大承氣湯對(duì)大腸桿菌體外抑菌作用的研究

陳麗萍陳 巖董 艷

（1黑龍江省牡丹江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，牡丹江，157009；2黑龍江省醫(yī)院感染內(nèi)科，牡丹江，150036；3牡丹江醫(yī)學(xué)院微生物免疫教研室，牡丹江，157011）

大承氣湯對(duì)大腸桿菌體外抑菌作用的研究

陳麗萍1陳 巖2董 艷3

（1黑龍江省牡丹江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，牡丹江，157009；2黑龍江省醫(yī)院感染內(nèi)科，牡丹江，150036；3牡丹江醫(yī)學(xué)院微生物免疫教研室，牡丹江，157011）

目的：研究大承氣湯對(duì)大腸桿菌的體外抑菌作用，以探討中藥大承氣湯的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：將大腸桿菌涂布于培養(yǎng)基表面培養(yǎng)，然后加大承氣湯，同時(shí)以頭孢拉啶作為陰性對(duì)照，記錄抑菌圈直徑，比較兩組藥物的應(yīng)用對(duì)大腸桿菌體外抑菌的作用。結(jié)果：大承氣湯對(duì)大腸桿菌有一定的抑菌作用，抑菌圈直徑高達(dá)13.9 mm，為中度敏感；先鋒霉素6號(hào)對(duì)大腸桿菌的抑菌作用非常強(qiáng)，抑菌圈直徑高達(dá)19.1 mm，為高度敏感。結(jié)論：大承氣湯對(duì)大腸桿菌有良好的體外抑菌作用，可加強(qiáng)進(jìn)一步臨床研究，應(yīng)用于臨床輕度大腸桿菌感染者的治療。

大承氣湯；大腸桿菌；抑菌作用

我國(guó)中藥物種資源豐富，中藥用于抗菌已有悠久的歷史。大承氣湯，中藥方劑，出自名著《傷寒論》，主治陽(yáng)邪入里，蕩滌腸胃實(shí)熱燥結(jié)積滯［1］，是由大黃、樸硝、枳實(shí)、厚樸組成。經(jīng)過(guò)多年的醫(yī)學(xué)臨床和實(shí)驗(yàn)研究證明，大承氣湯對(duì)感染性疾病具有良好的治療效果。西藥抗感染是通過(guò)藥物與病原菌之間的相互作用而發(fā)揮作用的，而中藥抗感染則是通過(guò)調(diào)節(jié)患者整個(gè)機(jī)體的功能狀態(tài)而實(shí)現(xiàn)抵抗消滅病原菌作用的。筆者以大腸桿菌為例，以西藥作為對(duì)照組，開(kāi)展大承氣湯對(duì)大腸桿菌體外抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究。在大腸桿菌培養(yǎng)基中加入大承氣湯，觀察其體外的抑菌作用，為以后臨床治療大腸桿菌腹腔感染提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 培養(yǎng)基；瓊脂；生理鹽水；超凈工作臺(tái)；低速離心機(jī)；蒸汽滅菌器；顯微鏡；恒溫水浴。

1.2 大腸桿菌 大腸桿菌由我院臨床病料分離，選用醫(yī)學(xué)臨床標(biāo)本中常見(jiàn)和致病需氧菌。一般是從膿性膽囊炎、化膿性闌尾炎和腹膜炎等患者的膿液中培養(yǎng)出來(lái)，經(jīng)肉湯管增菌，血平皿分離，然后經(jīng)VITEK全自動(dòng)細(xì)菌分析儀鑒定，從眾多的菌類(lèi)中選擇大腸桿菌來(lái)作為研究的對(duì)象。菌液的制備：將分離出來(lái)的大腸桿菌，用接種環(huán)挑取適量接種至普通培養(yǎng)基中，加滅菌生理鹽水稀釋至約108個(gè)／mL含菌量，使大腸桿菌懸浮于生理鹽水中，并對(duì)其進(jìn)行充分震蕩混勻后，用VIKE COLOR／METER比濁。

