RP－HPLC法測定愛維心口服液中田薊苷的含量

嚴(yán) 歡 賀金華 毛，康雨彤 戎曉娟 蔡曉翠

新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830004

RP－HPLC法測定愛維心口服液中田薊苷的含量

嚴(yán) 歡 賀金華 毛，康雨彤 戎曉娟 蔡曉翠

新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所，新疆 烏魯木齊 830004

目的：采用RP－HPLC法建立愛維心口服液中田薊苷的含量測定方法。方法：乙腈－0.5%甲酸（25：75）為流動相；Agilent TC－C18（4.6 mm×150 mm，5μm）色譜柱，檢測波長為324nm；柱溫為30℃，流速為1.0 mL／min。結(jié)果：田薊苷濃度在4.07～40.70μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝1（n＝6），平均回收率為100.32%，RSD為1.56%。結(jié)論：該方法簡便易行，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

愛維心口服液；田薊苷；RP－HPLC

愛維心口服液處方來源于 《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)—維吾爾藥分冊》，由香青蘭等15味藥材組成，具有通絡(luò)行血、強(qiáng)心醒腦、強(qiáng)健支配器官的作用。臨床用于心胸疼痛、心悸心慌、失眠健忘、神經(jīng)衰弱［1－2］。香青蘭為唇形科（Labiatae）植物香青蘭（Dracocephalum moldavuca L.）的干燥全草，維吾爾語名為Badranjibuyaqini，是維吾爾醫(yī)常用藥材，主產(chǎn)于新疆，目前在新疆各地有栽培。該藥材在維吾爾醫(yī)和民間用于治療冠心病及血液質(zhì)旺盛（高血壓）、心悸心痛、頭暈?zāi)X脹、反應(yīng)遲鈍、感覺低下、寒性神經(jīng)性頭疼、寒性感冒、氣管炎等疾病，有數(shù)百余年的用藥歷史。在 《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥材分冊》、《新疆維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《維吾爾藥志》、《中華本草》（維吾爾藥卷）［3－5］均有記載。田薊苷為香青蘭藥材中的主要有效成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。本研究采用反相高效液相色譜法研究了制劑里香青蘭中田薊苷的含量測定方法，為控制制劑質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)［6－7］。

圖1 田薊苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig1 Structure of Tilianin

1 儀器與材料

Shimadzu－LC2010C全自動液相色譜儀；Shimadzu CLASS－VPV6.14 SP4數(shù)據(jù)工作站；色譜柱：Agilent TCC18（4.6 mm×150 mm，5μm）；Satorius BP211電子天平（十萬分之一）。田薊苷對照品 （新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所自制，純度99.114%）。愛維心口服液由新疆新維制藥廠生產(chǎn)，批號：20090701、20090702、20090703、20090801、20091001、20100101、20100301、20100302、20100401、20100501。乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC－C18（4.6mm× 150mm，5μm）；流動相：乙腈－0.5%甲酸（25：75）；檢測波長：324nm；柱溫30℃；流速1.0ml／min。

2.2 溶液的制備 供試品溶液的制備：精密量取本品5mL，加甲醇定容至10mL量瓶中，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。對照品溶液的制備：精密稱取田薊苷對照品適量，置棕色量瓶中，用甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。陰性對照品溶液的制備：按照處方比例稱取缺香青蘭的其它幾味藥材，按制劑工藝制成陰性樣品，依供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取供試品溶液及對照品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果理論板數(shù)以田薊苷峰計(jì)為12721.86，分離度為2.0（＞1.5），拖尾因子為1.04，表明本條件下系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果符合要求。

2.4 專屬性考察 分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液與陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部，附錄ⅥD）測定。色譜圖見圖2。

2.5 線性考察 精密吸取對照品貯備液（40.70μg／mL），加甲醇分別制成含田薊苷為4.07、8.14、12.21、20.35、28.49、40.70μg／mL的對照品溶液，進(jìn)樣；以溶液濃度（μg／mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為：y＝31655x＋214.99，r＝1。表明田薊苷濃度在4.07～40.70μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 專屬性考察色譜圖.test sample；B.reference substance；C.negative referencegrams of specificity test

2.6 準(zhǔn)確度 釆用標(biāo)準(zhǔn)加入法測定回收率。精密量取供試品（批號：20100501）5mL，共6份，分別置10mL量瓶中。每組分別加入濃度為0.0176mg／mL的田薊苷對照品溶液5mL，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，在含量測定色譜條件下進(jìn)樣10μl，用外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率（%）為100.32，RSD（%）為1.56。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批制劑（批號：20100501），按供試品溶液制備方法制備6份溶液，在含量測定色譜條件下測定，結(jié)果RSD為1.05%。

