磁珠法提取糞便檢材DNA

劉 莉 ，王衛(wèi)華，唐劍鋒，張清波

（1.煙臺市公安局刑偵支隊，山東 煙臺 264000；2.煙臺市公安局芝罘公安分局刑警大隊，山東 煙臺 264000）

疑難生物檢材的發(fā)現(xiàn)、提取和檢驗越來越多地應(yīng)用到了各類刑事案件的偵破中，并發(fā)揮了良好的作用?，F(xiàn)場糞便檢材因其中含有的抑制物種類繁多并且不易去除，檢驗成功率不高。本研究采用磁珠分離試劑盒（sbeadex?forensic kit）提取糞便檢材，有效去除抑制因子，并高效回收高純度DNA，提高此類檢材的檢驗成功率，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

5份糞便檢材和3份糞便擦拭物（載體為衛(wèi)生紙）分別來自本公安局實驗室2010年以來受理的案件。剪取黃豆粒大小糞便檢材、約1cm×2cm大小糞便擦拭物分別放入1.5 mL離心管中。分別采用磁珠分離試劑盒（sbeadex?forensic kit，煙臺澳斯邦公司）和Chelex法，提取以上檢材的基因組DNA。采用 Identifiler試劑盒（美國AB公司）在9700型擴增儀（美國AB公司）上進行復合擴增，擴增產(chǎn)物用3130XL遺傳分析儀（美國AB公司）進行檢測，使用GeneMapper ID v3.2軟件進行基因分型。

2 結(jié)果與討論

采用Chelex法提取的8份檢材均未檢出STR基因型。采用磁珠分離試劑盒提取的檢材中有3份糞便檢材和3份糞便擦拭檢材均得到了完整的STR基因分型結(jié)果（圖1），2份糞便檢材未檢出基因型。

圖1 磁珠法提取糞便檢材的STR分型結(jié)果

糞便檢材所含成分復雜，含有大量的抑制因子，采用常規(guī)提取方法不易去除，往往導致擴增失敗。磁珠法提取核酸是通過細胞裂解液裂解細胞，從細胞中游離出來的核酸分子被特異性地吸附到磁性顆粒表面，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。反應(yīng)一定時間后，在磁場作用下，使磁性顆粒與液體分開，回收顆粒（即磁珠-DNA混合物），再用洗脫液洗脫即可以得到高質(zhì)量的DNA，而高質(zhì)量的DNA避免了擴增抑制劑的存在，保證了下一步擴增環(huán)節(jié)順利進行。

本研究采用的磁珠分離試劑盒中80%以上的磁珠顆粒直徑在0.5～10μm、質(zhì)量濃度0.3～0.35g/mL、每克磁珠顆粒最多能吸附2mg DNA，使得磁珠粒子在懸浮液狀態(tài)時，沉降速度變慢，能夠最大程度與液體中的DNA相結(jié)合，并且磁珠面積較大可以結(jié)合更多的核酸，使DNA結(jié)合的量最大化。此外，在糞便檢材的選擇上首選糞便擦拭物，一方面因糞便的量減少而抑制物的含量也隨之減少，另一方面擦拭物上存在與皮膚接觸時遺留的DNA成分，更易于得到高質(zhì)量的DNA。