靶向MR-1 基因shRNA 表達(dá)載體的構(gòu)建 及其對(duì)白血病K562 細(xì)胞增殖的抑制作用

趙午莉，任開環(huán)，李保衛(wèi)，邵榮光

肌纖基因調(diào)節(jié)因子（ myofibrillogenesis regulator1，MR-1）基因是由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所王以光教授研究組 2004 年發(fā)現(xiàn)的一種新的人類功能基因，由 GenBank 收錄，收錄號(hào)為 AF417001（NCBI 檢索號(hào)為 NP_001070867）[1]。人 MR-1 基因定位于 2q35，編碼一種 142 個(gè)氨基酸的蛋白，其中 75 ～ 92 個(gè)氨基酸形成一個(gè)疏水性結(jié)構(gòu)域，主要分布在核膜上，少量分布在胞質(zhì)中。以前的研究表明，MR-1 蛋白與細(xì)胞重構(gòu)、信號(hào)傳導(dǎo)及細(xì)胞凋亡等過程相關(guān)，可能參與了細(xì)胞增殖調(diào)控、心肌肥大及腫瘤的發(fā)生[2]。

MR-1 在多種實(shí)體瘤細(xì)胞中高表達(dá)，尤其在肝癌細(xì)胞 HepG2 和 BEL7402 中高表達(dá)，采用 siRNA 技術(shù)將 MR-1 下敲后，細(xì)胞增殖能力減緩，黏附能力以及遷移能力降低[3-4]。除在肝癌等實(shí)體瘤細(xì)胞中高表達(dá)外，我們的前期研究結(jié)果也表明 MR-1 在白血病細(xì)胞中高表達(dá)，尤其在慢性粒細(xì)胞急性發(fā)作 K562 細(xì)胞中的表達(dá)最高，這些結(jié)果表明 MR-1 與白血病的發(fā)生密切相關(guān)，因此探求 MR-1 在白血病發(fā)病中的作用進(jìn)而尋找合適的白血病治療靶點(diǎn)對(duì)于白血病的治療很有必要。本研究目的在于闡明 MR-1 基因?qū)Π籽〖?xì)胞 K562 增殖能力的影響，通過構(gòu)建靶向 MR-1 的質(zhì)粒使 MR-1 在 K562 細(xì)胞中表達(dá)降低，以研究 MR-1 基因?qū)?K562 細(xì)胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 主要材料

1.1.1 細(xì)胞系、質(zhì)粒及菌株 人白血病細(xì)胞 K562、質(zhì)粒 CDNA3.1 由本室保存；pCDshRNA 由本室構(gòu)建保存；感受態(tài)的大腸桿菌 E.coli DH5α 購自北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.2 主要試劑 RPMI 1640 培養(yǎng)基以及 100 bp DNA ladder 購自美國(guó) Gibco 公司；新生胎牛血清購自美國(guó) Hyclone 公司；限制性內(nèi)切酶 BamH I、Hind III 酶及 T4 DNA 連接酶，小量抽提試劑盒和凝膠回收試劑盒購自日本 Takara 公司；脂質(zhì)體 Lipofectamine LTX Reagent 購自美國(guó) Invitrogen 公 司；G418、質(zhì)粒提取試盒 A7640 和 A2150 購自美國(guó)Promega 公司；預(yù)染蛋白marker 為新西蘭 Biolabs 公司產(chǎn)品；兔抗 MR-1 多克隆抗體（針對(duì) MR-1 C 端 15 個(gè)氨基酸合成多肽）由王以光教授惠贈(zèng)。