2.8 日內(nèi)日間精密度 同一批樣品（批號：20100501）分別在同一天的不同時(shí)間 （每隔2小時(shí)）用含量測定方法重復(fù)測定，計(jì)算含量的RSD為0.68%；同一批樣品（批號：20100501）不同人分別在不同天（連續(xù)5天）用含量測定方法重復(fù)測定，計(jì)算含量RSD為1.15%。

表1 十批樣品測定結(jié)果（n＝3）Tab 1 The determination results of ten batches of samples（n＝3）

2.8 十批樣品測定 取十批樣品，依田薊苷含量測定條件測定，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 色譜條件及供試品處理方法選擇根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，田薊苷的測定方法有兩種。方法一［8］：色譜條件：Diamonsil C8色譜柱（200mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇－0.2%磷酸水溶液（48：52）；流速：1.0mL／min；柱溫：30℃；檢測波長：324nm。供試品溶液的制備方法：取本品100mL，加入已處理好的聚酰胺柱（80－120目，3 g，內(nèi)徑1.5 cm）上，用水500mL洗脫，棄去水液，再經(jīng)甲醇500 m L洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，殘?jiān)蒙V甲醇溶解并定容10mL，搖勻；用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。方法二［9－10］：色譜條件：Agilent TC－C18色譜柱（4.6mm ×150mm，5μm）；乙腈－0.5%甲酸（25：75）為流動相；檢測波長：324nm；柱溫30℃；流速1.0mL／min。供試品溶液的制備：精密量取本品5mL，加甲醇定容至10mL量瓶中，搖勻，用微孔濾膜（0.4μm）濾過，即得。

通過兩種方法的比較，方法一色譜條件下田薊苷可以得到很好的分離，因供試品處理方法較為繁瑣，制劑處方中其含量不高，故不適合復(fù)方制劑中田薊苷含量測定；方法二色譜條件下供試品雖雜質(zhì)含量較高，但田薊苷可以得到很好的分離，且處理方法簡便易行，故選擇方法二的供試品處理方法及色譜條件進(jìn)行。

3.2 檢測波長的選擇 取同一供試品溶液，依方法二的液相色譜條件下分別于波長為320nm、324nm、328nm波長處測定，結(jié)果田薊苷含量分別為：17.1313、17.7920、17.7688μg／mL，故最終選擇324nm作為檢測波長。

3.3 討論 標(biāo)準(zhǔn)中沒有設(shè)定含量測定項(xiàng)，這與當(dāng)前于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定存在一定的差距。為控制其內(nèi)在質(zhì)量，將以高效液相色譜法測定田薊苷的含量，增加該制劑的含量測定項(xiàng)。本方法專屬性強(qiáng)、操作簡單、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于制劑的質(zhì)量控制，同時(shí)完善并提高了原有的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］中國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn) （維吾爾藥分冊）［M］.烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：72..

［3］新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生廳.維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn) ［M］.烏魯木齊：新疆科技出版社，1999：245－249.

［4］劉勇民.維吾爾藥志 （上冊）［M］.烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：405－407.

［5］中華本草編委會.中華本草 （維吾爾藥）［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2005：235.

［6］苗明山，李振國.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù) ［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

［7］劉金暉，嚴(yán)歡，鐘麗，等.HPLC法測定益心巴迪然吉布亞顆粒中咖啡酸的含量［J］.新疆中醫(yī)藥，2010，28（2）：49－50.

［8］買買提·努爾艾合提，吐爾洪·艾買爾，羅光明.高效液相色譜法測定維吾爾藥材香青蘭中田薊苷和洋芹素的含量 ［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2009，11（11）：61－62.

［9］嚴(yán)歡，仲婕，閆明，等.RP－HPLC法測定溫腎蘇拉甫片中嗎啡的含量［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，32（3）：262－264.

［10］仲婕，徐芳，閆明，等.RP－HPLC法測定維藥通滯蘇潤江膠囊中秋水仙堿的含量［J］.中國藥房，2009，20（3）：200－201.

Determ ination of tilianin content in Aiweixin oral liquid by RP－HPLC

YAN Huan，HE Jinhua，MAO Yan，RONG Xiaojuan，KANG Yutong，CAIXiaocui
（Xinjiang Institute of Materia Medica，Urumqi830004，China）

ObjectiveTo establish an RP－HPLCmethod to determine the contentof tilianin in oral liquid.Mothods：By RPHPLC.Themobile phase was acetonitrile－0.5%methane acid（25：75）；the liquid chromatography was carried out using a Agilent TC－C18（4.6 mm×150 mm，5μm）.Detection wavelength was at324 nm，column temperature was at 30℃，The flow rate was 1.0 mL／min.Results：The linear responserange of tilianin was 4.07～40.70μg／mL（r＝1，n＝6）.The average recovery was 100.32%，RSD（%）was1.56（n＝6）.Conclusion：Themethod is simple，sensitive，accurate and reproducible.It can be used in quality control of Aiweixin oral liquid.

Aiweixin oral liquid；tilianin；RP－HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）17－0023－02

2013.07.14）