硒對酒精所致小鼠睪丸組織酶損傷影響的實驗研究

陳 鵬 許秀舉*

（包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，包頭醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)教研室，內(nèi)蒙古 包頭 014060）

硒對酒精所致小鼠睪丸組織酶損傷影響的實驗研究

陳 鵬 許秀舉*

（包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，包頭醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)教研室，內(nèi)蒙古 包頭 014060）

目的 通過實驗，研究硒對酒精性睪丸損傷小鼠的保護作用。方法 采用分光光度法對小鼠睪丸組織琥珀酸脫氫酶和丙二醛進行檢測。結(jié)果 硒中劑量組和硒高劑量組琥珀酸脫氫酶含量高于空白對照組和白酒對照組；空白對照組、硒低劑量組、硒中劑量組和硒高劑量組丙二醛含量低于白酒對照組。并且高劑量的硒對琥珀酸脫氫酶作用更明顯，中劑量的硒對丙二醛的作用更明顯。結(jié)論 硒有效地降低酒精對小鼠的睪丸組織酶的損傷。

硒；睪丸；酒精；丙二醛；琥珀酸脫氫酶

1957年Schware和Fortz發(fā)現(xiàn)硒能使免于膳食性肝壞死，并提出硒是機體不能缺少的、必需的微量元素，硒對動物的有益作用才開始為人們所認(rèn)識[1]。1913年Rorruck發(fā)現(xiàn)硒是谷胱甘肽過氧化物酶的成分，揭開了硒具有抗氧化功能之謎[2]。硒在免疫細(xì)胞功能、甲狀腺激素功能，精子的形成和游動及前列腺素的功能等方面，都起一定作用。本研究主要探討硒對酒精所致小鼠睪丸組織酶的損傷有無保護作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

昆明種小鼠，均為雄性，體質(zhì)量18～24g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心提供，為清潔級動物。

1.2 儀器及試劑

721分光光度計，TG328A電光分析天平，TGL-16B高速臺式離心機，富硒膠囊（天津生物工程有限公司），丙二醛檢測試劑盒、琥珀酸脫氫酶檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 研究方法

本研究采用動物實驗方法進行，試劑采用南京建成研究所提供試劑盒的方法測定丙二醛和琥珀酸脫氫酶，統(tǒng)計采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件分析。

1.3.1 動物分組及處理

將50只健康昆明種雄性小鼠隨機分為5組，每組10只，分別為空白對照組，白酒對照組，硒低、中、高三個劑量組，含硒劑量分別為4.17μg/kg、8.33mg/kg、16.67mg/kg。其中空白對照組和白酒對照組飲用自來水，其他各組分別飲用自由溶于水的富硒膠囊溶液。各組大鼠均采用自由飲用的方式，連續(xù)飲用30d。第30天時對小鼠進行空腹白酒灌胃實驗。實驗時采用一次大劑量白酒灌胃的方法，按12mL/（kg·bw）劑量灌胃各組小鼠，16h后處死小鼠，取小鼠睪丸組織測定各項指標(biāo)。

1.3.2 睪丸組織勻漿的制備

處死小鼠后立即打開腹腔取出睪丸組織，在冰盤上用冷生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙拭干，放在小燒杯中用移液器加入冷生理鹽水，然后用小剪刀盡快剪碎組織，放入玻璃勻漿管，補足冷生理鹽水制成組織勻漿。組織勻漿用低溫離心機2500rpm離心10min，取適量上清液進行琥珀酸脫氫酶、丙二醛的測定。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠睪丸組織琥珀酸脫氫酶檢測情況

硒中劑量組、硒高劑量組與白酒對照組比較，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；硒高劑量組與空白對照組比較，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。提示補充硒元素對酒精損傷睪丸的琥珀酸脫氫酶的升高有一定的作用，并且高劑量的硒作用更加明顯。結(jié)果見表1。