1.2 方法

1.2.1 shRNA 設(shè)計(jì)與合成 以 MR-1 基因序列為分析序列，采用 Ambion 公司網(wǎng)站（www.ambion. com）設(shè)計(jì)軟件，參考 siRNA 設(shè)計(jì)原則，選擇最佳干擾位點(diǎn)，本研究選取的靶位點(diǎn)是：5' ACCGUGU GAAGCAGAUGAA 3'。針對(duì)靶位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)兩條互補(bǔ)的寡核苷酸序列，寡核苷酸的兩端帶有與 BamH I 和 Hind III 酶切位點(diǎn)互補(bǔ)的黏端序列，能夠直接與具有 BamH I 和 Hind III 酶切位點(diǎn)的載體連接。并通過 BLAST 對(duì)所選擇的靶序列進(jìn)行同源分析，排除 siRNA 非特異性抑制其他基因片段的可能。shRNA 序列莖環(huán)結(jié)構(gòu)為 9 個(gè)與 MR-1 基因不互補(bǔ)的非同源堿基（TTCAAGACG），末端終止子為 TTTTT。設(shè)計(jì)的具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的 shRNA 干擾片段序列結(jié)構(gòu)模式為：BamH I + Sense + Loop + Antisense + 終止信號(hào) + Hind III。MR-1 特異 siRNA 編碼正義鏈為：5' GATCCCGTAACAGUCA ATAGCCTAGGTTCAAGAGACCTAGGCTATTGA CTGTTATTTTTGGAAA 3'；反義鏈為：5' AGCTTTT CCAAAAAATAACAGUCAATAGCCTAGGTCTCT TGAACCTAGGCTATTGACTGTTACGG 3'；實(shí)驗(yàn)中所采用的陰性對(duì)照 mock-shRNA 的正反義鏈序列為：5' GATCCCGTTCTCCGAACGTGTCACGTTTC AAGAGAACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTTG GAAA 3' 和 5' AGCTTTTCCAAAAAATTCTCCG AACGTGTCACGTTCTCTTGAAACGTGACACGT TCGGAGAACGG 3'。標(biāo)方框的序列為相應(yīng)靶向 mRNA 的 DNA 序列，轉(zhuǎn)錄成 RNA 后會(huì)在此處形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的雙鏈 RNA。所形成的發(fā)夾 RNA 則可被 RNA Dicer 酶所識(shí)別切割成雙鏈 siRNA，從而發(fā)揮 RNA 干擾作用，上述序列均為北京賽百盛基因技術(shù)有限公司合成。

1.2.2 shRNA 模板退火 將合成的單鏈寡核苷酸溶解于無核酸酶水中，終濃度為 1 g/L。將互補(bǔ)的兩條寡核苷酸各取 2 μl，加入 46 μl 退火緩沖液，置 PCR 反應(yīng)儀上，設(shè)定反應(yīng)條件為：90 ℃ 3 min， 37 ℃ 1 h，得到退火產(chǎn)物。-20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 MR-1-shRNA 表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定 本研究選擇了目前常用的真核表達(dá)載體 pcDNA3.1 的主要序列作為基本序列，采用限制性內(nèi)切酶將其 CMV 啟動(dòng)子去除，再插入連接用于 shRNA 表達(dá)的 H1 啟動(dòng)子從而建立了穩(wěn)定表達(dá)靶基因 shRNA 的載體 pCD-shRNA。采用 BamH I 和 Hind III 酶切 pCD-shRNA 表達(dá)質(zhì)粒載體，形成線性片段，除去酶切下來的小片段后，使用 Agarose Gel DNA Purification Kit 回收，電泳檢測(cè)估算濃度，稀釋 純化。再用 T4 DNA 連接酶將退火后的 MR-1 shRNA 模板 DNA 雙鏈與線性化的載體連接從而建立穩(wěn)定表達(dá) MR-1-shRNA 的載體，具體構(gòu)建流程見圖 1。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài) DH5α 大腸桿菌，經(jīng)青霉素篩選取陽性克隆擴(kuò)增，利用質(zhì)粒小量提取試劑盒提取純化重組質(zhì)粒，用限制性內(nèi)切酶切割，電泳，紫外燈下觀察片段大小與所要目的片段是否相一致，若一致則可能為陽性克隆，送大連寶生物工程有限公司鑒定。

