳永寧.煙草的不同器官薄層培養(yǎng)形成花芽的研究［J] .實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào), 1989, 22（4）：385-391.

［13] 李文安.黃花煙草（Nicotiana rusticaL.）葉肉原生質(zhì)體花芽的發(fā)育［J] .中國(guó)科學(xué)（B）, 1986（10）：1059-1065.

［14] Komeda Y. Genetic regulation of time to flower inArabidopsis thaliana［J] .Annu Rev Plant Biol, 2004, 55：521-535.

［15] Franklin KA. Light and temperature signal crosstalk in plant development［J] .Current Opinion in Plant Biology, 2009, 12：63-68.

［16] Parcy F. Flowering：a time for integration［J] . International Journal of Developmental Biology, 2005（49）：585-593.

［17] Kardailsky I, Shukla VK, Ahn JH, et al. Activation tagging of the floral inducer FT［J] . Science, 1999, 286（5446）：1962-1965.

［18] Baurle I, Dean C. The timing of developmental transitions in plants［J] . Cell, 2006, 125：655-664.

［19] Blazquez MA, Weigel D. Integration of floral inductive signals inArabidopsis［J] . Nature, 2000, 404：889-892.

［20] Abe M, Kobayashi Y, Yamamoto S, et al. FD, a bZIP protein mediating signals from the floral pathway integrator FT at the shoot apex［J] . Science, 2005, 309（5737）：1052-1056.

［21] Henderson IR, Dean C. Control ofArabidopsisflowering：the chill before the bloom［J] . Development, 2004, 131：3829-3838.

［22] Helliwell CA, Wood CC, Robertson M, et al. TheArabidopsisFLC protein interacts directlyin vivowith SOC1 and FT chromatin and is part of a high-molecular-weight protein complex. Plant J, 2006,46：183-192.

［23] Simpson GG. The autonomous pathway：epigenetic and posttranscriptional gene regulation in the control ofArabidopsisflowering time［J] . Curr Opin Plant Biol, 2004, 7：570-574.

［24] Amasino R. Seasonal and developmental timing of flowering［J] .Plant J, 2010, 61：1001-1013.

［25] Tr?nkner C, Lehmann S, Hoenicka H, et al. Over-expression of anFT-homologous gene of apple induces early flowering in annual and perennial plants［J] .Planta, 2010, 232：1309-1324.

［26] Horvath D. Common mechanisms regulate flowering and dormancy［J] . Plant Science, 2009, 177（6）：523-531.

［27] Matsuda N, Ikeda K, Kurosaka M, et al. Early flowering phenotype in transgenic pears（Pyrus communisL.）expressing the CiFT gene［J] . J Japan Soc Hort Sci, 2009, 78（4）：410-416.

［28] Molinero-Rosales N, Latorre A, Jamilena M, et al. SINGLE FLOWER TRUSS regulates the transition and maintenance of flowering in tomato［J] . Planta, 2004, 218：427-434.

［29] Wada M, Cao Q, Kotoda N, et al. Apple has two orthologues of FLORICAULA/LEAFY involved in flowering［J] . Plant Molecular Biology, 2002, 49：567-577.

［30] 田素波. 菊花開(kāi)花時(shí)間基因CmCO和CmFT的克隆與表達(dá)分析和遺傳轉(zhuǎn)化［D] .泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011.

［31] Hemming MN, Peacock WJ, Dennis ES, et al. integration of seasonal flowering time responses in temperate cereals［J] . Plant Signal Behav, 2008, 3（8）：601-602.

［32] Katsuhiko S, Li TP, Tamotsu H. Gibberellin promotes flowering of chrysanthemum by upregulating CmFL, a chrysanthemum FLORICAULA/LEAFY homologous gene［J] . Plant Sci , 2009, 176：643-649.

