瘡靈液膠原對創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用

任曉梅，姚 昶，朱永康，趙 輝，何 鵬，陳 靈，樂音子，曹東陽，郭檬檬

(1江蘇省中醫(yī)院，南京210029;2南京中醫(yī)藥大學(xué))

瘡靈液是江蘇省中醫(yī)院于20世紀(jì)80年代研制并在臨床應(yīng)用的一種純中藥不含汞外用藥液制劑，由大黃、紅花、訶子、黃蜀葵花等藥物組成。我們的前期研究［1～4］證明瘡靈液有較好的抗炎和促進(jìn)傷口愈合的作用。進(jìn)一步實驗顯示瘡靈液抑制血管新生并呈現(xiàn)一定的劑量依耐性，載入修飾后膠原后可以改善其抑制血管新生的作用，有利血管成熟，發(fā)揮了各自的優(yōu)勢［5］。近來，我們觀察了瘡靈液膠原對大鼠背部機(jī)械性創(chuàng)面愈合的影響，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1．1 實驗材料 雄性SPF級SD大鼠48只，體質(zhì)量200～220 g，江蘇省中醫(yī)院動物實驗中心飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為(22±2)℃、濕度為40% ～50%、人工光照(12 h正常明暗周期)，自由攝取專業(yè)動物飼料。瘡靈液原液由江蘇省中醫(yī)院制藥廠生產(chǎn)，批號:950118，pH 為 7．4，生藥 1 g/mL，取 0．2 mL 均勻載入直徑1 cm、厚度0．2 cm的修飾后膠原中，接著于－50℃凍干形成瘡靈液膠原。TNF-α試劑盒、IL-6 ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司。

1．2 實驗方法 將48只大鼠隨機(jī)分為4組，各12只，組內(nèi)編號，分別為對照組、膠原組、瘡靈液組、瘡靈液膠原組。4組大鼠腹部注射麻醉后，于背部制作機(jī)械性全層皮膚創(chuàng)面，創(chuàng)面直徑1．5 cm，呈圓形，深及皮下肌筋膜。將大鼠創(chuàng)面的創(chuàng)緣以塑料墊圈(內(nèi)徑1．5 cm)縫合固定。對照組以0．2 mL生理鹽水載入紗布覆蓋創(chuàng)面，膠原組用膠原覆蓋創(chuàng)面，瘡靈液組以瘡靈液0．2 mL載入無菌紗布中覆蓋創(chuàng)面，瘡靈液膠原組以瘡靈液膠原覆蓋創(chuàng)面，外層無菌敷料包扎，隔日更換。造模時及造模后第3、7、14、28天測定創(chuàng)面面積，造模后第3、7天測創(chuàng)面炎癥積分，造模時及造模后第3、7天取創(chuàng)面肉芽組織用于檢測TNF-α、IL-6。①創(chuàng)面面積測定:用Image J軟件測定創(chuàng)面面積［3］。②創(chuàng)面炎癥積分:創(chuàng)面滲液性狀分為血清樣、漿液樣、混濁樣;滲液量為極少量、少量、中量、大量時分別計為1、2、3、4 分［3］，滲液量以浸透紗布的層數(shù)來觀察(＜1層為極少量，≥1層但＜4層為少量，≥4層但＜8層為中量，≥8層為大量)，創(chuàng)面愈合為0分。③肉芽組織中TNF-α、IL-6測定:將標(biāo)本稱重后予以低溫(4℃)勻漿，按試劑盒說明測定450 nm處光密度值(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得出TNF-α與IL-6含量，然后除以肉芽組織的質(zhì)量(g)，得到該標(biāo)本的TNF-α、IL-6含量。

