高效液相色譜法測定決明子中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量

林炳國

佛山市中醫(yī)院，廣東佛山 528000

決明子主要為豆科絕命屬植物決明（Cassia obtusifolia1.）或者是小決明（Cassia tora L.）的干燥的成熟種子，性味甘、苦、咸、微寒。臨床上具有清熱明目、潤腸通便的效果，是中藥方中常用的中藥，其中的大黃素、大黃酚以及大黃素甲醚、蘆薈大黃素等是決明子中的有效成分。文獻中多報道關(guān)于決明子中總蒽醌含量的報道[1]，因此，本文采用了高效液相色譜法測定大黃素、大黃酚以及大黃素甲醚的含量，為決明子質(zhì)量控制提供新的測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

采用Water717高效液相色譜儀器，Water717可見-紫外檢測儀器，Water717色譜處理機器，Water717自動進樣器，梅特勒電子分析天平。

1.2 試藥

大黃素（批號：20110201）、大黃酚（批號：20100928）、大黃素甲醚（批號：20101102）對照品購于中國藥品生物制品檢定所。中藥決明子有我省中藥研究所采購批發(fā)站提供，經(jīng)鑒定為C.obtusifolia L.和C.tora L.的種子。

2 測定方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱為NovapakC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，2.5 μm），流動相為甲醇：1.0%磷酸緩沖溶液（80:20），柱溫：25℃，檢測波長：254 nm，，流速為1.0 mL/min，進樣量為20 μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱定大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品1.96 mg、3.57 mg、3.955 mg，放置于50 mL的容量瓶中，甲醇進行定容，搖勻后靜置，后用甲醇再加至刻度。放置于4℃的冰箱中儲存，備用。分別精密吸取大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品溶液20 μL，分別進樣4次，測定三種成分的色譜峰面積，以進樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積作為縱坐標(biāo)，經(jīng)過繪圖后得線性回歸方程：大黃素Y=17.689×105X-0.069×105，r=0.9998；大黃酚Y=32.67×105X-0.099×105，r=0.9995；大黃素甲醚Y=9.874×105X-0.021×105，分別在1.96～19.6 μg/mL（r=0.9998），3.57～35.7μg/mL（r=0.9995），3.955～39.55μg/mL（r=0.9997）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 中藥決明子中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量（1.0g）

2.3 樣品測定

精密稱取三個批次（20090201，20090827，20100122）中藥決明子粉末1.5 g，過45目篩，采用甲醇回流提取，直至液體顏色變?yōu)闊o色，收集提取液放置于90℃水浴中蒸干，加入3.0 mol/L的硫酸溶液25 mol，直火緩緩回流2.0 h，后常溫下放置，加入氯仿溶液40 mL，水浴回流提取1.0h，放冷，將提取液移至分液漏斗中，漏斗采用氯仿進行洗滌，分別取氯仿液，酸水層采用氯仿進行萃取，共計萃取5次，合并氯仿溶液，放置水浴上蒸干，殘渣加入適量甲醇進行溶解，移至30 mL容量瓶中，甲醇定容，0.5 μm微孔濾膜過濾器過濾。分別進樣20 μL，測定峰面積，根據(jù)線性關(guān)系方程計算大黃素、大黃酚以及大黃素甲醚的含量。結(jié)果見表1。

2.4 加樣回收率試驗

精密稱取中藥決明子藥材5份，每份約為1.0 g，進行精密稱定后，分別精密加入大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品30 mL。對照品按照對照品溶液的制備方法進行配置成供試品溶液，精密吸取上述溶液20 μL，按照2.1項下的色譜條件進行測定。測定各個成分的平均回收率。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

采用二極管陣列檢測器對進樣后的大黃素、大黃酚、大黃素甲醚進行全波長的掃描[2]，結(jié)果在254 nm處，三種成分有最佳的波長吸收，因此在實驗過程中選定高效液相的檢測波長為254 nm。

3.2 流動相的選擇

根據(jù)相關(guān)資料中的檢測結(jié)果，本文在試驗過程中選擇了幾種不同系統(tǒng)的流動相[3-4]，如甲醇：0.1%磷酸緩沖溶液、甲醇：水系統(tǒng)、甲醇：1.0磷酸緩沖溶液，結(jié)果表明了以甲醇：1.0%磷酸緩沖溶液（80:20）時，大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的分離效果及色譜峰峰形為最好，采用的1.0%磷酸緩沖溶液可以有效的抑制結(jié)構(gòu)中酚羥基的解離，因此本次試驗中采用甲醇：1.0%磷酸緩沖溶液作為流動相。

表2 大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的回收率測定結(jié)果（n=5）

實驗結(jié)果表明，采用高效液相色譜法對中藥決明子中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量進行測定分析，該方法簡單、準(zhǔn)確、分離度較好，可以作為中藥決明子及其相關(guān)制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1] 廖海，周嘉裕，何成生，等.決明子大黃素和大黃酚的提取與含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18（6）：1332-1334.

[2] 王賓豪，楊榮平，張小梅，等.高效液相色譜法測定決明子中蒽醌類成分的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（1）：135-137.

[3] 潘馨.氣相色譜法測定綠衣枳殼中檸檬烯的含量[J].海峽藥學(xué)，2006，24（2）：68-69.

[4] 潘馨.HPLC測定決明子中大黃素的含量[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，16（1）：40-45.