磁珠法在自動化核酸提取工作站中的應(yīng)用

（煙臺市公安局刑偵支隊(duì)，山東 煙臺 264000）

在全國罪犯DNA數(shù)據(jù)庫的建設(shè)過程中，需對大量人員樣本進(jìn)行檢驗(yàn)，增加了檢驗(yàn)人員的工作量。本實(shí)驗(yàn)將磁珠法與自動化核酸提取設(shè)備相結(jié)合以提高檢驗(yàn)過程的準(zhǔn)確性，減少因手工操作引起的失誤，縮短檢驗(yàn)時間，提高每次檢驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性及均一性。

1 材料與方法

人員血樣100份，為本實(shí)驗(yàn)室2009年上半年采集，載體為公安部物證鑒定中心生產(chǎn)的血樣采集卡。采集卡上的血斑面積達(dá)到4 cm2，自然晾干后放入紙制包裝袋室溫保存。使用BSD PP電動手持打樣器（煙臺澳斯邦公司）打取直徑為2.0 mm的血斑濾紙放在96孔板中，封膜保存在4℃冰箱中，以備提取。

將樣本板、加樣尖、AGOWA?DNA提取試劑盒（煙臺澳斯邦公司）、PCR板（保存提純的DNA）、廢液槽按照操作要求放在安利斯達(dá)標(biāo)準(zhǔn)型自動化核酸提取工作站（煙臺澳斯邦公司）指定的位置上。運(yùn)行DNA提取程序，儀器自動進(jìn)行樣品的裂解、DNA吸附、洗滌、洗脫提取。100份血樣經(jīng)磁珠法提取后的DNA模板，使用ModulusTM單管型多功能檢測儀（美國 Turner Biosystems公司），應(yīng)用PicoGreen定量試劑盒（北京原平皓生物技術(shù)有限公司）對DNA進(jìn)行定量，每份樣品檢測3次。

采用Identifiler試劑盒（美國AB公司）在9700型擴(kuò)增儀（美國AB公司）上進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用3130XL遺傳分析儀（美國AB公司）進(jìn)行檢測，得到基因分型結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

經(jīng)過對100份磁珠法提取后的DNA模板定量檢測，樣本 DNA 質(zhì)量濃度在（0.490±0.113）ng/μL。100 份人員血樣采用自動化磁珠提取法，經(jīng)擴(kuò)增及電泳檢測后峰高可達(dá)到1000～3000RFU，成功率達(dá)到100%。

磁珠法提取核酸是通過細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，從細(xì)胞中游離出來的核酸分子被特異地吸附到磁性顆粒表面，而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。本研究中提取的 DNA 模板質(zhì)量濃度在（0.490±0.113）ng/μL，符合目前普遍采用的熒光檢測商品試劑盒對PCR模板濃度的要求。磁珠法不需要離心、不需要加入多種試劑，操作簡單，將其用于自動化核酸提取平臺中，樣品的裂解、DNA吸附、洗滌、洗脫、磁珠回收，都在工作站內(nèi)按照事先編好的程序自動進(jìn)行，65 min內(nèi)可完成96孔板的提取工作。操作簡單快捷，自動化程度高，減少人為因素的影響。

運(yùn)用自動化工作站解決了批量樣本前期提取工作中的繁瑣，同時通過制定血樣采集標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一打樣孔徑，以及控制磁珠用量和洗脫液體積即可實(shí)現(xiàn)對DNA模板濃度的半定量，從而達(dá)到在電泳檢測后所獲得的基因分型均衡，分析數(shù)據(jù)時減少了人工干預(yù)，易于基因分型判斷和DNA數(shù)據(jù)入庫。