圖1 pCD-shRNA-MR-1 表達(dá)載體的構(gòu)建流程圖Figure 1 Ligation flow diagram of pCD-shRNA-MR-1 expression vector

1.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 K562 細(xì)胞用無抗生素的 1640 洗滌后，以不含抗生素培養(yǎng)基接種于 24 孔板，10 萬/孔。將 1 μg 質(zhì)粒和 1 μl Lipofectamine LTX Reagent 脂質(zhì)體用無抗生素?zé)o血清的 Opti-MEM 培養(yǎng)液 100 μl 稀釋，質(zhì)粒（μg）∶脂質(zhì)體（μl）為 1∶1，混勻，室溫 10 min，加入 Plus 2 μl 混勻，室溫 25 min。在此過程中，不能劇烈振蕩以免脂質(zhì)體生成氧化物。質(zhì)粒與脂質(zhì)體復(fù)合物于室溫靜置 25 min 后，把 100 μl 質(zhì)粒-脂質(zhì)體復(fù)合物加到細(xì)胞培養(yǎng)板中，轉(zhuǎn)染后每孔溶液終體積為

500 μl。

1.2.5 穩(wěn)定克隆株的篩選 轉(zhuǎn)染 48 h 后，將各組 細(xì)胞分別換成選擇性培養(yǎng)液（含 G418 600 μg/ml）分孔培養(yǎng)，待未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞被 G418 殺死后（約 10 d），將各孔細(xì)胞收集計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為 100 個(gè)/20 ml，將細(xì)胞種到 96 孔板中，200 μl/孔。7 d 后，待克隆出現(xiàn)并增殖到一定數(shù)量后，將克隆細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 6 孔板中擴(kuò)大培養(yǎng)，并采用 western blot 進(jìn)行鑒定，鑒定后收集凍存。

1.2.6 Western blot 取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，提取細(xì)胞總蛋白，蛋白定量后加熱變性。每組取 40 μg 蛋白經(jīng) 10% 的 SDS-PAGE 電泳分離后，采用半干電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)將蛋白轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜上，5% 脫脂奶粉封閉 2 h，加人一抗（1∶1000）4 ℃ 孵育過夜，采用 TBST 洗膜 5 次，加入 HRP 標(biāo)記二抗（1∶5000），室溫下孵育 1 h，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）發(fā)光顯色。以 β-actin 作為內(nèi)參。

1.2.7 腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞用 0.5 ml 含 10% 胎牛血清的 RMIP 1640 組織培養(yǎng)液以 5000 個(gè)/孔接種到 24 孔板中，48 h 后用臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞增殖速度。

2 結(jié)果

2.1 pCD-shRNA-MR-1 表達(dá)載體的鑒定

圖2 pCD-shRNA 載體酶切圖Figure 2 pCD-shRNA digested with BamH I and Hind III

pCD-shRNA 經(jīng) BamH I 和 Hind III 雙酶切后形成 400 bp 大小的無意義小片段和線性空載體，瓊脂糖電泳結(jié)果見圖 2。線性載體經(jīng)回收后與退火的表達(dá) shRNA 的 DNA 雙鏈進(jìn)行連接。經(jīng)青霉素篩選取陽性克隆擴(kuò)增提取質(zhì)粒，采用 EcoRI 和 Hind III 內(nèi)切酶鑒定酶切結(jié)果，如圖 3 所示。新構(gòu)建質(zhì)粒 pCD-shRNA-MR-1 經(jīng)酶切后形成約為 150 bp 大小的片段和載體大片段，表明表達(dá) shRNA 的 DNA 雙鏈可能連入載體 pCD-shRNA 中。對(duì)酶切正確的質(zhì)粒測(cè)序，結(jié)果表明插入序列和預(yù)期的完全一致（圖 4）。綜上所述，我們成功構(gòu)建了 pCD-shRNA-MR-1 表達(dá)載體。

圖3 pCD-shRNA -MR-1 重組質(zhì)粒的酶切圖Figure 3 pCD-shRNA-MR-1 digested with EcoRI and Hind III

