CD14基因多態(tài)性與維吾爾族人群支氣管哮喘的相關(guān)性研究

夏 宇 閆 芳 齊曼古力?吾守爾 何元兵 米合熱古力?司馬義 楊增榮 王 晶 文 進(jìn)

CD14基因多態(tài)性與維吾爾族人群支氣管哮喘的相關(guān)性研究

夏 宇1閆 芳1齊曼古力?吾守爾1何元兵1米合熱古力?司馬義1楊增榮1王 晶1文 進(jìn)2

目的探討CD14基因啟動(dòng)子區(qū)-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個(gè)SNP位點(diǎn)的多態(tài)性和新疆維吾爾族人群支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱哮喘）的關(guān)系。方法126例明確診斷的哮喘患者為哮喘組，按1：1配對(duì)法收集同性別、族別、居住地、年齡（相差5歲以內(nèi)）的健康體檢者為對(duì)照組。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)各組-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點(diǎn)的多態(tài)性。結(jié)果CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個(gè)SNP位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率在哮喘組和對(duì)照組的分布差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。-159T/C和-1145G/A位點(diǎn)等位基因頻率在維吾爾族、漢族和高加索人群總體分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.295，P=0.004和χ2=13.029，P=0.001）。結(jié)論CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個(gè)SNP位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率分布與維吾爾族人群哮喘無(wú)直接關(guān)聯(lián)。

支氣管哮喘；白細(xì)胞分化抗原14基因；維吾爾族；基因多態(tài)性

白細(xì)胞分化抗原14（Cluster of Dieffrentiation Antigen,CD14）屬于細(xì)胞表面糖蛋白的家族成員之一，既是單核細(xì)胞分化的一種標(biāo)記，也是針對(duì)微生物以及其它內(nèi)、外源性應(yīng)激因子的先天性免疫應(yīng)答過(guò)程中的一種重要的模式識(shí)別分子，能與革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素脂多糖（LPS）或脂多糖-脂多糖結(jié)合蛋白（LBP-LPS）復(fù)合物相結(jié)合，介導(dǎo)LPS激活靶細(xì)胞，并釋放多種炎性細(xì)胞因子，從而在炎癥和感染性疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程和調(diào)控中發(fā)揮重要作用[1]。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法，擬探討CD14基因多態(tài)性與維吾爾族哮喘患者發(fā)病間的關(guān)系，在不同民族、人群中闡明基因型與哮喘的聯(lián)系，為揭示哮喘的發(fā)病機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診并明確診斷的126例維吾爾族哮喘患者，其中男66例，女60例；年齡16～79歲，平均年齡（41.06±9.75）歲。按1：1配對(duì)原則，選擇同性別搭配、同族別、年齡（相差在5歲以內(nèi)），與患者無(wú)血緣關(guān)系，無(wú)特應(yīng)疾病史及慢性呼吸系統(tǒng)病史的健康體檢者。研究對(duì)象均為長(zhǎng)期居住在新疆地區(qū)，三代或三代以上未與其他民族通婚的維吾爾族人。所有研究對(duì)象受檢個(gè)體均簽署知情同意書(shū)。采集研究對(duì)象外周靜脈血5ml，用枸櫞酸鈉抗凝，迅速（2h內(nèi)）放入-70℃凍儲(chǔ)，用于提取白細(xì)胞DNA。肺功能測(cè)定嚴(yán)格按照操作常規(guī)及程序進(jìn)行。哮喘組依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸學(xué)會(huì)2008年制定的支氣管哮喘防治指南[2]診斷標(biāo)準(zhǔn)中的定義、診斷、嚴(yán)重程度分級(jí)進(jìn)行分類。

1.2 方法CD14基因分型：按常規(guī)酚/氯仿抽提核酸法提取DNA。序列數(shù)據(jù)來(lái)源NCBI的可用數(shù)據(jù)庫(kù)http：//www.ncbi.nlm.nih.gov。引物由上海生工生物有限公司合成。CD14基因3個(gè)SNP位點(diǎn)引物序列、PCR擴(kuò)增、各個(gè)片段對(duì)應(yīng)的限制性內(nèi)切酶及擴(kuò)增產(chǎn)物大小，見(jiàn)表1。

表1 CD14基因SNP位點(diǎn)PCR引物序列、擴(kuò)增產(chǎn)物、限制性內(nèi)切酶及酶切產(chǎn)物

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。兩組基因頻率使用χ2檢驗(yàn)以確認(rèn)是否符合Hardy-Weinberg平衡；組間比較采用χ2檢驗(yàn)；關(guān)聯(lián)程度用OR及95% CI表示。檢驗(yàn)水準(zhǔn)ɑ=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CD14基因Hardy-Weinberg平衡定律的檢驗(yàn)維吾爾族人群哮喘組和對(duì)照組3個(gè)研究位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），具有群體代表性。

2.2 CD14基因基因型分布及等位基因分布頻率比較兩組CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點(diǎn)三種基因型分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.104，P=0.949；χ2=0.444，P=0.801和χ2=0.182，P=0.913）。兩組三位點(diǎn)等位基因頻率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.073，P=0.787；χ2=0.410，P=0.522和χ2=0.171，P=0.679），見(jiàn)表2。

