HPLC法測定五爪風(fēng)中補(bǔ)骨脂素的含量

劉 元宋志釗

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

HPLC法測定五爪風(fēng)中補(bǔ)骨脂素的含量

劉 元1，2宋志釗1，2

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

目的：建立五爪風(fēng)中補(bǔ)骨脂素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以Appollo－C18色譜柱為分離柱，以乙腈－水（33：67）為流動(dòng)相，246nm為檢測波長，柱溫為室溫。結(jié)果：補(bǔ)骨脂素在4.5～72.0μg／mL范圍內(nèi)，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系（r＝0.9997），平均回收率為100.3%，RSD為1.50%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為該藥材含量測定方法。

五爪風(fēng)；補(bǔ)骨脂素；HPLC

瑤藥五爪風(fēng)系?？崎艑僦参镎迫~榕［Ficus simplicissima Lour.var.hirta（Vahl）Migo］的根，別名五指毛桃、五指牛奶、五爪龍、粗葉榕，為傳統(tǒng)瑤藥“七十二風(fēng)”中的五爪風(fēng)［1］，具有健脾補(bǔ)肺、利濕舒筋之功效，主要用于治療脾虛浮腫、食少無力、肝炎、風(fēng)濕痹痛、肺癆咳嗽等癥，瑤醫(yī)作為治療慢性病和病后體弱的常用藥材。目前瑤藥五爪風(fēng)尚未有法定標(biāo)準(zhǔn)，為了控制其質(zhì)量，采用高效液相色譜法測定五爪風(fēng)中補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果令人滿意。

1 儀器與試藥

日本島津LC－20ATVP高效液相色譜儀，SPD－20AVP紫外檢測儀；威瑪龍色譜工作站；Appollo－C18（4.6mm× 250mm，5μm）；HH－S恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋，江蘇金壇儀器廠。乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑均為分析純。補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110739－200310）。五爪風(fēng)藥材6批：20110509（金秀）、20110908（金秀）、20111204（武鳴）由本院黃云峰、宋志釗同志采集；20121220購自金秀縣藥材市場；20120424購自玉林藥市；20120615購自南寧藥材市場。以上樣品均由本院中藥所鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Appollo－C18色譜柱（4.6mm× 250mm，5mm）；檢測波長為246nm；流動(dòng)相：乙腈－水（33：67）；流速：1.0mL／min；柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品9.00mg，置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成180μg／mL對(duì)照品溶液，備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液1.2mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得（21.6μg／mL）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品藥材粉末（過40目篩）1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足缺失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品9.00mg，置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成180μg／mL對(duì)照品溶液，備用。分別精密吸取180μg／mL補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、4.0mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10μL，測定。以補(bǔ)骨脂素對(duì)照品進(jìn)樣濃度μg／ml為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y＝65979X＋69276，r＝0.9997。結(jié)果表明：補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣濃度在4.5～72μg／mL之間與峰面積積分值線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液，進(jìn)樣6次，依次測定，即得。測得供試品RSD為1.40%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20110908）樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測定。結(jié)果測得補(bǔ)骨脂素含量為0.372mg／g，RSD＝1.44%（n＝6）。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)行測定。結(jié)果供試品中補(bǔ)骨脂素含量的RSD 為2.10%，表明供試品溶液在12h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測知含量（0.372mg／g，批號(hào)20110908）的供試品0.5g，精密稱定，精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液（180μg／mL）1.0mL，精密加入甲醇相25mL，按供試液制備項(xiàng)下的方法制備。結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均回收率為100.3%，RSD為1.50%（n＝6），結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表2 6批五爪風(fēng)藥材中補(bǔ)骨脂素測量結(jié)果

2.9 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法，測定6批五爪風(fēng)藥材中補(bǔ)骨脂素含量，補(bǔ)骨脂素含量（mg／g）在0.139～0.675之間，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 五爪風(fēng)的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其含有補(bǔ)骨脂素［2］，對(duì)五爪風(fēng)中補(bǔ)骨脂素的含量測定方法進(jìn)行初步探索，經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)，多批五爪風(fēng)藥材中含有補(bǔ)骨脂素。因此五爪風(fēng)中指標(biāo)成分補(bǔ)骨脂素的含量測定方法，可作為控制本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)之一。

3.2 對(duì)補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果其在246nm處有最大吸收，故確定檢測波長為246nm。參照《中國藥典》2010年版一部里有關(guān)補(bǔ)骨脂素含量測定方法，以甲醇－水、乙腈－水為流動(dòng)相，考察了多個(gè)比例，最后確定乙腈－水（33：67）的比例較為適合。

3.3 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進(jìn)行提取方法考察，采用加熱回流1h補(bǔ)骨脂素含量最高，故采用加熱回流作為提取方法。采用甲醇、50%甲醇、流動(dòng)相作提取溶劑進(jìn)行考察，甲醇提取補(bǔ)骨脂素含量較高，故采用甲醇作為提取溶劑。以加熱回流30、60、90min進(jìn)行提取時(shí)間考察，加熱回流30、60、90min，三者補(bǔ)骨脂素含量無明顯差別，從節(jié)省時(shí)間考慮，故加熱回流提取時(shí)間定為30min。

［1］戴斌，李釗東，丘翠嫦，等.“虎牛鉆風(fēng)”類傳統(tǒng)瑤藥的調(diào)查研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，1998，31（2）：28－34.

［2］軋霽，張曉琦，王英，等.五指毛桃黃酮和香豆素類成分研究［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2008，28（6）：49－52.

Determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC

Yuan LIU1，2，Zhi－zhao Song1，2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi 530022，China；2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinese medicine quality standards，Nanning，Guangxi 530022，China

ObjectiveTo assay the content of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC.Method The Appollo－C18（4.6mm× 250mm，5μm）column was used，the mobile phase consisted of acetonitrile－water（33：67），the detection wave length was 246nm and the column temperature was room temperature.Resuilts Linearity of Quercitr was good at 4.5～72.0μg／mL（r＝0.9996）.The average recovery of buddleodide was100.3%with RSD less than 1.50%（n＝6）.Conclution The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl.

Ficus hirta Vahl；Psoralen；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）16－0016－02

2013.06.14）

廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目（桂科攻11107010－3－4）。

劉元，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事中藥藥理學(xué)研究與新藥開發(fā)。E－mail：liuyuan0821＠vip.163.com