1.3 大承氣湯 由我院藥物制劑室提供，其組成為大黃、樸硝、枳實(shí)和厚樸。用十倍藥材體積的水，先浸泡30 min，再煎煮30 min，濾出藥液，再加水浸沒(méi)藥材3～4 cm，煎煮30min，濾出藥液，然后再加水浸沒(méi)藥材1～1.5 cm，煎煮20 min，濾出藥液，3次濾液合并一起，常壓蒸發(fā)，濃縮至原藥材質(zhì)量與煎液體積比為1∶1，再進(jìn)行消毒滅菌，置于4℃冰箱中保存，備用。采用流通滅菌保存?zhèn)溆贸蓽珓?。先鋒霉素6號(hào)（頭孢拉啶）：由杭州百思生特技術(shù)有限公司生產(chǎn)，把先鋒霉素配制成0.6 mg／m L的濃度以備用。

1.4 抑制試驗(yàn) 取大腸桿菌做8皿，取其抑菌環(huán)直徑的平均值。大腸桿菌的測(cè)定：采用平面皿，將實(shí)驗(yàn)大腸桿菌液用無(wú)菌棉棒均勻地涂布在整個(gè)培養(yǎng)基表面，反復(fù)持續(xù)3次，在每次菌液涂布過(guò)程中都要將平面皿旋轉(zhuǎn)60°最后才能沿平面皿周?chē)@兩圈，保證能使菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。但在制作過(guò)程一定要注意制備的菌液必須要在15 min內(nèi)使用。采用平面皿的尺寸規(guī)格為厚4 mm、直徑70 mm（由青島科宇生物工程有限有公司制造）。然后用打孔器在平面皿上均勻打6個(gè)孔，孔的直徑大約6 mm，孔之間的間距不少于20 mm，且孔中距離平面皿的距離不得小于10 mm。孔打好之后，然后在每個(gè)孔內(nèi)加入50μL大承氣湯藥液。對(duì)照組操作同上，但每個(gè)孔內(nèi)加入頭孢拉啶溶液。將板放置于37℃恒溫箱中，待其培養(yǎng)24～48 h后觀察抑菌結(jié)果。

1.5 抑菌效果判定標(biāo)準(zhǔn) 使用游標(biāo)卡尺來(lái)測(cè)量各藥物的抑菌環(huán)直徑。當(dāng)抑菌直徑＞20 mm的就稱之為極度敏感；處于15～20 mm范圍內(nèi)的記作高度敏感；處于10～15mm范圍內(nèi)的記作中度敏感；抑菌圈直徑＜10 mm記為低度敏感；無(wú)抑菌圈的記作耐藥。

2 結(jié)果

本組試驗(yàn)得出：大承氣湯對(duì)大腸桿菌有一定的抑菌作用，為中度敏感；先鋒霉素6號(hào)對(duì)大腸桿菌的抑菌作用非常強(qiáng)，抑菌圈直徑高達(dá)19.1 mm，為高度敏感。具體見(jiàn)表1所示。

表1 不同藥對(duì)大腸桿菌體外的抑菌作用（抑菌直徑mm）

3 討論

目前我國(guó)中藥資源已超過(guò)上萬(wàn)個(gè)種類(lèi)，經(jīng)鑒定并已有命名的中藥約8 000多種，常用中藥多達(dá)500余種，包括植物、動(dòng)物、礦物用藥，大多數(shù)中藥為植物用藥［2］。隨著國(guó)家對(duì)中藥發(fā)展的大力支持與鼓勵(lì)，我國(guó)中藥開(kāi)發(fā)方面的研究越來(lái)越多，并取得了豐碩的成果。近些年來(lái)，隨著中藥臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì)的顯現(xiàn)，如中藥的不良反應(yīng)通常比西藥要小一些，中藥講究的是從根本上治療疾病，調(diào)養(yǎng)患者的身體等方面。世界其他國(guó)家也開(kāi)展了對(duì)中藥的研究開(kāi)發(fā)［3］，如美國(guó)等重點(diǎn)研究的是腫瘤、心血管、神經(jīng)系統(tǒng)、艾滋病等藥物治療方法，亞洲其他國(guó)家還有關(guān)于消化系統(tǒng)、抗感染藥物等方面的研究?！爸胁菟帯边@一名稱也逐漸被“天然藥物”所取代，中藥不再局限于中國(guó)，它已成為全球熱門(mén)的研究課題，包括中草藥復(fù)方給藥的各項(xiàng)有效成分的研究，安全性研究，藥理學(xué)與毒理學(xué)研究等［4］。