［33] Kojima S, Takahashi Y, Kobayashi Y, et al. Hd3a, a rice ortholog of theArabidopsisFT gene, promotes transition to flowering downstream of Hd1 under short-day conditions［J] . Plant Cell Physiol,2002, 43（10）：1096-1105.

［34] Takahashi Y, Shimamoto K. Heading date 1（Hd1）, an ortholog ofArabidopsisCONSTANS, is a possible target of human selection during domestication to diversify flowering times of cultivated rice［J] . Genes Genetic Syst, 2011, 86（ 3 ）：175-182.

［35] Pnueli L, Carmel-Goren L, Hareven D, et al. The SELF-PRUNING gene of tomato regulates vegetative to reproductive switching of sympodial meristems and is the ortholog of CEN and TFL1［J] .Development, 1998, 125（11）：1979-1989.

［36] Molinero-Rosales N, Jamilena M, Zurita S, et al. FALSIFLORA,the tomato orthologue of FLORICAULA and LEAFY, controls flowering time and floral meristem identity［J] . Plant J, 1999, 20（6）：685-693.

［37] Kelly AJ, Bonnlander MB, Meek-Wagner DR, et al. NFL , the tobacco homolog of FLORICA ULA and L EAF Y, is transcr iptionally expressed in both vegetative and floral meristems［J] .Plant Cell, 1995, 7（2）：225-234.

［38] Smykal P, Gennen J, De Bodt S, et al. Flowering of strict photoperiodicNicotianavarieties in non-inductive conditions by transgenic approaches［J] . Plant Mol Biol, 2007, 65（3）：233-242.

［39] 王小彥.低溫誘導(dǎo)煙草早花相關(guān)因子的分析［D] .鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2009.

［40] 李元元.低溫誘導(dǎo)煙草早花研究與煙草MADS-box基因的同源克?。跩] .中國(guó)煙草科學(xué), 2011, 32（3）：21-27.

［41] 傅永福, 孟繁靜.植物的成花生理信號(hào)［J] .中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 1998, 3（3）：1-11.

［42] Eriksson S. The role of gibberellins in the regulation ofArabidopsisflowering time［M] . Umea：Doctor’s Dissertation, 2006.

［43] Martinez C, Pons E, Prats G, et al. Salicylic acid regulates flowering time and links defence responses and reproductive development［J] . The Plant Journal, 2004, 37：209-217.

［44] 曹顯祖, 嚴(yán)雪風(fēng), 劉秀麗.烤煙優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培的生理基礎(chǔ)研究I：煙草品種光溫反應(yīng)的發(fā)育特性研究［J] .江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),1991, 12（4）：27-31.

［45] 顏合洪, 趙松義.生態(tài)因子對(duì)烤煙品種發(fā)育特性的影響［J] .中國(guó)煙草科學(xué), 2001（2）：15-18.

［46] Brown JA, Klein WH. Photo-morphogenesis inArabidopsis thaliana（L.）heynh：threshhold intensities and blue-far-red synergism in floral induction［J] . Plant Physiol, 1971, 47（3）：393-99.

［47] Eskins K. Light-quality effects onArabidopsisdevelopment, Red,blue and far-red regulation of flowering and morphology［J] .Physiol Plant, 1992, 86：439-444.

［48] 魏勝林, 王家保, 李春保.藍(lán)光和紅光對(duì)菊花生長(zhǎng)和開(kāi)花的影響［J] . 園藝學(xué)報(bào), 1998, 25（2）：203-204.

［49] 肖金香, 王燕, 李暉, 等．遮陽(yáng)網(wǎng)覆蓋對(duì)烤煙生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響研究［J] .中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2003, 11（4）：152-154．

［50] 曹顯祖, 嚴(yán)雪風(fēng), 劉秀麗.烤煙優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培的生理基礎(chǔ)研究I：煙草品種光溫反應(yīng)的發(fā)育特性研究［J] .江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),1991, 12（4）：27-31.