2.2 MR-1 穩(wěn)定沉默細(xì)胞系的建立

將 pCD-shRNA-MR-1 以及 pCD-shRNA-mock 轉(zhuǎn)染人白血病細(xì)胞 K562，經(jīng) G418 篩選后單克 隆擴(kuò)大培養(yǎng)，經(jīng) western blot 篩選，得到 mock 組細(xì)胞 shCon 和 2 株 MR-1 穩(wěn)定敲除細(xì)胞系 shMR-1(1) 和 shMR-1(2)，在這兩株細(xì)胞系中 MR-1 均被下敲，尤其是 shMR-1(2) 細(xì)胞，MR-1 敲除更加明顯。結(jié)果如圖 5 所示。

2.3 MR-1 穩(wěn)定下敲抑制了 K562 細(xì)胞的增殖

對(duì)已經(jīng)建立的 MR-1 穩(wěn)定下敲細(xì)胞的增殖活性進(jìn)行檢測(cè)，細(xì)胞于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期鋪于 24 孔板，48 h 后檢測(cè)其增殖活性。結(jié)果如圖 6 所示，MR-1 穩(wěn)定下敲細(xì)胞 shMR-1(1) 和 shMR-1(2) 的增殖速率均降低，增殖速度約為對(duì)照的 50% 和 40%，說明MR-1 對(duì) K562 細(xì)胞增殖有顯著促進(jìn)作用。

2.4 MR-1 穩(wěn)定下敲抑制 Bcr-Abl 融合蛋白以及 Jak2 的活性

圖4 pCD-sh-MR-1 轉(zhuǎn)錄模板區(qū)測(cè)序圖Figure 4 Sequencing of DNA fragment inserted into the shRNA expression vector pCD-sh-MR-1

圖5 MR-1 低表達(dá)穩(wěn)定克隆株的 MR-1 蛋白表達(dá)分析 Figure 5 The analysis of MR-1 proteins of two transfected stable clones shMR-1(1) and shMR-1(2) of MR-1 silencing cells, shCon and K562 cells

圖6 穩(wěn)定下敲 MR-1 促進(jìn) K562 細(xì)胞的增殖活性 Figure 6 Proliferation activity of MR-1 stable silencing cells after seeded 48 h, and cell numbers were determined by trypan blue exclusion staining assay

對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病中對(duì)增殖以及預(yù)后具有重要作用的融合蛋白 Bcr-Abl 及其活性形式進(jìn)行 了檢測(cè)，結(jié)果表明其活性形式即磷酸化蛋白的水平顯著降低，但其他可被 Bcr-Abl 激活并執(zhí)行促增殖作用的蛋白中除了 Jak2 外，其他蛋白的活性形式均未見明顯降低（圖 7），說明 MR-1 對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用主要通過調(diào)節(jié) Bcr-Abl-Jak2 信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。

3 討論

圖7 MR-1 下敲后的細(xì)胞信號(hào)通路變化 Figure 7 The changes of signal pathways after MR-1 silencing in K562 cell

早期研究結(jié)果表明，MR-1 在心肌肥大的細(xì)胞中高表達(dá)。MR-1 過表達(dá)后促進(jìn)了正常心肌細(xì)胞的肥大[5-6]，表明 MR-1 在促使心肌細(xì)胞增殖和肥大 中具有非常重要的作用。近來的研究證實(shí)，MR-1 在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，但在正常組織中低表達(dá)。降低 MR-1 表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的增殖減緩，黏附和遷移能力減弱[4]，表明 MR-1 在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。