表1 硒對小鼠睪丸組織琥珀酸脫氫酶檢測結(jié)果

2.2 小鼠睪丸組織丙二醛檢測情況

空白對照組、硒低劑量組、硒中劑量組和硒高劑量組與白酒對照組比較，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；白酒對照組與空白劑量組比較，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。提示補充硒元素對酒精損傷睪丸的丙二醛的降低有一定的作用，并且中劑量的硒作用更加明顯。結(jié)果見表2。

表2 硒對小鼠睪丸組織丙二醛檢測結(jié)果

3 討 論

目前關(guān)于男性生殖方面的研究已受到廣泛關(guān)注，有學(xué)者對重金屬、細(xì)胞毒藥物及免疫抑制劑、生殖激素等對精子發(fā)生的影響做了深入的研究[3]，大量臨床觀察和流行病學(xué)調(diào)查證實男性酗酒可影響身體健康并引起后代發(fā)育異常[4]，男性酗酒可使性功能減退并引起后代發(fā)育和行為異常[5]。

琥珀酸脫氫酶（SDH），是線粒體內(nèi)膜的結(jié)合酶，為線粒體的一種標(biāo)志酶。作為參與三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵酶，琥珀酸脫氫酶是反映線粒體功能的標(biāo)志酶之一，其活性一般可作為評價三羧酸循環(huán)運行程度的指標(biāo)，對于評價精子線粒體功能等具有重要意義[6]。丙二醛（MDA）是氧自由基與生物膜多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，與氧自由基的量一致，由乙醛和甲酸乙酯在堿作用下縮合而得，可在高真空下升華精制，與蛋白質(zhì)不相容，有潛在的致癌性。脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物丙二醛在體外影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及線粒體內(nèi)關(guān)鍵酶活性。

酒精及其代謝物乙醛可以在體內(nèi)產(chǎn)生攻擊膜上的不飽和脂肪酸即可誘發(fā)脂質(zhì)過氧化的自由基，而易受過氧化攻擊進而影響精子功能的不飽和脂肪酸富含在睪丸線粒體膜、精子之中。生物組織中不飽和脂肪酸過氧化分解形成丙二醛，通過測定丙二醛能有效判斷脂質(zhì)過氧化程度。研究表明[5]，長期攝入乙醇可引起睪丸丙二醛增多、還原型谷胱甘肽降低。酒精中毒者有不同程度的睪丸萎縮。有報道酒精對18歲以前男性生殖系統(tǒng)的危害比成人更嚴(yán)重。

本研究顯示，在小鼠進行補硒后，可提高琥珀酸脫氫酶的濃度，并降低丙二醛的濃度，使得酒精對小鼠睪丸的損傷降低，起到一定的保護作用；根據(jù)對小鼠補硒的不同劑量，可以從研究中得出高劑量的硒對琥珀酸脫氫酶的提高作用更明顯，中劑量的硒對丙二醛的降低作用更明顯。

[1]曹純章,卜麗莎,高申,等.硒對培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞抗氧化損傷作用的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報,2000,22(4):298-302.

[2]袁建敏,咼于明.硒的生物學(xué)功能及其在蛋雞生產(chǎn)中的作用[J].中國飼料,1998(1):59-61.

[3]廖曉崗,李維信.鎘對大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞損傷及鋅對其保護的形態(tài)學(xué)研究[J].生殖與避孕,1999,19(5):290.

[4]Ledig M,Misslin R,Vogel E,et al.Paternal alcohol exposure: developmental and behavioral effects on the offspring of rats[J].Neurop harmacology,1998,37(1):57.

[5]Emanuele MA,Emanuele N.Alcohol and the male reproductive system[J].J Alcohol Res Health,2001,25(4):282-287.

[6]Grattagliano I,Vendemiale G,Errico F,et al.Chronic ethanol intake induces oxidative alterations in rat testis[J].J ApplToxicol,1997, 17(5):307-311.

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：1671-8194（2013）07-0092-02

*通訊作者Email：xuxiuju8629@163.com