芪參健骨顆粒中丹酚酸B的含量測定方法分析

鐘子健

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心中藥房，廣東 廣州 510180)

芪參健骨顆粒中丹酚酸B的含量測定方法分析

鐘子健

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心中藥房，廣東 廣州 510180)

目 的 構(gòu) 建 測 定 芪 參 健 骨 顆 粒 中 丹 酚 酸 B 含 量 的 方 法。 方 法 選 擇 HPLC 法， 色 譜 柱 為 5μm，4.5mm×150mm 的 SB-C18柱，1mol/L 的水∶甲酸∶乙腈∶甲醇的流動相，比例為 62 ∶ 2 ∶ 7 ∶ 26。0.9mL/min 的流速，243mm 的檢測波長，25℃的柱溫。結(jié)果 在0.1295 ～ 2.590μg/mL 的范圍內(nèi)，丹酚酸 B 含量的線性關(guān)系呈現(xiàn)良好，r=0.9996，回收率平均值為 99.5%，RSD=1.2%。結(jié)論 測定丹酚酸B含量，采用高效液相色譜法，較為簡單、快捷，測定結(jié)果可靠。

芪參健骨顆粒；丹酚酸 B 含量；RP-HPLC 方法；分析

芪參健骨顆粒是一種新型中藥，主要是適用于股骨頭壞死，組成成分為：延胡索、黃芪、菟絲子、丹參、當(dāng)歸、杜仲，丹參屬于中成藥，可養(yǎng)血止痛、活血通絡(luò)，具有抗菌消炎、降低血液黏度、改善微循環(huán)等作用，主要生理活動成分是丹酚酸B含量[1]。筆者通過HPLC法，測定芪參健骨顆粒中丹酚酸B含量，取得了良好的檢測效果，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

測試系統(tǒng)：GC9790液相譜儀、紫外吸收檢測器（UVD）、N2010色譜工作；對照品丹酚酸由上海易利生物科技有限公司提供；色譜純度為99.96%，色譜純?yōu)橐译?；分析純?yōu)榧姿?；重蒸水為水?/p>

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

選擇HPLC法，色譜柱為5μm，4.5mm×150mm的SB-C18柱，1mol/L的水∶甲酸∶乙腈∶甲醇的流動相，比例為62∶2∶7∶26。0.9mL/min-1的流速，243mm的檢測波長，25℃的柱溫，10μL的進樣量；樣品溶液與對照品溶液的主峰相同的主峰保留時間，丹酚酸B的理論板數(shù)根據(jù)爾峰計算＞4000；丹酚酸計算出的爾峰同周圍雜質(zhì)峰按照標(biāo)準(zhǔn)進行分離。

1.2.2 試驗線性

對照品丹酚酸進行適量的精密稱取，加甲醇進行溶解且稀釋、搖勻至刻度，每1mL的溶液含量分別為12.91μg，25.90μg，51.74μg，103.5μg，155.4μg，206.2μg，259μg，并分別進行丹酚酸B的理論板數(shù)根據(jù)爾峰計算＞4000；丹酚酸B計算出的爾峰同周圍雜質(zhì)峰按照標(biāo)準(zhǔn)進行分離。

1.2.3 試驗空白干擾試驗

對已知含量進行的空白輔料精密稱取，細(xì)分含量相當(dāng)于100μg的丹酚酸B，并按照上述方法進行操作。結(jié)果表明，丹酚酸B含量不受空白輔料的干擾。

1.2.4 試驗進樣精密度

加入適量的對照品丹酚酸，含量為51.81μg/mL，加甲醇進行溶解且稀釋、搖勻至刻度。按照上述方法進行連續(xù)5次的進樣，記錄丹酚酸B的峰面積。選取155.4μg/mL對照液，在1、2、3d內(nèi)分別進行進樣，5針的平行進樣，RSD計算值分別0.20%，本法測量的精密度良好[2]。

1.2.5 試驗穩(wěn)定性

選取測定含量下的同一份溶液，在0h，2h，4h，8h，24h，48h的時間點分別進行測定，并記錄好峰面積，平均峰面積為2449879，RSD值為0.38%，丹酚酸B含量在48h內(nèi)的流動相溶液較為穩(wěn)定。

1.2.5 試驗加樣回收率

對已知含量進行對照品丹酚酸B的精密稱取，稱取六份，容量為0.25g，并以輔料混勻，每份加入2590mg/mL的對照品溶液，并置入100mL的量瓶中，加水進行溶解且稀釋、搖勻至刻度，用濾膜（0.46μm）濾過，取續(xù)5mL濾液，置入50mL的量瓶中，加水進行溶解且稀釋、搖勻至刻度；另外，取適量對照品丹酚酸B，通過流動相進行溶解，稀釋至100μg/mL對照品溶液，根據(jù)上述同樣方法進行操作，進行回收率的計算。經(jīng)過計算得知，回收率平均值為99.5%，RSD=1.2%。

1.2.6 測定含量

選取3批本品，精密稱取，每批兩份，一份0.5g，并置入100mL的量瓶中，加入適量的對照品，加水進行溶解且稀釋、搖勻至刻度，用濾膜（0.46μm）濾過；另外，加入155.45mg、25.90mg的對照品丹酚酸B，加水進行溶解且稀釋至110mL，搖勻至刻度，用濾膜（0.46μm）濾過進樣，根據(jù)外標(biāo)法進行計算平均含量和RSD值[3]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

本次研究的所有患者的資料以及所得數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理分析，計量資料采用t檢驗，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

0.1295 ～2.590μg/mL的范圍內(nèi)，丹酚酸B含量的線性關(guān)系呈現(xiàn)良好，r=0.9996，回收率平均值為99.5%，RSD=1.2%。具體如表1與表2所示。

表1 丹酚酸B加樣試驗回收率結(jié)果（n=6）

表2 樣品丹酚酸B含量的測定結(jié)果（n=2）

3 討 論

本組實驗中，色譜柱為5μm，4.5mm×150mm的SB-C18柱，1mol/L的水∶甲酸∶乙腈∶甲醇的流動相，比例為62∶2∶7∶26。0.9mL/min的流速，243mm的檢測波長，25℃的柱溫。在0.1295～2.590μg/mL的范圍內(nèi)，丹酚酸B含量的線性關(guān)系呈現(xiàn)良好，r=0.9996，回收率平均值為99.5%，RSD=1.2%。測定丹酚酸B含量，采用高效液相色譜法，較為簡單、快捷，測定結(jié)果可靠。

[1]尹華,章建華,張春霞,等.芪參健骨顆粒的薄層鑒別研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,35(1):79-81.

[2]林婷,李昌煜,章建華,等.芪參健骨顆?？寡祖?zhèn)痛作用的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(4):151-153.

[3]劉文靜,闞士東,陳代杰,等.不同提取條件對丹酚酸B和E相對含量的影響[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2011,42(7):508-511.

R282.71.03

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：1671-8194（2013）03-0054-02