［51] 韓錦峰, 岳彩鵬, 劉華山, 等.烤煙生長(zhǎng)發(fā)育的低溫誘導(dǎo)研究Ⅰ、苗期低溫誘導(dǎo)對(duì)烤煙頂芽發(fā)育及激素含量的影響［J] .中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2002, 8（1）：25-29.

［52] 金磊, 晉艷, 周冀衡, 等.苗期低溫對(duì)烤煙花芽分化及發(fā)育進(jìn)程的影響［J] .中國(guó)煙草科學(xué), 2007, 28（6）：1-5.

［53] 陳衛(wèi)國(guó), 李永亮, 周冀衡, 等.烤煙品種耐寒性及相關(guān)生理指標(biāo)的研究［J] .中國(guó)煙草科學(xué), 2008, 29（3）：39-42, 47.

［54] 招啟柏, 呂冰, 王廣志, 等.苗期低溫對(duì)烤煙葉數(shù)及現(xiàn)蕾時(shí)間的影響［J] .中國(guó)煙草學(xué)報(bào), 2008, 14（3）：27-31, 35.

［55] 王東勝, 劉貫山, 李章海.煙草栽培學(xué)［M] .合肥：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版, 2002：284.

［56] 陳超, 夏春華.海南地區(qū)年菊花期的調(diào)控技術(shù)［J] . 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué), 1998（6）：59-65.

［57] 張華峰, 孟慶忠, 張立軍.環(huán)境因子在植物成花誘導(dǎo)中的作用及其機(jī)理［J] .生物學(xué)通報(bào), 2000, 35（7）：16-18.

［58] 洪鯤, 張習(xí)敏, 乙引, 等.營(yíng)養(yǎng)元素對(duì)馬纓杜鵑花芽發(fā)育和花期的影響［J] .北方園藝, 2010（21）：84-86.

［59] 任雅君, 梅洛銀, 程帥, 等. 噴施KH2PO4對(duì)盆栽花煙草開(kāi)花的影響［J] . 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38（10）：5084-5085,5187.

［60] Molinero-Rosales N, Latorre A, Jamilena M, et al. SINGLE FLOWER TRUSS regulates the transition and maintenance of flowering in tomato［J] . Planta, 2004, 218：427-434.

［61] 曹秋芬, 和田雅人, 盂玉平, 等.蘋(píng)果LEAFY同源基因的cDNA克隆與表達(dá)分析［J] .園藝學(xué)報(bào), 2003, 30（3）：267-271.

［62] Lifschitz E, Eviastar T, Rozman A, et al. The tomato FT ortholog triggers systemic signals that regulate growth and flowering and substitute for diverse environmental stimuli［J] .Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103：6398-6403.

［63] Flachowsky H, Hanke MV, Peil A, et al. Overexpression of LEAFY in apple leads to a columnar phenotype with shorter internodes［J] . Planta, 2010, 231（2）：251-63.

［64] 許志茹, 李玉花. 基因芯片技術(shù)在植物研究中的應(yīng)用［J] . 生物技術(shù), 2004, 14（6）：70-72.

［65] 許州達(dá), 景瑞蓮, 甘強(qiáng), 等. 用水稻基因芯片篩選小麥耐旱相關(guān)基因［J] . 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2007, 15（5）：821-827.

［66] 曾黎瓊, 張偉, 段玉云, 等.利用基因芯片分析非洲菊花序發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)［J] . 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2009, 22（3）：759-763.

［67] http：//www.ebioservice.com/show_product.asp?id=458.

［68] Bohlenius H, Huang T, Charbonnel-Campaa L, et al. CO/FT regulatory module controls timing of flowering and seasonal growth cessation in trees［J] . Science, 2006, 312：1040-1043.

［69] Tsuji H, Taoka K, Shimamoto K. Regulation of flowering in rice：two florigen genes, a complex gene network, and natural variation［J] . Curr Opin Plant Biol, 2011, 14（1）：45-52.