多指標正交試驗法優(yōu)選桂黃降脂顆粒水提工藝

趙劍等

摘要：目的：優(yōu)選桂黃降脂顆粒的最佳水提工藝。方法：采用正交試驗法，以水提物的干浸膏重量、有機酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評分指標，多指標成分優(yōu)選桂黃降脂顆粒的最佳水提工藝。結果：桂黃降脂顆粒最佳水提取工藝為：浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。結論：該提取工藝客觀可行，穩(wěn)定合理，可為工藝生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

關鍵詞：多指標成分；正交設計；有機酸；丹參素鈉；橙皮苷；桂黃降脂顆粒

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A

文章編號：1007-2349（2013）08-0055-04

桂黃降脂顆粒是瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院院內制劑，批準文號（川藥制字Z20080291），主要由山楂、丹參、澤瀉、黨參、陳皮等7味中藥組成。具有益氣化痰，活血化瘀的功效，主治脂肪肝、高脂血癥。處方中山楂為君藥，具有消食化積、活血化瘀的功效，近年來常用于高血壓、冠心病及高脂血癥，其水溶性成分含有多種有機酸能提高蛋白酶的活性，促進脂肪分解[1]，丹參為臣藥，具有擴張冠脈、增加冠脈流量、降低膽固醇、甘油三酯等作用，丹參素為丹參所含專屬性成分，是一種水溶性酚酸，以丹參素鈉的形式存在于天然藥物中，具有抗血小板聚集和解聚的作用[2]。陳皮為佐藥，具有理氣和胃、消積導滯的功效，橙皮苷為其主要有效成分，是一種二氫黃酮苷類成分，易溶于熱水中，具有增強毛細血管韌性，降低膽固醇等作用[1]。鑒于中藥成方制劑中藥味數(shù)多、成分復雜，根據(jù)處方中中藥所含化學成分及其理化性質，結合處方中的“君、臣、佐、使”的中醫(yī)藥理論，以干浸膏、有機酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評分指標，多指標優(yōu)選桂黃降脂顆粒水提的最佳工藝。

1儀器與材料

SPD-20A高效液相色譜儀（美國科學系統(tǒng)公司）；UltimateTM C18鍵合硅膠柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；QP-01真空泵；JPCT0328超聲儀，NRB17S3W電冰箱（日本松下）；ZK072型電熱真空干燥箱（上海實驗儀器廠）；JA203H電子天平（常州幸運電子）；橙皮苷（購自中國藥品生物制品檢定所，批號110721-200912，供含量測定用）；丹參素鈉（購自中國藥品生物制品檢定所，批號110855-200809，供含量測定用）；山楂、丹參、陳皮、等7味中藥購于瀘州市寶光中藥飲片公司，經(jīng)瀘州市藥檢所中藥室袁常珍主任鑒定，均符合2010版《中國藥典》項下規(guī)定；甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；純凈水（瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室）；桂黃降脂顆粒（瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室）。

2方法與結果

2.1水提工藝優(yōu)選 山楂、丹參、陳皮等7味中藥采用加水煎煮法提取有效成分，以浸泡時間、加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為因素，采用L9（34）正交試驗法安排實驗，以干浸膏、提取物中主要有效成分有機酸、丹參素鈉和橙皮苷的含量為綜合評分指標，多指標成分優(yōu)選最佳工藝條件。按處方中山楂、丹參、陳皮等藥材的配比，準確稱取9份樣品，每份共205 g，按表2中9種工藝條件組合加水煎煮提取，過濾，合并提取液，濃縮成稠浸膏，備用。

表1正交試驗因素水平表L9（34）

水平A：浸泡時間/minB：加水量/倍C：煎煮時間/hD：煎煮次數(shù)/次13061126081.5239010232.2干浸膏收率的測定取樣品稠浸膏，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，60 ℃減壓干燥至恒重后，精密稱定，計算干浸膏收率，結果見表2。

2.3有機酸含量的測定取樣品干浸膏約1 g，精密稱定，加純化水100 mL，超聲20 min，待干浸膏全部溶解后，過濾，精密量取濾液10 mL，加純化水至100 mL，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定，即得，每1 mL氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）相當于6.404 mg枸櫞酸，結果見表2[3]。

2.4丹參素鈉含量測定

2.4.1色譜條件 固定相：Inertsil ODS-SPC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.1%冰醋酸（2：98），二元梯度洗脫，流速：1 mL·min-1，溫度：40 ℃，波長：280 nm，理論板數(shù)按丹參素鈉計算應不低于3000[4～5]。見圖1、2、3。

