不同保存期懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞后質(zhì)量指標(biāo)的差異

陳峰 王麗 孫韻 倪慧婷 周華平

不同保存期懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞后質(zhì)量指標(biāo)的差異

陳峰 王麗 孫韻 倪慧婷 周華平

2012 年頒布的《全血及成分血質(zhì)量要求》（G18469-2012）于7月1日開始實(shí)施，新版對(duì)洗滌紅細(xì)胞制品部分質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求作了調(diào)整，新增了上清液蛋白質(zhì)含量和溶血率兩項(xiàng)指標(biāo)。本文分析了不同保存期懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞該兩項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)情況，報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 （4±2）℃保存的懸浮紅細(xì)胞來源于浙江省血液中心，（4±2）℃冷藏1 000ml四聯(lián)0.9%氯化鈉溶液和ACD-B抗凝血袋（四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司）。

1.2 儀器 SORVALL 12BP大容量離心機(jī)、泰爾茂TSCD-Ⅱ無菌接管機(jī)、紫外分光光度計(jì)。

1.3 方法

1.3.1 分組 用于制備洗滌紅細(xì)胞2U/袋的懸浮紅細(xì)胞按保存期5～9d、10～14d、15～19d、20～24d依次分為A、B、C、D組，每組各10袋。

1.3.2 洗滌方法 將懸浮紅細(xì)胞經(jīng)無菌接管連接上四聯(lián)0.9%氯化鈉溶液，第1次離心2 000r/min，共8min，去除上清液及白膜層，加入200ml左右的0.9%氯化鈉溶液后混勻；第2次離心3 000r/min，共8min，去除上清液并加入200ml左右的0.9%氯化鈉溶液后混勻；第3次離心3 000r/min，共8min，去除上清液并加入0.9%氯化鈉溶液至總?cè)萘考s為（250±25）ml?；靹蛄羧⊙獦哟龣z測(cè)。

1.3.3 蛋白質(zhì)測(cè)定和溶血率檢測(cè) 按衛(wèi)生部頒布的《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》中有關(guān)方法進(jìn)行檢測(cè)[1]。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料用表示，樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

4組不同保存期懸浮紅細(xì)胞制備的洗滌紅細(xì)胞上清液蛋白質(zhì)含量和溶血率指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見表1。A、B組兩項(xiàng)指標(biāo)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，C、D組溶血率符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但上清液蛋白質(zhì)含量符合率分別為60%、40%，呈明顯的下降趨勢(shì)。統(tǒng)計(jì)分析顯示A組與B組的兩項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；A組與C組、D組的兩項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），B組與C組、D組的兩項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

3 討論

懸浮紅細(xì)胞在2～6℃保存條件下會(huì)發(fā)生貯存損傷，隨保存期的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞逐漸由雙面凹變?yōu)闄E圓形，邊緣不整齊或鋸齒狀，并從鋸齒I型向Ⅱ型、Ⅲ型轉(zhuǎn)化，最后變成圓形；而保存25～30d的全血，在電鏡下可見紅細(xì)胞有鋸齒形、棘形，細(xì)胞膜中間出現(xiàn)點(diǎn)狀漏孔。這可能與貯存期氧自由基增多、自由基對(duì)紅細(xì)胞膜的損傷以及紅細(xì)胞保存過程中發(fā)生溶血有關(guān)[2]。洗滌紅細(xì)胞是采用特定的方法將保存期內(nèi)的全血、懸浮紅細(xì)胞用大量等滲溶液洗滌，去除幾乎所有的血漿成分和部分非紅細(xì)胞成分，并將紅細(xì)胞懸浮在氯化鈉注射液或紅細(xì)胞添加液中所制成的紅細(xì)胞成分血，可減少非溶血性發(fā)熱反應(yīng)和HLA同種免疫反應(yīng)的發(fā)生。研究顯示保存15d以后的全血制備洗滌紅細(xì)胞，其形態(tài)發(fā)生異常變化，泡化后的紅細(xì)胞易溶血，紅細(xì)胞壽命縮短，影響洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，保存期＜14d的懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞，上清液蛋白質(zhì)含量和溶血率均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[4]。隨著保存期的延長(zhǎng)，該兩項(xiàng)指標(biāo)的合格率逐漸下降，提示貯存時(shí)間會(huì)影響洗滌紅細(xì)胞最終的質(zhì)量，因此在選擇懸浮紅細(xì)胞應(yīng)注意其保存期。

表1 4組洗滌紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站技術(shù)操作規(guī)程(2012版),78-80.

[2]靳鵬,韓穎.野戰(zhàn)運(yùn)輸中震蕩性溶血的機(jī)理及防護(hù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)輸血雜志,2003,16(5):359.

[3]王愛梅,梁文華,王群,等.不同保存期全血制備洗滌紅細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2004,7(3):176-179.

[4]GB18469-2012.全血及成分血質(zhì)量要求[M].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2012:8.

2012-11-16）

（本文編輯：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心制備供應(yīng)部