中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥機(jī)制研究

李亞楠，孟靜巖

(天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是腫瘤細(xì)胞免受化療藥物攻擊的最重要防御機(jī)制，也是導(dǎo)致化療失敗的主要原因之一。目前認(rèn)為了解腫瘤耐藥機(jī)制，有助于提高臨床腫瘤化療效果。現(xiàn)將對(duì)中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多耐藥機(jī)制的研究，總結(jié)如下。

1 腫瘤多藥耐藥機(jī)制

1.1 P-糖蛋白(P-gp) P-gp的過度表達(dá)使藥物外排能力增強(qiáng)，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度,從而引起MDR[1]。Januchowski等[2]發(fā)現(xiàn)卵巢癌的主要耐藥機(jī)制是耐藥細(xì)胞株P(guān)-gp的過度表達(dá)和拓?fù)涮婵的退幖?xì)胞株BCRP的過度表達(dá)。

1.2 多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP) MRP屬于ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，發(fā)現(xiàn)于小細(xì)胞肺癌H69AR中，該基因主要存在于細(xì)胞膜上，細(xì)胞漿中也有分布[3]。可轉(zhuǎn)運(yùn)親水性分子及有機(jī)陰離子，MRP的轉(zhuǎn)運(yùn)往往要有GSH的存在，能識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)GSH的耦合底物(如長春新堿、阿霉素等)，從而導(dǎo)致耐藥。

1.3 乳腺癌耐藥蛋白(BCRP) BCRP作為ABC轉(zhuǎn)運(yùn)家族成員之一的ABCG2是近年發(fā)現(xiàn)的與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的新的藥物排出泵。該基因是一種含有655個(gè)氨基酸殘基、16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)顯子，相對(duì)分子質(zhì)量為74.6KD的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，特異底物為阿霉素、拓?fù)涮婵档萚4]。

1.4 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶 谷胱苷肽硫轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-tran-sferase,GST)和谷胱甘肽(GSH)與腫瘤耐藥密切相關(guān)，GSH在GSTs的催化下能與某些抗腫瘤藥物形成復(fù)合物，作為MRP1的底物被轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞外，從而產(chǎn)生耐藥。

1.5 蛋白激酶C(PKC) PKC是一類Ca2+、磷脂依賴性的蛋白激酶，在跨膜信號(hào)傳遞過程中起著重要作用。PKC通過催化多種蛋白質(zhì)上Ser/Thr磷酸化，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的代謝、生長、增殖和分化。GST的非特異性結(jié)合可協(xié)助藥物通過P-gp泵出細(xì)胞外[5]。有研究表明GSTP1可被PKC和PKA磷酸化進(jìn)而提高催化性，導(dǎo)致耐藥[6]。

1.6 拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TopoⅡ) TopoⅡ是細(xì)胞內(nèi)的一種重要核酶,是目前抗癌藥物重要的作用靶點(diǎn)，主要與Topo的磷酸化水平提高、Topo酶水平下降及Topo基因位點(diǎn)突變或缺失有關(guān)[7]。研究[8]發(fā)現(xiàn)TopoⅡ含量與活性的下降可能與多藥耐藥有關(guān)。

1.7 DNA的修復(fù) 當(dāng)腫瘤細(xì)胞的DNA受損時(shí)，不僅影響其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄功能，而且還能引起細(xì)胞死亡。DNA是很多抗癌藥物和放療的靶點(diǎn)，如烷化劑和鉑類劑，O6烷基鳥嘌呤DNA烷基轉(zhuǎn)移酶，能修復(fù)烷化劑類抗癌藥物誘導(dǎo)形成的O6烷基鳥嘌呤DNA合成物，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性[9]。

2 中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥

2.1 中藥單體

2.1.1 青蒿素 余和平等[10]通過流式細(xì)胞術(shù)測定青蒿素聯(lián)合ADR對(duì)MCF-7/ARD細(xì)胞P-gp表達(dá)的影響，結(jié)果顯示青蒿素逆轉(zhuǎn)MCF-7/ARD細(xì)胞耐藥的機(jī)制可能是通過影響細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜之間的P-gp交換，降低細(xì)胞膜上P-gp表達(dá)水平，從而提高藥物在細(xì)胞內(nèi)的聚集，增強(qiáng)藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷作用。