我們的前期的研究結(jié)果表明，MR-1 在多株白血病細(xì)胞中高表達(dá)。為了進(jìn)一步探求 MR-1 的高表達(dá)與白血病的關(guān)系，我們需下敲 MR-1 表達(dá)以進(jìn)一步研究 MR-1 下敲后細(xì)胞所出現(xiàn)的生物學(xué)改變，從而明確 MR-1 在白血病致病中的作用。Ren 等[4]采用 siRNA 瞬時(shí)下敲人肝癌細(xì)胞中 MR-1 后成功地發(fā)現(xiàn)了 MR-1 具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移的能力；Lu 等[7]也采用 siRNA 瞬時(shí)下敲 MR-1 后確認(rèn)了 MR-1 對(duì)卵巢癌細(xì)胞具有促進(jìn)增殖的作用；Li 等[5]同樣也是采用 siRNA 瞬時(shí)下敲 MR-1 后進(jìn)一步確認(rèn)了 MR-1 具有促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大和增殖的作用，因此，MR-1-siRNA 在 MR-1 功能研究中發(fā)揮了重要的作用。目前 siRNA 的合成主要通過直接合成 siRNA 或通過質(zhì)?；虿《镜?shRNA 表達(dá)載體在細(xì)胞內(nèi)合成 shRNA 后再經(jīng)不同的酶剪切生成 siRNA 等方法來得到[8-9]。Paddison 等[10]發(fā)現(xiàn)，在采用以 RNA 聚合酶 III 為啟動(dòng)子的表達(dá) shRNA 載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，細(xì)胞能產(chǎn)生長(zhǎng)期穩(wěn)定的基因沉默[11-13]效應(yīng)，這種用質(zhì)粒等表達(dá)載體在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄酶切后生成 siRNA 與上述采用直接合成 siRNA 進(jìn)行 MR-1 功能研究的方式相比，shRNA 穩(wěn)定下敲方式不僅具有經(jīng)濟(jì)和容易操作等優(yōu)點(diǎn)，更重要的是可以通過建立穩(wěn)定表達(dá) siRNA 的細(xì)胞克隆而延長(zhǎng)了 RNA 的干擾效應(yīng)從而能夠觀察長(zhǎng)期下敲一個(gè)基因?qū)τ谡麄€(gè)細(xì)胞的影響，尤其對(duì)于在瞬時(shí) siRNA 干擾中往往得不到理想干擾效果的白血病懸浮細(xì)胞。本研究所構(gòu)建的質(zhì)粒 pCD-shRNA 是通過體內(nèi)轉(zhuǎn)錄的方式生成發(fā)夾狀雙鏈 RNA 分子，然后通過 Dicer 酶生成 siRNA 分子而引起基因沉默。此質(zhì)粒所采用的啟動(dòng)子為 H1 啟動(dòng)子，屬于 RNA 聚合酶 III 啟動(dòng)子，能夠在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中指導(dǎo)合成發(fā)夾狀雙鏈 RNA 分子，誘導(dǎo)基因特異性沉默。

pCD-shRNA 酶切后的線性載體與退火的 shRNA 雙鏈連接后的酶切鑒定，采用了 EcoRI 和 Hind III 內(nèi)切酶進(jìn)行酶切而未采用 BamH I 和 Hind III 進(jìn)行酶切，是因?yàn)?BamH I 和 Hind III 酶切后生成的 shRNA 片段只有 64 bp，電泳不易 觀察到，因此采用 EcoRI 和 Hind III 內(nèi)切酶將 95 bp 的 H1 啟動(dòng)子和 64 bp 的表達(dá) shRNA 的 DNA 雙鏈一起切下來，形成 150 bp 的片段，這樣更容易觀察到連接效果。如果未將表達(dá) shRNA 的DNA 連入而還是原來的無意義片段，則切下來的片段為 500 bp 左右，電泳結(jié)果證實(shí)了我們的連入 是正確的。

