高效液相色譜法測(cè)定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量

單婷婷 陳玉敏 水彩紅 胡 丹

（總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 100071）

高效液相色譜法測(cè)定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量

單婷婷 陳玉敏 水彩紅 胡 丹

（總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 100071）

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿、麻黃堿的含量。方法 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS C18柱 (150mm× 4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈 -0.01mol/L 庚烷磺酸鈉與 0.02mol/L 磷酸二氫鉀等量混合溶液（用 10% 磷酸調(diào)節(jié) pH 值 2.8）（19 ∶ 81）；檢測(cè)波長(zhǎng)：206nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃。結(jié)果 鹽酸偽麻黃堿在 1.51 ～ 48.4ng、鹽酸麻黃堿在 16.09 ～ 515ng 線性范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。平均回收率分別為偽麻黃堿 90.98%（RSD=2.22%）、麻黃堿 95.91%（RSD=2.68%）。結(jié)論 此方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，靈敏，可用于麝香接骨膠囊中麻黃的質(zhì)量控制。

麝香接骨膠囊；偽麻黃堿；麻黃堿；高效液相色譜法

麝香接骨膠囊是由赤芍、麻黃、牛膝、當(dāng)歸、沒(méi)藥、黃瓜子、血竭、朱砂、土鱉蟲(chóng)、續(xù)斷、紅花、川芎、兒茶、硼砂 、馬錢(qián)子、三七、骨碎補(bǔ)、桂枝、蘇木、乳香、自然銅、人工麝香等22味藥組成得中藥復(fù)方制劑，收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊(cè)。具有散瘀止痛，續(xù)筋接骨的功效，主要用于跌打損傷，筋傷骨折，瘀血凝結(jié)，閃腰岔氣[1]。本品中所含的麻黃具有顯著的中樞興奮作用，為易制毒品，標(biāo)準(zhǔn)中均沒(méi)有相應(yīng)含量控制項(xiàng)目。本研究采用高效液相色譜法，成功建立了同時(shí)測(cè)定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量測(cè)定方法[2-4]，從而為麝香接骨膠囊中麻黃的控制提供了可靠的方法和依據(jù)。

1 儀器與試藥

SHIMADZU LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司），Mettler XS205-DU 電子天平（瑞士 Mettler公司）；乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；對(duì)照品：鹽酸偽麻黃堿（171237-201208）、鹽酸麻黃堿（171241-201007）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；麝香接骨膠囊（批號(hào)：20120401、20100301、20110801）由山西黃河中藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（5μm，150×4.6mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8）（19∶81）；檢測(cè)波長(zhǎng)：206nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5μL。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液6mL，充分振搖濕潤(rùn)，放置30min，加入三氯甲烷約60mL，密塞，70℃水浴回流2h，用鋪有少量無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，再加入少量三氯甲烷蕩洗容器后過(guò)濾，合并濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?甲醇（3∶7）混合液使溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加混合液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

取鹽酸偽麻黃堿和鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1mL各含5μg和50μg的混合溶液，即得。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 專屬性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各5μL，進(jìn)樣比較上述3種溶液的HPLC圖，結(jié)果表明樣品中偽麻黃堿、麻黃堿與其他組分色譜峰能達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照品中色譜峰對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 專屬性實(shí)驗(yàn)高效液相色譜圖A.對(duì)照品溶液（1.偽麻黃堿2.麻黃堿）；B.供試品溶液；C.陰性對(duì)照品溶液

2.4.2 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取不同濃度鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿的混合對(duì)照溶液5mL，依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為見(jiàn)表1。結(jié)果表明，鹽酸偽麻黃堿在1.51～48.4ng、鹽酸麻黃堿在16.09～515ng范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察表

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)的麝香接骨膠囊（批號(hào)20120401）6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，測(cè)定其含量，結(jié)果兩種成分峰面積值得RSD（n=6）分別為2.58%（偽麻黃堿）、2.56%、（麻黃堿）表明本方法有較好的重復(fù)性。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品（批號(hào)20120401）3g，按供試品制備方法制備同一份供試品溶液，在相同條件下分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果峰面積值得RSD（n=6）分別為2.53%（偽麻黃堿）、2.71%（麻黃堿）表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批次麝香接骨膠囊（批號(hào)20120401）樣品1.5g，精密稱定，精密加入兩種對(duì)照品混合溶液適量，按供試品溶液的制備方法操作，測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率（n=6）分別偽麻黃堿90.98%（RSD=2.22%）、麻黃堿95.91%（RSD=2.68%）。

2.5 含量測(cè)定

取樣品分別按供試品制備方法制備供試品溶液，測(cè)定兩種成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 通過(guò)實(shí)驗(yàn)，偽麻黃堿和麻黃堿在206nm吸收都較強(qiáng)，故選擇吸收波長(zhǎng)為206nm。

3.2 提取溶劑的選擇：試驗(yàn)選用甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷作為提取溶劑進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，三氯甲烷提取率最高。故選擇三氯甲烷作為提取溶劑。

3.3 提取方法的選擇：以三氯甲烷為溶劑，提取方法分別采用超聲提取30min、加熱回流提取30分鐘、1h、2h、3h。結(jié)果顯示回流提取率較高，最終選取加熱回流2h。

3.4 采用氫氧化鈉堿化，有利于生物堿從水溶液中鹽析，易于被三氯甲烷萃取，但要嚴(yán)格控制氫氧化鈉的加入量，否則就成為液液分配萃取，導(dǎo)致所測(cè)成分不能被三氯甲烷完全萃取出來(lái)。

[1]國(guó) 家 藥 典 委 員 會(huì) .中 國(guó) 衛(wèi) 生 部 藥 品 標(biāo) 準(zhǔn) 中 藥 成 方 制 劑 (第 五冊(cè))[S].1999:209.

[2]國(guó)家 藥典 委員會(huì).中華人 民 共和國(guó) 藥典 (一 部 )[S].北 京:中國(guó)醫(yī) 藥科技出版社,2010:47-48.

[3]劉濤,王曉輝,趙云麗,等.離子對(duì)色譜法測(cè)定麻杏石甘湯中的麻黃堿和偽麻黃堿[J].色譜,2006,24(4):417.

[4]郭青,孫姍,呂霞,等.反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定疏風(fēng)活絡(luò)丸中4種生物堿的含量[J].藥物分析雜志,2009,29(1):6-9.

R282.710.3

：B

：1671-8194（2013）09-0094-02