β-連環(huán)蛋白，E-鈣蛋白，P53在結直腸癌中的表達及意義

譚麗珊 張振斌

（韶關市第一人民醫(yī)院，廣東 韶關 512000）

β-連環(huán)蛋白，E-鈣蛋白，P53在結直腸癌中的表達及意義

譚麗珊 張振斌

（韶關市第一人民醫(yī)院，廣東 韶關 512000）

目的研究結直腸癌中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53的表達，探討其相關性及臨床意義。方法采用免疫組化對80例結直腸癌的β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53進行檢測。結果β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53在正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤及結直腸癌細胞組間表達差異有顯著的統(tǒng)計學意義。結論在結直腸癌組織和正常組織中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53均有不同程度的表達，陽性表達率差異有顯著性。檢測其表達異常對判斷臨床進展、推測預后以及制定針對性的治療方案有一定的參考價值。

結直腸癌；β-連環(huán)蛋白；E-鈣蛋白；P53；免疫組化

結腸直腸癌是人類最常見的消化道惡性腫瘤之一，且近年來其發(fā)病率有明顯上升趨勢。結腸癌的發(fā)生到發(fā)展的過程是設計到癌基因過度激活的過程，抑癌基因突變缺失，細胞外基分解酶、黏附分子及細胞因子等多種因素共同作用。復發(fā)和轉移嚴重影響病人生存率和死亡率，是腫瘤患者致死的重要原因。E-鈣蛋白是重要細胞間黏附分子，其在一定的條件之下可有效的調節(jié)細胞與基質或者細胞之間的黏附反應，同時維持完整性性和組織結構形態(tài)，參與分化調節(jié)。β-連環(huán)蛋白和E-鈣蛋白共同組成的E-cadherin/catenin復合物，此種復合物可有效的抑制腫瘤細胞侵襲，并有效的維持患者上皮細胞組織結構完整性。本文旨在聯(lián)合應用β-連環(huán)蛋白，E-鈣蛋白，P53，探討結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉移的過程中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次試驗收集廣東醫(yī)學院附屬韶關醫(yī)院，韶關市第一人民醫(yī)院病理科2010年10月至2012年10月期間病理科存檔50例結腸癌石蠟標本，30例直腸癌標本，所有的標本在手術前均沒有進行免疫治療、化療或者放療。所有標本的一般資料保存完好，通過對一般資料進行統(tǒng)計，男性顯示為47例，女性為33例，年齡范圍在30～81歲，平均年齡為（55.4±3.5）歲。80例標本中有低分化腺癌、中分化腺癌、高分化腺癌例數(shù)分別為12例、55例、14例。淋巴結轉移陽性組、陰性組分別為27例和50例。取距離癌灶邊緣5cm以上的有14例結直腸黏膜，19例內鏡活檢管狀腺瘤做對照。

1.2 方法

所有標本均使用4%中性甲醛進行固定后石蠟包埋，切片厚度為4μm，其可作為HE染色機免疫組織化學染色。β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白、免疫組化試劑盒及P53單克隆抗體的生產(chǎn)廠家為福州邁新生物技術公司產(chǎn)品。在使用的過程中嚴格按照說明書的操作執(zhí)行，使用一支陽性組織切片進行對照，PBS替代第一抗體作陰性對照。

1.3 療效判定

β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白陽性表達在細胞質內部，P53陽性定位在細胞核內部。評價標準是根據(jù)陽性細胞所占比例及染色體強度：400倍視野下結束500個細胞，染色體深度主要為多數(shù)細胞的呈色反應：0分無染色，1分表現(xiàn)為淡黃色，2分表現(xiàn)為深黃色或黃色，3分表現(xiàn)為棕褐色或褐色。陽性細胞所占的比例進行評分，0分為陰性，1分為陽性小雨等于10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為76%～100%。陽性百分比×染色強度＞3分表現(xiàn)為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 13.0軟件系統(tǒng)，組間比較采用χ2檢驗與連續(xù)性校正檢驗，相關分析采用Spearman等級相關分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，以P＜0.001為差異有顯著的統(tǒng)計學意義。

2 結 果

β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白，P53在不同病變結腸直腸組織中的表達：β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白、P53在正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤及結直腸癌細胞中有陽性表達檢驗顯示在正常結直腸黏膜、結直腸腺瘤及結直腸癌細胞組間陽性表達率的差異有顯著的統(tǒng)計學意義（P＜0.001），見圖1～6，表1。

圖1 β-連環(huán)蛋白在腸癌中弱陽性表達(EnVision×100)

圖2 E-鈣蛋白在腸癌中弱陽性表達 (EnVision×100)

圖3 P53在腸癌中強陽性表達(EnVision×40)

圖4 β-連環(huán)蛋白在正常腸黏膜中強陽性表達(EnVision×100)

圖5 E-鈣蛋白在正常腸黏膜中強陽性表達(EnVision×40)

圖6 P53在正常腸黏膜中陰性表達 (EnVision×40)

表1 β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53在結直腸癌、管狀腺瘤及正常結直腸黏膜的表達

結直腸癌中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白，P53的表達與臨床病理參數(shù)的關系經(jīng)χ2檢驗，β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白的表達與淋巴結轉移及臨床分期之間有一定關聯(lián)（P＜0.05），經(jīng)過分析統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)患者的性別、年齡、浸潤程度及腫瘤大小之間無明顯關系（P＞0.05），PS5表達和浸潤深度、淋巴結轉移之間有一定的關系（P＜0.05）,和患者的性別年齡、臨床分期及腫瘤大小無明顯關系（P＞0.05）。詳情見表2。

