HPLC-ELSD法測(cè)定玉屏風(fēng)膠囊中黃芪甲苷的含量

陳錫琨

（廣西南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001）

HPLC-ELSD法測(cè)定玉屏風(fēng)膠囊中黃芪甲苷的含量

陳錫琨

（廣西南寧食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001）

目的 建立高效液相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPCL-ELSD）測(cè)定玉屏風(fēng)膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法 色譜柱為phenomenex Genini (5μm，4.6×250mm，C18)；流動(dòng)相為乙腈-水（75∶25）；流速為1.0mL/min，柱溫：30℃。蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)條件：漂移管溫度為70℃，霧化管溫度為40℃。結(jié)果 黃芪甲苷在0.3038～1.519μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均加樣回收率為98.36%，RSD為0.58%（n=6）。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便快捷，具有良好的精密性和穩(wěn)定性，測(cè)定結(jié)果可靠，可用于本產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

玉屏風(fēng)膠囊；高效液相-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPCL-ELSD）；黃芪甲苷；含量測(cè)定

玉屏風(fēng)膠囊是國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS3-033(Z-033)-2003(Z)。玉屏風(fēng)膠囊由黃芪、防風(fēng)、白術(shù)（炒）組成，具有益氣，固表，止汗等功效，常用于表虛不固，自汗惡風(fēng)，面色蒼白或體虛易感風(fēng)邪等疾病。本方中的黃芪是補(bǔ)氣虛的主藥，而黃芪甲苷是黃芪的活性成分。該標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)目制訂時(shí)采用的是薄層掃描法，該方法對(duì)黃芪甲苷的含量控制存在諸多不確定因素，還沒(méi)有真正達(dá)到對(duì)該品種質(zhì)量的最佳可控性。筆者參考文獻(xiàn)[2-5]，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(HPLC-ELSD)對(duì)玉屏風(fēng)膠囊中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定。，結(jié)果證明該法簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，可用于玉屏風(fēng)膠囊產(chǎn)品質(zhì)量的控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津公司)；Model400型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國(guó)Sofia公司)；WML色譜工作站（威馬龍色譜科技公司），GCK3308型全自動(dòng)空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；YB-Z型真空恒溫減壓干燥箱（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；KQ-300型超聲清洗器（功率300W 55Hz）（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供批號(hào)：0781-200511，供含量測(cè)定用)；玉屏風(fēng)膠囊（生產(chǎn)廠家：江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，批號(hào)：120315、120501、120506）；水為純凈水；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

圖1 色譜圖（A：對(duì)照品；B：供試品；C：陰性樣品）

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品（室溫減壓干燥12h以上）0．01519g，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL置10mL量瓶中稀釋至刻度即得。

2.1.2 樣品的制備

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置250mL錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，搖勻，超聲提取30min，取出放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次25mL；合并正丁醇萃取液，用氨試液洗2次，每次25mL，棄去氨水層，將正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

表2 黃芪甲苷含量結(jié)果（mg/粒）

2.1.3 陰性樣品溶液制備

取按處方比例制備缺黃芪藥材的陰性樣品，同2.2法制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：phenomenex Genini (5μm，4.6×250mm，C18)；流動(dòng)相：乙腈-水（75∶25）；流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)條件：漂移管溫度：70℃，霧化管溫度：40℃。分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下，供試品中黃芪甲苷與其他成份色譜峰能完全分離，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾（圖1）。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液5，10，15，20，25μL按上述色譜條件分別注入液相色譜儀，以黃芪甲苷對(duì)照品進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（x），以黃芪甲苷對(duì)照品峰面積的自然對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)（y），線性回歸得回歸方程，y=1.57458x×105+4.92807×105 r=0.9997，結(jié)果表明黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.3038～1.519μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值與峰面積的對(duì)數(shù)值線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取2.1制備的溶液分別精密吸取10μL和20μL按2.3色譜條件分別重復(fù)進(jìn)樣5次，RSD為0.87%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液分別于0、2、6、12、18、24h按2.3色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果RSD為0.63%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)玉屏風(fēng)膠囊樣品按2.2方法制備5份供試液，依法測(cè)定含量，RSD為0.78%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)120506）各0.5g，精密稱定，共6份，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液1mL（0.3038mg），按2.2項(xiàng)下方法制備回收溶液，再按2.3色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.8 樣品含量測(cè)定