大承氣湯由由大黃、樸硝、枳實(shí)、厚樸組成，大黃主瀉熱通便，峻下熱結(jié)，急下存陰，蕩滌燥結(jié)，清熱解毒，活血祛瘀，為君藥；芒硝主治瀉熱通便，軟堅(jiān)潤(rùn)燥，為臣藥；厚樸有下氣除滿之功效，為佐藥；枳實(shí)有行氣消痞之功效，為佐藥。各藥配伍，可增強(qiáng)瀉下熱結(jié)，使胃腸氣機(jī)通降下行之功效。臨床常用于急性腸梗阻，幽門(mén)梗阻，膽囊炎，胰腺炎或某些熱性病所致的高熱、意識(shí)模糊、驚厥、發(fā)狂、大便不通者。該湯藥燥癥不甚、氣虛陰虧、年老體弱、孕婦不宜使用，病情好轉(zhuǎn)后應(yīng)及時(shí)停藥，以免過(guò)量使用損耗正氣?，F(xiàn)代研究顯示，大承氣湯具有促進(jìn)胃腸道消化功能，還有一定的抗菌、抗炎、抗內(nèi)毒素的作用［5］。

大腸肝菌是一種存在于人和動(dòng)物腸道的細(xì)菌，屬于革蘭氏陰性桿菌，寄居在大腸中，占腸道菌的1%。大腸桿菌幫助合成Vit B和Vit K，能發(fā)酵糖類(lèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，其代謝活動(dòng)可以抑制腸道中分解的蛋白質(zhì)及其微生物的生長(zhǎng)，保護(hù)機(jī)體不受蛋白質(zhì)分解物的危害，另外，大腸桿菌素還有殺菌作用。正常條件下，人體大腸肝菌不致病，但大腸桿菌一旦進(jìn)入膽囊及膀胱等處可引發(fā)炎性反應(yīng)，在特定條件下，大腸肝菌還可能引起腸道感染，進(jìn)而導(dǎo)致腹瀉。

凡是腸道內(nèi)有大腸桿菌的，都可能發(fā)生大腸肝菌感染，包括人，家畜禽類(lèi)。目前，大腸肝菌數(shù)常被作為飲水、食品、藥品的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)家規(guī)定，飲用水中大腸桿菌數(shù)不應(yīng)超過(guò)3個(gè)／L。也有一些報(bào)道稱，人與人之間的密切接觸也可能傳播大腸桿菌。其中食物傳播占70%以上，而且可以造成交叉感染，可見(jiàn)大腸桿菌感染的危害極大，尤其是嬰幼兒感染大腸桿菌，可能?chē)?yán)重危害其健康，因此，尋找有效的抑制大腸桿菌的治療藥物是我們醫(yī)務(wù)工作者面臨的重要課題。

化學(xué)類(lèi)抗菌藥物具有高效抑菌殺菌的特征，目前廣泛應(yīng)用于臨床抗感染治療，給患者帶來(lái)了極大的幫助。近些年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)抗菌藥物的應(yīng)用存在極大的弊端，濫用、亂用、不規(guī)范應(yīng)用抗菌藥的現(xiàn)象十分嚴(yán)重，這一現(xiàn)象導(dǎo)致的結(jié)果就是耐藥菌甚至多重耐藥菌的產(chǎn)生，這已成為人類(lèi)健康新的威脅。中藥抗菌治療細(xì)菌耐藥情況的發(fā)生機(jī)率非常小，而且中藥治療存在不良反應(yīng)小、毒性小、無(wú)后遺效應(yīng)等優(yōu)勢(shì)。中藥在抗感染治療方面已有多年的臨床經(jīng)驗(yàn)。根據(jù)有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，大部分寒下藥物具有較好的體外抗菌作用［6］。而在這些藥物中，大黃的體外抗菌效果最為明顯，據(jù)有關(guān)報(bào)道稱，大黃中的蒽醌衍生物是抗菌的主要有效成分，尤其以大黃酸、大黃素和蘆薈大黃素作用最為顯著。大黃中的蒽醌衍生物的抗菌作用與其本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)有著密切的聯(lián)系。姬志偉［7］等研究發(fā)現(xiàn)，大黃對(duì)大腸桿菌有明顯的抑制作用。而鄭超等［8］人研究指出，單藥組方大黃對(duì)大腸桿菌的抑制作用并不明顯，而組方用藥中配伍大黃，能起到較好的大腸桿菌抑制作用。筆者分析原因可能是因?yàn)樗褂玫乃幬锏膩?lái)源與質(zhì)量、制備工藝、藥物濃度、大腸桿菌的來(lái)源及實(shí)驗(yàn)條件等因素而導(dǎo)致的結(jié)果上的差異。