1．3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18．0統(tǒng)計軟件。計量資料以ˉx±s表示，比較用t檢驗。P≤0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組大鼠創(chuàng)面面積比較 結(jié)果見表1。造模時各組的創(chuàng)面面積均為1．6 cm2。治療第3天，與對照組及瘡靈液組相比，膠原組創(chuàng)面面積開始減小。治療第7天，各組創(chuàng)面均顯著減小，膠原組與瘡靈液膠原組減小至造模時的1/3左右，是對照組及瘡靈液組面積的1/2左右。治療第14天，膠原組與瘡靈液膠原組創(chuàng)面已趨向愈合，瘡靈液組創(chuàng)面面積亦顯著小于對照組。治療第28天，各組創(chuàng)面均趨向愈合，其中膠原組與瘡靈液膠原組完全愈合，另兩組仍有一半大鼠創(chuàng)面未愈合。

2．2 各組大鼠創(chuàng)面炎癥積分比較 結(jié)果見表2。治療第3天，對照組創(chuàng)面炎癥積分約4．5分，主要表現(xiàn)為創(chuàng)面中等量漿液樣滲液;瘡靈液組及瘡靈液膠原組創(chuàng)面滲液量顯著少于其余各組，表現(xiàn)為少量血清樣滲液;膠原組創(chuàng)面滲液量亦少于對照組，炎癥積分低于對照組。治療第7天，各組創(chuàng)面滲液量均顯著減少，對照組仍有部分創(chuàng)面滲液為漿液樣，其余各組均表現(xiàn)為極少量血清樣滲液，炎癥積分均低于對照組，瘡靈液膠原組積分顯著低于膠原組。治療第14天，各組創(chuàng)面已顯著減小，趨向愈合，炎癥不明顯，故不再評價。

表1 各組大鼠創(chuàng)面面積比較(cm2，ˉx±s)

表2 各組大鼠創(chuàng)面炎癥積分比較(分，ˉx±s)

2．3 各組大鼠創(chuàng)面肉芽組織TNF-α、IL-6含量比較

結(jié)果見表3。治療第3天，對照組TNF-α含量升高，至7天時降低并顯著低于造模時。治療第3天與第7天創(chuàng)靈液組及創(chuàng)靈液膠原組TNF-α均顯著低于對照組。IL-6含量變化較TNF-α劇烈，治療第3天對照組IL-6含量急劇上升至造模時的5～6倍，至第7天時仍為造模時的3～4倍，治療第3及7天創(chuàng)靈液組及創(chuàng)靈液膠原組IL-6含量顯著低于對照組與膠原組，第3天僅為造模時的2倍左右，第7天與造模時含量基本一致;膠原組IL-6含量低于對照組。

3 討論

近20年來，江蘇省中醫(yī)院用瘡靈液治療皮膚慢性潰瘍?nèi)〉昧溯^好的療效。我們前期對887例瘡瘍病例進(jìn)行臨床應(yīng)用觀察，總治愈率為79．8%，總有效率為98．54%，用藥后未見有不良反應(yīng)［2］。藥理研究［1］顯示，瘡靈液具有抑制創(chuàng)面肉芽組織炎癥與血栓形成及抑菌作用。進(jìn)一步研究［5］發(fā)現(xiàn)，瘡靈液可以抑制血管新生，但載入修飾后膠原后其抑制血管新生的作用得到改善。本研究進(jìn)一步探討瘡膠原后對大鼠背部機(jī)械性皮膚創(chuàng)面愈合的影響及其炎癥機(jī)制。

表3 各組大鼠創(chuàng)面肉芽組織中TNF-α、IL-6含量比較(ng/L，ˉx±s)