按2.2項(xiàng)下的配制方法分別吸取對(duì)照品溶液10μL、20μL及供試品溶液20μL根據(jù)2.3項(xiàng)下的色譜條件對(duì)5個(gè)批號(hào)的玉屏風(fēng)膠囊進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

3.1 本實(shí)驗(yàn)曾采用水浴加熱回流30min、60min、超聲處理30min和60min四種方法對(duì)玉屏風(fēng)膠囊進(jìn)行提取分析比較，結(jié)果顯示，加熱回流30min，測(cè)定結(jié)果偏低，說(shuō)明時(shí)間過(guò)短影響測(cè)定成分提?。黄渌N提取方法所得的結(jié)果非常接近，（RSD=0.2%以下）。因超聲處理30min，時(shí)間短，方法簡(jiǎn)單而選擇之。

3.2 蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)器對(duì)無(wú)紫外吸收或紫外未端吸收物質(zhì)具有較高的檢測(cè)靈敏度，且穩(wěn)定性和重現(xiàn)性較好，解決了紫外檢測(cè)器對(duì)于黃芪甲苷末端吸收靈敏度低，其他雜質(zhì)干攏大的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)器的儀器參數(shù)條件要求和通過(guò)多次實(shí)驗(yàn)條件數(shù)據(jù)的選擇，采用蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)器漂移管溫度在70℃，霧化管溫度在40℃能得到較好的色譜圖形并且基線平穩(wěn)；精密度和重復(fù)性較好。可用于玉屏風(fēng)膠囊產(chǎn)品質(zhì)量的控制。

[1] 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(新藥轉(zhuǎn)正中藥標(biāo)準(zhǔn))第43冊(cè)[S].2010年版.北京:國(guó)家藥典委員會(huì),2010:75.

[2] 董紅紅,張麗增,郭小青,等.HPLC-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中國(guó)藥房,2008,19(6):444-446.

[3] 楊曉騰,李井濤,郭美玲.HPLC-ELSD法測(cè)定止痛化癥膠囊中黃芪甲苷含量[J].中國(guó)藥事,2012,26(7):751-752.

[4] 池志珍,黃巧文,鄭芳,等.HPLC-ELSD法測(cè)定芪仁通絡(luò)膠囊中黃芪甲苷含量[J].海峽藥學(xué),2010,22(9):41-42.

[5] 朱克旭,李永宏,劉冰冰.HPLC-ELSD法測(cè)定芪心合劑中黃芪甲苷含量[J].安微醫(yī)藥,2011,15(11):1364-1365.

Determination of Astragloside the Content in Jade Screen Capsules by HPLC ELSD

CHEN Xi-kun
(Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530001, China)

Objective To establish high performance liquid - evaporative light-scattering method (HPCL-ELSD) astragalus armour glycosides content in the jade screen capsule。Methods Chromatographic column for phenomenex Genini (5μm, 4.6×250mm, C18); mobile phase of acetonitrile-water(75∶25); flow velocity is 1.0mL/min; column temperature is 30℃. Evaporative light scattering detection (ELSD) conditions: drift tube temperature is 70℃, spray tube temperature of 40℃. Result Astragalus armour glycosides in the 0.3038 g to 0.3038 g scope had good linear relationship r=0.9997, average sample recovery rate was 98.36%, RSD was 0.58%(n=6). Conclusion This law is simple and quick, with good precision and stability, and the determination results and reliable, and can be used for quality control of this product.

Jade screen capsule; High performance liquid-evaporative light-scattering method (HPCL-ELSD); Astragaloside; Assaying

R282.710.3

B

1671-8194（2013）23-0008-02