2.4.2對照品溶液的制備精密稱取的丹參素鈉對照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得對照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備取樣品干浸膏約2 g，精密稱定，置105 ℃干燥至恒重的磨口錐形瓶內，加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲40 min，取出，冷卻至室溫，用50%甲醇補足重量，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4.4線性范圍的考察精密吸取丹參素鈉對照品溶液（濃度為0.332 mg·mL-1）2.5，5，10，15，20 μL，按2.4.1項下色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品量對色譜峰面積進行線性回歸，結果丹參素鈉的回歸方程為Y=106X-649883，r=0.999 5（n=5），線性范圍為0.83 ～ 6.64 μg。

2.5橙皮苷含量測定

2.5.1色譜條件固定相：Inertsill ODS-SP C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-2%的乙酸水溶液（39：61）；檢測波長：283 nm；溫度：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1。在上述色譜條件下，橙皮苷與其他成分得到了很好的分離，理論板數(shù)以橙皮苷計不低于2000[6～8]。見圖4、5、6。

2.5.2對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品8.0 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。

2.5.3供試品溶液的制備 取樣品干浸膏約0.5 g，精密稱定，置105 ℃干燥至恒重的磨口錐形瓶內，加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲40 min，取出，冷卻至室溫，用甲醇補足重量，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.5.4線性關系精密吸取橙皮苷對照品溶液（濃度為0.16 mg·mL-1）2.5、5、10、15、20 μL注入液相色譜儀，測定。以峰面積為縱坐標，橙皮苷的進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=38571X+16309，r=0.9995（n=5）。表明橙皮苷對照品進樣量在0.4～3.2μg之間與峰面積線性關系良好。

2.6方法學考察

2.6.1精密度考查取丹參素納，橙皮苷對照品溶液，分別按照各自液相方法連續(xù)進樣5次，每次10 μL，測定峰面積，RSD分別為1.32%，0.87%，表明儀器精密度較高。

2.6.2穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液分別于0，1，2，4，8 h各進樣1次，每次10 μL，測定峰面積，RSD分別為1.56%，0.94%，表明供試品溶液在8 h內穩(wěn)定。

2.6.3重復性試驗取同一供試品溶液6份，分別按照2.4.1和2.5.1項下色譜條件進行測定，結果RSD為1.06%，1.42%，表明方法重復性良好。

2.6.4加樣回收試驗稱取6份已知含量的供試品溶液，分別精密加入丹參素納，橙皮苷對照品溶液按2.4.3和2.5.3項方法制備供試品溶液，按照2.4.1和2.5.1項下色譜條件進行測定，計算丹參素鈉的平均回收率為97.22%，RSD為1.17%，橙皮苷的平均回收率為98.55%，RSD為0.63%。

2.6結果正交實驗安排與結果見表2，結果方差分析見表3。

3討論

3.1桂黃降脂顆粒主要由山楂、丹參、澤瀉、黨參、陳皮、蒲黃郁金等7味中藥組成。其中山楂、丹參、陳皮所含水溶性成分中的有機酸、丹參素鈉、橙皮苷等成分，在臨床應用過程中發(fā)揮主要的治療作用，從藥效學方面來考慮，需充分提取其有效成分，故本文以多指標研究方法對桂黃降脂顆粒的水提工藝進行探討。

3.2丹參所含丹參素為其專屬性成分，是一種水溶性酚酸，以丹參素鈉的形式存在于天然藥物中，故本文以測定丹參素鈉的含量作為考察指標。

3.3本試驗根據(jù)各藥味的理化性質結合臨床療效，篩選符合工藝的實際的多個指標成分進行實驗，并采用全概率公式評分法結合正交設計優(yōu)化水提工藝，因此較單指標分析額的傳統(tǒng)方法更全面、科學、實用。

3.4本試驗采用多指標綜合評分法優(yōu)選桂黃降脂顆粒的水提取工藝，確定其最佳工藝為，浸泡30 min，加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。同時采用高效液相色譜法測定丹參素鈉和橙皮苷含量，分離效果好，操作簡便，穩(wěn)定性好，測定結果為優(yōu)選桂黃降脂顆粒水提工藝提供參考依據(jù)。為桂黃降脂顆粒進一步開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

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（收稿日期：2013-05-02）