本文進(jìn)行了大承氣湯對(duì)大腸桿菌的體外抑制實(shí)驗(yàn)研究，并以抗生素類(lèi)西藥作為對(duì)照組，觀察了兩組藥物對(duì)大腸桿菌的抑制效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，先鋒霉素6號(hào)對(duì)大腸桿菌的抑菌作用非常強(qiáng)，抑菌圈直徑高達(dá)19.1 mm，表現(xiàn)為高度敏感。大承氣湯對(duì)大腸桿菌的抑制作用也較為明顯，抑菌圈直徑稍小于先鋒霉素6號(hào)，為中度敏感。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，大承氣湯具有較好的大腸桿菌抑制作用，但與抗生素類(lèi)藥物相比，中藥大承氣湯的抑菌作用相對(duì)要緩慢一些，不及先鋒霉素6號(hào)強(qiáng)效、速效。

綜上所述，大承氣湯對(duì)體外大腸桿菌具有良好的體外抑菌作用，值得進(jìn)一步深入研究，應(yīng)用至臨床。

［1］譚復(fù)成，朱烈彬.大黃的不同炮制與藥效關(guān)系探討［J］.中華中西醫(yī)學(xué)雜志，2006，4（3）：60-63.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.2010年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：17-18.

［3］王曉暉，劉亭岐，陳波，等.14種中藥及其組方對(duì)臨床常見(jiàn)致病菌的抑菌作用［J］.畜牧與獸醫(yī)，2009，41（8）：74-76.

［4］劉榮欣，魯改儒，郭吉勇，等.中藥及其組方對(duì)大腸桿菌的體外抑菌試驗(yàn)［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（4）：2265-2267.

［5］Sokkar SM，Darwiesh G，Madbooly A.Study of the pathological effect of Escherichia coli endotoxin in rams［J］.JVet Med，2008，50（5）：226-230.

［6］常明向，章晶，陳科力.黃連、赤芍及大黃對(duì)大腸桿菌內(nèi)毒素釋放的影響［J］.中成藥，2007，29（5）：752-753.

［7］姬志偉，羅連城，解基良，等.大承氣沖劑和大黃的體外抑菌作用［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科，2003，9（6）：451-453.

［8］陳超，鄭成中.致病性大腸桿菌胃腸感染小鼠模型血漿Th1、Th2、Th17淋巴細(xì)胞因子變化及意義［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（19）：37 -39.

（2013-03-31收稿）

Studies on the Effect of Dahuang Chengqi Decoction on the Antibacterial E ffect of Escherichia Coli in Vitro

Chen Liping1，Chen Yan2，Dong Yan3
（1 First People′s Hospital in Mudanjiang City of Heilongjiang Province，Mudanjiang 157009，China；2 Heilongjiang provincial hospital infection internalmedicine，Mudanjiang 150036，China；3 Section of Microbial Immune Mudanjiang Medical College，Mudanjiang 157011，China）

Objective：To study the effect of Dahuang Chengqi Decoction on escherichia coli in vitro in order to explore clinical application value of Dahuang Chengqi Decoction.Methods：Coat escherichia coli inmedium surface culture and add Dahuang Chengqi Decoction.Take both spore and chemoprotective as negative control，record bacteriostatic circle diameter，compare two groups of drug application on escherichia coli in vitro antibacterial effect.Results：Dahuang Chengqi decoction has a certain effect on escherichia coli，bacteriostatic circle diameter went up to13.9mm which is consideredmoderately sensitive；Cephalosporin＃6 has a strong effect on the antibacterial effect of escherichia coli，bacteriostatic circle diameterwentup to 19.1mm，which is highly sensitive.Conclusion：Dahuang Chengqi decoction has good antibacterial effect on escherichia coli in vitro.Further clinical studies can be carried out to apply the decoction to the clinical treatment ofmild escherichia coli infections.

Dahuang Chengqi decoction；Escherichia coli；Antibacterial effect

10.3969／j.issn.1673-7202.2013.10.033