將構(gòu)建的表達(dá)載體 pCD-shRNA-MR-1 和 pCD-shRNA-mock 載體轉(zhuǎn)染白血病細(xì)胞K562，在其穩(wěn)定表達(dá)后采用 western blot 檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，MR-1 在轉(zhuǎn)染了 mock 干擾載體的 K562 細(xì)胞中表達(dá)并沒有改變，而在轉(zhuǎn)染了 MR-1 干擾載體的穩(wěn)定細(xì)胞中，MR-1 表達(dá)降低，表明 mock 序列并沒有影響 MR-1 的表達(dá)，我們前期的質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)以及細(xì)胞轉(zhuǎn)染是成功的。對(duì)其增殖能力研究后發(fā)現(xiàn)，在 MR-1 穩(wěn)定下敲的兩株細(xì)胞中，細(xì)胞的增殖均降低，說明 MR-1 是一個(gè)對(duì)細(xì)胞增殖起負(fù)性調(diào)控的基因。在慢性粒細(xì)胞白血病中，約有超過 95% 的白血病患者有明顯的特異染色體改變，比如染色體異位和翻轉(zhuǎn)，且這些變異的基因非常穩(wěn)定，因此采用針對(duì)這些特異癌基因的靶向分子治療成為白血病治療中非常有效的手段。

建立了穩(wěn)定下敲 MR-1 的細(xì)胞株 shMR-1(1) 和 shMR-1(2)，對(duì)其增殖能力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖活性明顯下降；信號(hào)通路檢測(cè)結(jié)果表明，MR-1 穩(wěn)定下敲能明顯抑制對(duì)白血病細(xì)胞增殖發(fā)揮關(guān)鍵作用的 Bcr-Abl 磷酸化形式。研究表明，90% 以上的慢性粒細(xì)胞白血病患者的血細(xì)胞中出現(xiàn) Bcr-Abl 融合蛋白即 Ph1 染色體，t(9； 22)(q34； q11)，其是 9 號(hào)染色體長(zhǎng)臂上 C-abl 原癌基因易位至 22 號(hào)染色體長(zhǎng)臂的斷裂點(diǎn)集中區(qū)（Bcr），形成 Bcr-Abl 融合基因。此基因編碼的蛋白為 P210，P210 具有增強(qiáng)酪氨酸激酶的活性，改變了細(xì)胞多種蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化水平和細(xì)胞微絲機(jī)動(dòng)蛋白的功能，從而擾亂了細(xì)胞內(nèi)正常的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，使細(xì)胞失去了對(duì)周圍環(huán)境的反應(yīng)性，并抑制了凋亡的發(fā)生[14]，其中 AKT、Jak2、Stat3 和 Bim 在執(zhí)行 Bcr-Abl 促增殖的作用中發(fā)揮了重要的作用[14]。而 Jak2 的作用尤為重要，研究結(jié)果表明在抑制了 Jak2 的磷酸化后，細(xì)胞的凋亡明顯增加[14]；在持續(xù)激活 Jak2 后，細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng)[15]，表明 Jak2 在白血病細(xì)胞的增殖中具有重要的作用。本實(shí)驗(yàn)中 MR-1 下敲細(xì)胞中除了 Bcr-Abl 的活性形式明顯降低外，其下游的 Jak2 的磷酸化形式也明顯下降，盡管和增殖以及 Bcr-Abl 有密切關(guān)系的其他蛋白表達(dá)或活性形式?jīng)]有明顯改變，原因可能為 MR-1下敲后還可能激活了其他可以調(diào)控這些蛋白的信號(hào)通路，這些通路與 Bcr-Abl 共同調(diào)控了這些蛋白的活性。因此，我們推測(cè)在 MR-1 下敲后引起細(xì)胞增殖減緩的關(guān)鍵原因是磷酸化的 Bcr-Abl 表達(dá)降 低，并引起 Jak2 活性形式降低，從而使細(xì)胞的增殖減緩。

而本實(shí)驗(yàn)中所構(gòu)建的 MR-1 干擾質(zhì)粒不但持續(xù)穩(wěn)定地抑制了其表達(dá)，且可有效地降低 K562 細(xì)胞的增殖，具有操作簡(jiǎn)單、在體內(nèi)穩(wěn)定和成本低的優(yōu)點(diǎn)，因此對(duì)于白血病的靶向治療具有一定的參考意義。

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