黃芪注射液對(duì)H22荷瘤小鼠抑瘤作用的細(xì)胞免疫機(jī)制

范雙莉王志舉* 任亞麗

（1 鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450001；2 濟(jì)源職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 濟(jì)源 459000）

黃芪注射液對(duì)H22荷瘤小鼠抑瘤作用的細(xì)胞免疫機(jī)制

范雙莉1,2王志舉1* 任亞麗2

（1 鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450001；2 濟(jì)源職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 濟(jì)源 459000）

目的探討黃芪注射液體內(nèi)抑瘤作用的細(xì)胞免疫機(jī)制。方法將昆明小鼠移植H22肝癌細(xì)胞后，分為五組：模型組，5-氟尿嘧啶組，黃芪注射液低、中、高劑量組。分別測(cè)定各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制率（IR）和腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)；采用MTT法測(cè)定各組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)。結(jié)果5-氟尿嘧啶組和高、中劑量黃芪注射液實(shí)驗(yàn)組小鼠H22實(shí)體瘤IR分別為59.45%、50.62%和40.47%，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）；黃芪注射液實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)和脾臟淋巴細(xì)胞增值指數(shù)都明顯高于模型組小鼠（P＜0.05）。結(jié)論黃芪注射液在荷瘤小鼠體內(nèi)具有一定的抑瘤作用，其機(jī)制可能與其提高荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫功能有關(guān)。

黃芪；H22荷瘤小鼠；細(xì)胞免疫；抑瘤率

黃芪是豆科多年生草本植物，其味甘，性微溫，是重要的補(bǔ)益類中藥。據(jù)報(bào)道，黃芪中含有大量微量元素，如Fe2+、Mn2+、Zn2+、Se等。黃芪注射液是從黃芪中提取的有效成分精制而成，含有五十多種皂甙和數(shù)種黃芪多糖，具有提高機(jī)體免疫能力的作用[1]。本研究通過(guò)觀察黃芪注射液對(duì)H22肝癌實(shí)體瘤的抑瘤效應(yīng)，探討黃芪注射液抗腫瘤作用的細(xì)胞免疫機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株

昆明種健康小鼠100只，體質(zhì)量18～22g，雌雄不拘（由本院動(dòng)物中心提供）；選用H22肝癌實(shí)體瘤為動(dòng)物模型，瘤株（由本學(xué)院藥理學(xué)教研室提供）。

1.2 藥品、試劑及儀器

黃芪注射液，每5mL含生藥10g；5-氟尿嘧啶（5-FU），25mg/支；噻唑藍(lán)（MTT）；刀豆蛋白（ConA）；DJ5031酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

1.3 方法

1.3.1 模型制備與動(dòng)物分組

每一只小鼠左腋皮下注射0.2mL的瘤懸液，形成實(shí)體瘤，移植后將動(dòng)物隨機(jī)分為模型組，5-氟尿嘧啶組，黃芪注射液低、中、高劑量組，每組10 只小鼠。24h后開(kāi)始給藥。低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組小鼠分別腹腔注射黃芪注射液0.1、0.2、0.4mL/d，劑量分別為2g、4g、8g/kg，1次/d；5-氟尿嘧啶組小鼠腹腔給予5-氟尿嘧啶30mg/kg，1次/d；模型組小鼠腹腔給予氯化鈉注射液0.2mL，1次/d。連續(xù)給藥7d為1個(gè)療程。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)方法

①抑瘤率的測(cè)定：給藥7d后頸椎脫臼處死小鼠，剝瘤稱量，計(jì)算各組腫瘤生長(zhǎng)抑制率（抑瘤率，IR）。IR =（模型組平均瘤重量-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重量）/模型組平均瘤重量×100%。②腹腔巨噬細(xì)胞功能的測(cè)定：給藥7 d后，測(cè)定各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)[2]。③脾臟淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)：給藥7d后頸椎脫臼處死小鼠，摘取脾臟，MTT法測(cè)定各組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化指數(shù)[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ—±s）表示，兩組間比較采用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 黃芪對(duì)各組小鼠瘤重的影響

療程結(jié)束后取出腫瘤，比較各組瘤重，結(jié)果顯示5-FU組和黃芪注射液高、中劑量組小鼠H22肝癌實(shí)體瘤瘤重與模型組比較明顯減輕，差異有顯著性（P＜0.05），抑瘤率分別為59.45%、50.62%和40.47%；但黃芪注射液低劑量組與模型組比較，瘤重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 H22荷瘤小鼠各組瘤重的比較（n=10，χ—±s）

表2 各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)及脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)（n=10，χ—±s）

2.2 黃芪對(duì)各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)及脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)的影響高、中劑量實(shí)驗(yàn)組和5-FU組荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率、吞噬指數(shù)及脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)均顯著高于模型組小鼠（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪有提高和調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能的作用，其活性成分為皂苷和多糖。多糖作為生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑可影響網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、外周血T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，并影響補(bǔ)體的形成以及細(xì)胞因子的分泌。單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)廣泛參與免疫應(yīng)答、免疫效應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)，在機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面起到了關(guān)鍵性的作用。巨噬細(xì)胞的吞噬功能是機(jī)體細(xì)胞免疫清除突變細(xì)胞、抑瘤抗瘤的重要因素，是衡量機(jī)體細(xì)胞免疫水平的一個(gè)重要標(biāo)志。T淋巴細(xì)胞在免疫應(yīng)答全過(guò)程中起著重要調(diào)節(jié)的作用，是介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫的免疫活性細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞要轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞后才能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（增殖指數(shù)）的高低直接反映機(jī)體細(xì)胞免疫的水平[4]。

小鼠H22肝癌實(shí)體瘤是抗腫瘤藥物研究中常用的動(dòng)物移植性腫瘤模型。本實(shí)驗(yàn)利用此模型觀察了黃芪注射液的體內(nèi)抑瘤作用，結(jié)果表明黃芪注射液對(duì)小鼠H22肝癌實(shí)體瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，抑瘤率達(dá)50.62%。同時(shí)黃芪各治療組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能、脾淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)均顯著高于模型組小鼠，說(shuō)明黃芪可能通過(guò)提高細(xì)胞免疫功能，達(dá)到治療小鼠腫瘤的作用。

[1] 張慧,韓志紅.黃芪注射液對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2002,13(3)∶132-133.

[2] 昊雄文,梁智輝.實(shí)用免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].武漢∶湖北科技出版社,2002∶29-35.

[3] 巴德年.當(dāng)代免疫學(xué)技術(shù)與應(yīng)用[M].北京∶北京醫(yī)科大學(xué)/中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1989∶303-135.

[4] 梅龍,董曉慧,段剛,等.參芪注射液對(duì)H22荷瘤小鼠抑瘤作用的細(xì)胞免疫機(jī)制[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2007,28(3)∶279-282.

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1671-8194（2013）13-0076-02

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