表2 β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白和P53表達與結直腸癌臨床病理特征的關系

3 討 論

鈣黏蛋白（cadherin）是一類介導細胞間同質黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細胞內區(qū)三部分構成。E-鈣蛋白的胞內肽段與一組稱為連環(huán)蛋白（catenin）的細胞骨架蛋白結合，參與細胞信號轉導、組織形態(tài)發(fā)生和胚胎發(fā)育等過程。E-鈣蛋白被看作是上皮細胞連接性黏著劑，其表達下調或不表達是上皮細胞離散的分子基礎，提示E-鈣蛋白具有腫瘤侵襲和轉移抑制功能，E-鈣蛋白基因是一個重要的腫瘤轉移抑制基因[1，2]。β-連環(huán)蛋白作為一種多功能蛋白，能與E-鈣蛋白相互作用而參與細胞黏附，是Wnt信號通路中的關鍵參與成員調節(jié)該通路。Wnt信號是組織發(fā)育、分化的必須的關鍵信號，Wnt信號傳導異常將參與腫瘤的發(fā)生[7]。β-連環(huán)蛋白蛋白在該信號傳導途徑中起著將信號由胞內傳遞至核內的作用，是該途徑關鍵調節(jié)點。國外學者研究發(fā)現(xiàn)β-連環(huán)蛋白在人類腫瘤細胞中表達減弱或異常表達[3，4]。P53是腫瘤抑制基因，分為野生型和突變型兩種。突變型P53癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，并直接影響其生物學行為[5]。P53突變是癌組織中公認的分子水平的改變，改變的結果導致了轉移率的升高，與患者術后生存期縮短密切相關，該基因突變可作為一種獨立可靠的生物學指標來判斷患者的預后[6]。本研究通過對80例結直腸癌組織中E-鈣蛋白、β-連環(huán)蛋白，P53進行檢測，發(fā)現(xiàn)結直腸癌組織中P53較正常組織陽性表達率明顯升高，由此可將P53作為檢測腸癌的重要指標，并發(fā)現(xiàn)P53陽性患者其淋巴結轉移率、臨床分期明顯增高，提示P53陽性腫瘤具有較強的轉移特性，預后較差。β-連環(huán)蛋白在結直腸癌組織中的陽性表達率明顯低于正常組。β-連環(huán)蛋白及E-鈣蛋白的表達下降或缺失提示細胞間的相互黏附力減弱，腫瘤細胞容易分散而向外浸潤性生長、脫離原發(fā)灶而發(fā)生轉移。實驗發(fā)現(xiàn)β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白與組織分化程度及TNM分期相關，且隨著分化程度的降低、淋巴結轉移、TNM分期升高其表達減弱。以上研究結果提示E-鈣蛋白，和β-連環(huán)蛋白，P53可作為結直腸癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤的參考指標。綜上所述，結直腸癌的發(fā)生、演變是多個基因、多種因子共同作用的結果，它們之間相互促進或抑制。做上述蛋白因子的檢測，不僅能了解疾病發(fā)生、發(fā)展的情況，也為臨床的診斷治療、判斷預后提供了依據(jù)。

[1] 張瑞,徐江.β-連環(huán)蛋白和E-cadherin 在腫瘤發(fā)展中的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2009,9(13):2573-2575.

[2] Roylance R,Droufakou S,Gorman P,et al.The role of E-cadherin in lowgrade ductal breast tumourigenesis[J].J Pahtol,2003,200(1):53-58.

[3] Wang HL,Wang J,Xiao SY.Elevated protein expression of cyclinDl and Fra-1but decreased expression of c-myc in human colorectal adenocarcinomas overexperssing beta-catenin[J]. Cancer,2002,1014,101(4):301-310.

[4] 史冬濤,陳衛(wèi)昌,張寶峰,等.組織芯片檢測胃腺癌上皮細胞鈣黏附蛋白和β-連環(huán)蛋白表達及其臨床意義[J].胃腸病學,2006, 11(9):533.

[5] Greenblatt MS,Bennet WP,Hollstein M.Mutation in the P53 tumor suppressor gene:clue to cancer etiology and molecular pathogenesis[J].Cancer Res,1994,54(18):4855-4856.

[6] 邵琳方,高宗人,衛(wèi)功銓,等.食管癌和賁門癌的外科治療[J].中華外科雜志,2001,39(1):44-46.

[7] Osterheld MC,Bian YS,Bosman FT,et a1.Bet catenin expression and it's associat ion with prognost ic factors in adenoeareinoma developed in Brrett esophagus[J].Ant J Clin Pathol,2002,l17(4):4 51-456.

Expression and Significance of Beta-catenin,E-calcium protein,P53 in Colorectal Cancer

TAN Li-shan, ZHANG Zhen-bin

(First People's Hospital of Shaoguan, Shaoguan 512000, China)

ObjectiveTo investigate the expressions of β-catenin, E- cadherin and P53 in colorectal cancer and their clinicopathologic characteristics of colorectal cancer.MethodsThe expression of β-catenin, E- cadherin and P53 was detected by using immunohistochemistry in 80 cases with colorectal cancer.ResultsThe expression of β-catenin, E- cadherin and P53 in normal colorectal mucosa, atypical hyperplasia colorectal mucosa and colorectal cancer cells was statistical significantConclusionβ-catenin, E-cadherin and P53 express in colorectal cancer tissues and normal tissues in different degree, but the positive expression rate was significantly different. The testing of their abnormal expressions is some valuable for judging clinical progress, presuming prognosis and making out special treatment protocol.

Colorectal cancer; β-catenin; E-cadherin; P53; Immunohistochemistry

R735.3+5

B

1671-8194（2013）15-0007-02