創(chuàng)面的愈合需要經(jīng)過炎癥、增殖與塑形三個階段，其中炎癥階段是愈合的基礎(chǔ)，機(jī)體內(nèi)局部各種炎癥因子促進(jìn)或破壞組織的愈合［6］。本研究發(fā)現(xiàn)，瘡靈液膠原可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合，瘡靈液及瘡靈液膠原均可顯著減少創(chuàng)面的炎癥滲液。通過炎癥因子TNF-α及IL-6含量觀察發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)靈液雖然抑制創(chuàng)面炎癥反應(yīng)，但不會延遲創(chuàng)面的愈合過程。TNF-α與IL-6是機(jī)體在創(chuàng)面愈合過程中產(chǎn)生的參與炎癥反應(yīng)的兩種重要細(xì)胞因子，具有雙重功能，一方面在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗感染等方面有著重要作用;另一方面，這兩種因子如大量釋放，局部濃度過高，會導(dǎo)致局部組織壞死，影響組織增殖與愈合［7］。因此，調(diào)節(jié)創(chuàng)面炎癥因子可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合。董瑤等［8］通過脂肪干細(xì)胞降低小鼠創(chuàng)面肉芽炎癥因子IL-6含量而促進(jìn)創(chuàng)面愈合，創(chuàng)靈液膠原顯著抑制組織內(nèi)IL-6及TNF-α的分泌，在應(yīng)用第7天創(chuàng)面IL-6含量已經(jīng)降至初始創(chuàng)面含量水平，說明創(chuàng)面愈合完全進(jìn)入增殖期，而對照組組織IL-6含量仍然是初始含量的4倍。我們認(rèn)為，創(chuàng)靈液膠原能夠干預(yù)創(chuàng)面炎癥反應(yīng)而促進(jìn)成其愈合。

膠原作為生物體各種結(jié)締組織的主要組成分，可在體內(nèi)降解且降解碎片具有組織相容性，已成為組織工程中應(yīng)用最廣的生物材料。中藥載入可以進(jìn)一步提高療效［9，10］，膠原經(jīng)過修飾后可以提高組織相容性及促進(jìn)血管生成作用，有利于組織修復(fù)［11，12］。本研究結(jié)果顯示，瘡靈液膠原可以發(fā)揮瘡靈液干預(yù)創(chuàng)面炎癥反應(yīng)及膠原促進(jìn)創(chuàng)面血管新生的作用，進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

［1］張愛華，陸茵，許慧琪，等．瘡靈液的藥理研究［J］．江蘇藥學(xué)與臨床研究，1997，1(4):14-18．

［2］王朝暉，任菊琴，宋金斌，等．瘡靈液用于潰瘍的臨床及實驗研究［J］．山西護(hù)理雜志，1997，11(05):200-203．

［3］楊能華．瘡靈液治療缺血性潰瘍38例［J］．南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1997，13(5):310-311．

［4］宋金斌，王朝暉，任菊琴，等．瘡靈液的研制和臨床應(yīng)用［J］．時珍國藥研究，1996，7(5):318-320．

［5］張宇軒，姚昶，朱永康，等．瘡靈液載入膠原對血管新生影響的實驗研究［J］．南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，29(3):251-254．

［6］張旭輝，董建勛，李健，等．回陽生肌方藥對慢性皮膚潰瘍大鼠創(chuàng)面愈合及炎癥因子的影響［J］．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，36(3):170-173．

［7］劉洪愛，江新泉，陳強(qiáng)，等．糖尿病大鼠骨折愈合過程中炎癥細(xì)胞因子的變化［J］．山東醫(yī)藥，2013，53(1):35-36．

［8］董瑤，董飛君，李幼華，等．脂肪干細(xì)胞調(diào)節(jié)創(chuàng)面炎癥反應(yīng)并促進(jìn)創(chuàng)面愈合［J］．醫(yī)學(xué)研究雜志，2012，41(3):100-103．

［9］郭檬檬，姚昶，陳德軒，等．不同濃度生肌玉紅膠原對雞胚尿囊膜血管新生的影響［J］．微循環(huán)學(xué)雜志，2013，23(1):5-7．

［10］姚昶，陳德軒，卞衛(wèi)和，等．生肌玉紅膠原促進(jìn)大鼠后肢缺血組織血管新生的實驗研究［J］．中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2013，20(4):389-394．

［11］魏慶，任偉業(yè)，張晶，等．膠原海綿在慢性下肢潰瘍中應(yīng)用臨床療效觀察［J］．安徽醫(yī)藥，2012，16(7):949-951．

［12］繆雪華，周勇，任偉業(yè)，等．膠原海綿促進(jìn)肉芽生長與創(chuàng)面愈合實驗研究［J］．中國當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19(10):26-30．