DNA定量分析在宮頸癌早期篩查中的應(yīng)用價(jià)值

鐘鍇娜

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤，我國每年新發(fā)病例約3萬人，占世界宮頸癌新發(fā)病例的28.8%，為我國婦女惡性腫瘤第1位。對已婚婦女定期進(jìn)行宮頸癌篩查是最有效控制宮頸癌的途徑，如何選擇高效、合理、規(guī)范、經(jīng)濟(jì)的篩查方法是當(dāng)前亟待解決的問題[1]。DNA定量分析方法、液基細(xì)胞學(xué)檢查、雜交捕獲HPV是用于宮頸癌診斷的常用方法，現(xiàn)將三種方法在宮頸癌早期篩查中的優(yōu)劣性進(jìn)行分析，并據(jù)此找出最佳的篩查手段。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年4月-2012年4月中山市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科行常規(guī)婦檢患者1000例，年齡22~68歲，平均年齡（46.19±10.28）歲；其中<30歲124例，31~40歲284例，41~50歲315例，51~60歲255例，>61歲22例；所有患者均無子宮切除史、無身孕、無盆腔放射治療史。

1.2 研究方法 所有患者進(jìn)行宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析方法、液基細(xì)胞學(xué)檢查、雜交捕獲HPV三種方法檢測。結(jié)果異常時(shí)，于陰道鏡下行宮頸定位活檢。病理為金標(biāo)準(zhǔn)，并作組間比較。分析其相關(guān)性及各組和相互聯(lián)合檢查在宮頸癌早期篩查中的優(yōu)劣勢。

1.3 檢測方法

1.3.1 DNA定量分析方法 用DI代表細(xì)胞核的DNA含量，正常DI數(shù)值1~2，即2C~4C細(xì)胞。以Auer等的標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，下列情況為不正常：DI>2.5，DI在1.5~2.5的3C、4C細(xì)胞，出現(xiàn)非整倍體細(xì)胞峰。

1.3.2 液基薄層細(xì)胞學(xué)方法 經(jīng)巴氏染色制片，按照2001年TBS報(bào)告系統(tǒng)為標(biāo)準(zhǔn)，分為以下五個(gè)級別：正常或良性，不明意義的非典型鱗狀上皮，低級別鱗狀上皮內(nèi)病變，高級別鱗狀上皮內(nèi)病或原位癌，鱗狀上皮浸潤癌。

1.3.3 雜交捕獲HPV檢測方法 將標(biāo)本離心后，取沉淀物用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測標(biāo)本中的HR-HPV DNA，檢測目前已知的13種HR-HPV DNA（即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）。標(biāo)本 DNA>1.0 ng/L 為陽性[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度分別為61.29%，67.52%，73.81%；液基細(xì)胞學(xué)檢查為77.95%，62.33%，60.57%；雜交捕獲HPV為86.33%，92.15%，90.21%。見表1。

表1 三種檢測方法敏感度、特異度、準(zhǔn)確度比較 %

3 討論

傳統(tǒng)宮頸涂片檢查是宮頸癌篩查最常用的檢查方法之一，但該方法容易出現(xiàn)假陰性，診斷的準(zhǔn)確率不高。全自動(dòng)細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)在傳統(tǒng)宮頸涂片的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，細(xì)胞制片和細(xì)胞閱片分析技術(shù)顯著提高。其原理為正常細(xì)胞（即DNA二倍體細(xì)胞）或腫瘤細(xì)胞在增殖時(shí)，細(xì)胞核內(nèi)的DNA結(jié)構(gòu)和含量都會(huì)發(fā)生變化。通過測定DNA的周期變化，能夠發(fā)現(xiàn)發(fā)生惡性增殖的腫瘤細(xì)胞。但DNA的含量無法直接用細(xì)胞圖像系統(tǒng)進(jìn)行分析和測量，故先對細(xì)胞核染色，再用顯微鏡進(jìn)行測定，同時(shí)用DI進(jìn)行計(jì)量測定。DI=被測細(xì)胞DNA含量的數(shù)字/正常細(xì)胞DNA含量在G0/G1期間峰值的數(shù)字[3]。宮頸脫落細(xì)胞DNA定量分析與傳統(tǒng)宮頸涂片方法比較，靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度均得到提高，但是細(xì)胞核的DNA含量容易受病理、化學(xué)、物理等因素的影響，如病毒感染、VitB12缺乏、放射線等，引起DNA含量的變化，因此，DNA定量分析仍不能達(dá)到準(zhǔn)確診斷宮頸癌的要求。

液基細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)也是在傳統(tǒng)巴氏涂片檢測方法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，是在標(biāo)本取出后立即浸入細(xì)胞保存液中，有效避免了細(xì)胞過度干燥和丟失引起的誤差，將保存液中的細(xì)胞進(jìn)行程序化處理，可做到薄層涂片均勻一致，方便了鏡下觀察，提高了宮頸異常細(xì)胞的檢出率，降低了假陰性的發(fā)生率，提高了靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度。本文研究中，液基細(xì)胞學(xué)檢查的敏感度高于DNA定量分析，但特異度和準(zhǔn)確度低于DNA定量分析，可將兩者聯(lián)合應(yīng)用，以提高診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

研究已經(jīng)證明，HPV病毒感染是導(dǎo)致宮頸癌的重要因素，雜交捕獲HPV-DNA檢測是HPV基因分型檢測的新方法，并且HPV感染的陽性率隨宮頸上皮內(nèi)病變程度的增加而增高，在宮頸癌發(fā)展的預(yù)測上有更大的作用[4]。本文研究顯示，雜交捕獲HPV的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度均顯著高于DNA定量分析，說明雜交捕獲HPV-DNA在診斷宮頸癌方面具有一定的優(yōu)勢，但是由于其價(jià)格較為昂貴，因此在普查中的應(yīng)用率較低，可用于治療結(jié)果的判斷及預(yù)后的預(yù)測。

[1] 李沛，許云，杭國琴，等.TCT聯(lián)合高危型HPV DNA檢測在宮頸病變篩查中的診斷價(jià)值[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（9）：1123-1125.

[2] 侯安麗，張玉娟，邵雪齋，等.液基薄層細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析方法在宮頸癌篩查中的對比分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2012，14（1）：53-55.

[3] 戴永蘭，許霞.DNA定量分析在宮頸癌及癌前病變篩查中的應(yīng)用[J].疾病監(jiān)測與控制雜志，2011，5（2）：115-116.

[4] 余琦，李寧，楊江輝，等.TCT技術(shù)與HPV分型技術(shù)在子宮頸病變篩查中的應(yīng)用價(jià)值[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2010，17（3）：171-174.