表2 CD14基因三位點(diǎn)基因型分布頻率及等位基因頻率比較(n,%)

2.3 CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點(diǎn)等位基因頻率與不同人群、種族的比較分析將研究的新疆維吾爾族人群在CD14基因啟動(dòng)子區(qū)-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點(diǎn)等位基因頻率與中國(guó)漢族人群、白種人群比較后發(fā)現(xiàn)，-159T/C位點(diǎn)等位基因頻率在上述三組人群總體分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.295，P=0.004），進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，維吾爾族人群-159T/C位點(diǎn)C等位基因頻率（44.0%）和中國(guó)漢族人群（42.9%）低于白種人（54.0%），（χ2=6.766，P=0.009和χ2=8.113，P=0.004）；該位點(diǎn)等位基因頻率在維、漢兩民族之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。-1145G/A位點(diǎn)等位基因頻率分布在吾爾族人群、漢族人群和白種人中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.029，P=0.001），進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，維吾爾族人群-1145G/A位點(diǎn)A等位基因頻率（40.1%）與中國(guó)漢族人群（33.8%）或白種人（45.4%）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。-1359G/T位點(diǎn)等位基因頻率在上述三組人群總體分布上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

CD14基因位于第5號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)1帶-長(zhǎng)臂3區(qū)3帶，其中包含有許多與變應(yīng)性疾病、哮喘、氣道高反應(yīng)（BHR）相關(guān)的候選基因[3-4]。已有研究表明，在美國(guó)人群[5]、捷克人群[6]、拉丁美洲人群[7]、日本人群[8]和韓國(guó)人群[9-10]的研究中均發(fā)現(xiàn)CD14基因啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)性與哮喘及過(guò)敏性疾病相關(guān)聯(lián)。而在德國(guó)[11]、波蘭和高加索兒童[12-13]的研究中卻未得出相似結(jié)論。我國(guó)有研究顯示，CD14-159T/C多態(tài)性與中國(guó)部分地區(qū)兒童先天性過(guò)敏患者T-IgE水平互相關(guān)聯(lián)，提示其是中國(guó)人群過(guò)敏性疾病的遺傳易感因素[14]。但最近一項(xiàng)針對(duì)溫州兒童CD14基因啟動(dòng)子區(qū)的研究并未顯示出-159T/C位點(diǎn)多態(tài)性與哮喘或T-IgE相關(guān)[15]。

表3 三位點(diǎn)等位基因頻率在中國(guó)維吾爾族、漢族和白種人的比較[n(%)]

我國(guó)地域廣闊，少數(shù)民族數(shù)量較多，各地區(qū)居住環(huán)境及生活習(xí)慣差別較大，為進(jìn)一步探求該基因多態(tài)位點(diǎn)與哮喘的關(guān)系，選擇相對(duì)隔離的少數(shù)民族群體作為研究對(duì)象，其具有較為相似的遺傳背景和生活方式，從理論上降低了遺傳異質(zhì)性的影響。研究結(jié)果顯示，CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個(gè)SNP位點(diǎn)在哮喘組和對(duì)照組中的基因型分布經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，符合Hardy-weinberg定律，證實(shí)樣本的隨機(jī)性和遺傳背景的統(tǒng)一。新疆維吾爾族人群CD14基因多態(tài)性分布頻率與中國(guó)漢族人群、白種人群分布有所不同。維吾爾族人群-159T/C位點(diǎn)C等位基因頻率（44.0%）和中國(guó)漢族人群（42.9%）低于白種人（54.0%），但該位點(diǎn)等位基因頻率在維、漢兩民族之間比較無(wú)顯著性差異。推測(cè)不同群體的遺傳結(jié)構(gòu)有所不同，也可能與環(huán)境影響有關(guān)。當(dāng)然，還需進(jìn)一步在大規(guī)模的混合群體中證實(shí)這種差別是由民族差異還是由群體的結(jié)構(gòu)差異所造成。本研究中CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個(gè)SNP位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率分布在維吾爾族人群哮喘組與對(duì)照組中均未觀察到有差異。研究結(jié)果與對(duì)德國(guó)新生兒進(jìn)行10年隨訪觀察，對(duì)波蘭和高加索兒童的研究[11-13]所得結(jié)論相似。

在不同種族，不同國(guó)家，甚至同一國(guó)家的不同地區(qū)，CD14基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性的基因型分布與疾病的相關(guān)性存在較大差異。尋找不同種族在不同環(huán)境下CD14基因多態(tài)性與疾病的關(guān)系，將有助于深入闡明疾病的發(fā)展機(jī)制。在條件允許的情況下，筆者還計(jì)劃在今后的工作中，對(duì)新疆漢族哮喘人群以及其他民族進(jìn)行CD14基因多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)，有助于對(duì)上述基因與哮喘的關(guān)系進(jìn)行更深入的了解。

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R562.2+5

A

1673-5846(2013)06-0143-04

1新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸一科，新疆烏魯木齊 830054

2新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，新疆烏魯木齊 830028

王晶，副主任醫(yī)師，副教授。郵箱：zgjkyk2010@126.com。