HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量

劉佳麗蔡威黔陳 穎

HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量

劉佳麗1蔡威黔1陳 穎2

目的建立華鳳仙藥材中沒食子酸的HPLC含量測定方法，為評(píng)價(jià)華鳳仙藥材的質(zhì)量提供理論參考。方法采用HPLC法測定華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，色譜條件為：C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(5：95)，流速為1.0ml/min，檢測波長為273nm。結(jié)果沒食子酸進(jìn)樣量在0.053～0.795μg范圍呈良好的線性關(guān)系(r=0.9996)，平均回收率為101.76%，RSD為1.90% (n=6)。藥材中沒食子酸的平均含量為0.18mg/g。結(jié)論本測定法快速、簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于華鳳仙藥材的質(zhì)量控制研究。

華鳳仙；HPLC；沒食子酸

華鳳仙（Impatiens chinensis Linn.）分布于廣東、廣西、浙江、江西、福建、云南等地，又稱水鳳仙、水指甲花、象鼻花等。具有清熱解毒、活血散瘀、消腫拔膿的功效，用于治療發(fā)熱、咳嗽、咳痰、肺結(jié)核、跌打損傷、瘀血疼痛；外用治蛇頭指瘡、癰瘡腫毒等病癥，為廣西民間常用中草藥[1]，并收錄在《廣西中草藥》藥材標(biāo)準(zhǔn)中。目前有關(guān)華鳳仙藥材的質(zhì)量控制方面報(bào)道甚少，僅在測定總黃酮方面有報(bào)道[2]，由于該藥材在廣西民間使用證明具有較好的療效，常用于治療發(fā)熱、咳嗽等，應(yīng)用較廣泛。然而現(xiàn)在很多民間醫(yī)生只是靠一些積累的經(jīng)驗(yàn)來判斷華鳳仙藥材的真?zhèn)?，這樣在使用上很大程度上會(huì)有偏差，安全用藥就得不到保障，也在一定程度上限制了華鳳仙藥材的制劑開發(fā)；且現(xiàn)代藥理研究表明，沒食子酸單體成分具有較強(qiáng)的體外抑菌作用[3]，與治療發(fā)熱、咳嗽等的疾病相一致，為了保證該藥材的質(zhì)量，必須要制訂相關(guān)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本文采用HPLC法測定華鳳仙藥材中指標(biāo)成分沒食子酸的含量，為華鳳仙藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步研究該藥材藥效物質(zhì)打下基礎(chǔ)[4-7]。

1 儀器與材料

Agilent1100高效液相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；Hypersil ODS2 C18柱(5μm，4.6mm× 250mm)；沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110831-200803）；水（超純水）；甲醇、乙腈為色譜純（Fisher）；其他試劑均為分析純。華鳳仙藥材（批號(hào)為20101103、20101216、20110627）采于廣西南寧市高峰林場，鑒定為鳳仙花科（Balsaminaceae）植物華鳳仙（Impatiens chinensis Linn.）的根、莖、葉和花全株。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱為Hypersil ODS2 C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（5：95）；檢測波長為273nm；流速為1.0ml/min。理論塔板數(shù)按沒食子酸計(jì)應(yīng)不少于3000。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量，加水使溶解并稀釋成每1ml含53μg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備稱取華鳳仙藥材（批號(hào)為20101103）粗粉約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0μl，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測定，以對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=239638x +21482（ r=0.9996），表明沒食子酸進(jìn)樣量在0.053～0.795μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。以水溶劑作為空白對照。對照品、供試品、空白對照的色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品試液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”色譜條件下分別測其峰面積，日內(nèi)精密度RSD值為1.05%（n=6）。同法測定日間精密度RSD值為1.69%（n=6），表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取華鳳仙藥材（批號(hào)為20101103）粗粉約2g，共6份，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備成供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別進(jìn)樣10μl注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，藥材中沒食子酸的平均含量為0.15mg/g，RSD為1.30%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取華鳳仙藥材（批號(hào)為20101103）粗粉約2g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，常溫下放置，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別在放置0，4，8，12，16，24h后進(jìn)樣10μl注入高效液相色譜儀測定峰面積，峰面積的RSD值為1.52%（n=6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn)取已知含量華鳳仙藥材（批號(hào)為20101103）粗粉約1g（含量為0.15mg/g），精密稱定，共9份，按高、中、低三個(gè)量級(jí)，分別精密加入沒食子酸對照品溶液適量，按“2.3”項(xiàng)下的方法平行制備9份供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，進(jìn)樣10μl注入高效液相色譜儀測定分別測定含量，計(jì)算回收率，平均回收率為101.79%，RSD為1.90%（n=9）。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品含量測定稱取三批華鳳仙藥材粗粉各2g，精密稱定，平行三次，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別進(jìn)樣10μl進(jìn)行測定，以峰面積計(jì)算沒食子酸的含量。結(jié)果見表2。

表2 三批華鳳仙藥材中沒食子酸含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

本實(shí)驗(yàn)首次對華鳳仙藥材中沒食子酸的含量進(jìn)行了HPLC分析，參考文獻(xiàn)[3-6]比較了甲醇、乙醇-水、水等多種溶劑作為提取溶劑，經(jīng)過HPLC分析，甲醇和乙醇-水作為提取溶劑時(shí)，雜質(zhì)干擾比較嚴(yán)重，且提出量較少，最后選擇水作為沒食子酸的提取溶劑，該溶劑廉價(jià)、無毒、提取效果好。比較甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸等多種流動(dòng)相及不同的比例，最后確定乙腈-0.1%磷酸（5：95）作為該含量測定的流動(dòng)相，在該流動(dòng)相下，沒食子酸指標(biāo)成分達(dá)到基線分離，分離度符合要求。本實(shí)驗(yàn)測定了不同采收時(shí)間的三批華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，平均含量為0.18mg/g，為了更好的研究華鳳仙藥材中沒食子酸的含量，今后將從不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間等多角度收集樣品，同時(shí)開展指紋圖譜等相關(guān)的研究，為科學(xué)有效地控制該藥材的質(zhì)量提供參考，進(jìn)一步研究該藥材藥效物質(zhì)打下基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)所采用方法快速、簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于華鳳仙藥材的含量測定，對于華鳳仙藥材的質(zhì)量控制和進(jìn)一步研究該藥材具有參考意義。

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[3] 韋建華,盧汝梅.周媛媛.草龍?zhí)崛∥锛盎瘜W(xué)成分的抗菌活性研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2011,22(6)：1449-1450.

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Determination of the Content of Gallic Acid in the Impatiens Chinensis by HPLC

Liu Jiali Cai Weiqian Chen Ying

ObjectiveEstablished HPLC methods for the determination of the Impatiens chinensis and provide theoretical reference for the control of the quality of the Impatiens chinensis.MethodsHPLC were adopted to determine effective contents of gallic acid of the Impatiens chinensis.Hypersil ODS2 C18(4.6mm×250mm, 5μm) column as analytic column, with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid (5∶95).The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was 273 nm.ResultsThe liner range of gallic acid was 0.053～0.795μ g(r=0.9996). The average recovery was 101.76%, RSD was 1.90% (n=6).ConclusionThis method is fast, easy, high sensitivity, good reproducibility, and can be used for the quality control study of the Impatiens chinensis.

Impatiens chinensis; HPLC; Gallic acid

R927.2

A

1673-5846(2013)02-0061-03

1 龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東深圳 518172

2 廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東廣州 510520

劉佳麗，女，本科學(xué)士，主管藥師。E-mail：14554055@qq.com。

蔡威黔，男，碩士研究生，主任藥師。E-mail：weiqiancai@21cn.com。