2.1.2 大黃素 丘禹洪等[11]用蛋白印跡法檢測細(xì)胞中ERCC1蛋白的表達(dá)，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)大黃素可通過下調(diào)ERCC1的表達(dá)水平而逆轉(zhuǎn)MCF-7/Adr細(xì)胞多藥耐藥，并與大黃素濃度和作用時(shí)間有一定相關(guān)性。

2.1.3 姜黃素 曹仕瓊等[12]研究發(fā)現(xiàn)姜黃素具有逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞多藥耐藥的作用，其機(jī)制可能與下調(diào)多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP1、LRP、P-gp以及上調(diào)凋亡相關(guān)蛋白PDCD5表達(dá)有關(guān)。

2.1.4 人參皂甙 王艷等[13]通過細(xì)胞膜流動(dòng)性實(shí)驗(yàn)檢測人參皂甙(Rg3)對(duì)A549/DDP細(xì)胞膜流動(dòng)性的改變，發(fā)現(xiàn)通過上調(diào)caspas-3的表達(dá)，降低細(xì)胞膜的流動(dòng)性，從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。

2.1.5 漢防己甲素 顧建華等[14]用Wstern-blot法檢測漢防己甲素(Tel)應(yīng)用前后SW1990-GEM細(xì)胞P-gp的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物濃度逆轉(zhuǎn)SW1990-GEM細(xì)胞多藥耐藥性從而增強(qiáng)化療藥物抗腫瘤作用，其逆轉(zhuǎn)機(jī)制與抑制P-gp功能有關(guān)。

2.1.6 川芎嗪 余緒明等[15]研究表明川芎嗪能顯著降低人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/ADM細(xì)胞表面P-gp表達(dá)，增加阿霉素等化療藥物對(duì)BEL-7402/ADM細(xì)胞毒性作用，從而增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。

2.1.7 黃芩苷 王術(shù)華[16]用MII法研究黃芩苷對(duì)人肝癌多藥耐藥細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷可能通過抑制MDR1部分基因產(chǎn)物P-gp、MRP、GSH/GST的表達(dá)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡逆轉(zhuǎn)Bel-7402/ADM的多藥耐藥性。

2.1.8 浙貝母堿 唐曉勇等[17]用細(xì)胞免疫熒光法檢測細(xì)胞中的人肺耐藥蛋白(LRP)，結(jié)果浙貝母堿可逆轉(zhuǎn)肺癌A549/DDP細(xì)胞株多藥耐藥，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)耐藥細(xì)胞凋亡、下調(diào)LRP蛋白表達(dá)有關(guān)。

2.1.9 五味子素 金秀東等[18]用堿性磷酸酶免疫組織化學(xué)法和Westert blot檢測復(fù)方五味子素B對(duì)THC-8307/OXA細(xì)胞GST-n蛋白水平的影響，結(jié)果顯示,復(fù)方五味子素B具有逆轉(zhuǎn)耐奧沙利鉑人結(jié)腸癌細(xì)胞的MDR作用，其機(jī)制與下調(diào)GST-n表達(dá)有關(guān)。

2.2 中藥復(fù)方

2.1.1 腸胃清 鮑文磊等[19]用流式細(xì)胞術(shù)研究腸胃清方對(duì)大腸癌耐藥細(xì)胞株HCT-8/V的逆轉(zhuǎn)作用及抑制P-gp的表達(dá)，結(jié)果表明，經(jīng)腸胃清血清作用后,P-gp表達(dá)顯著降低，可能是逆轉(zhuǎn)人大腸癌多藥耐藥的作用機(jī)制之一。

2.2.2 健脾解毒方 李琪等[20]通過Western Blot檢測健脾解毒方藥物血清對(duì)P-糖蛋白(P-gp)以及c-Jun氨基端激酶(JNK)信號(hào)通路中c-Jun63/73磷酸化水平，探討健脾解毒方(JPJD)介導(dǎo)JNK/SAPK信號(hào)通路對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞多藥耐藥的調(diào)節(jié)機(jī)制。結(jié)果顯示，健脾解毒方通過降低c-Jun的Ser63/73磷酸化，抑制JUN信號(hào)通路的激活，降低P-gp的表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)HCT-8/V細(xì)胞的多藥耐藥。

2.2.3 至真方 張旭等[21]用不同濃度至真方含藥血清作用24 h后，發(fā)現(xiàn)HCT-8/VCR細(xì)胞NF-κB/p65、MDR1 mRNA及NF-κB/p65、P-gp蛋白表達(dá)均降低，呈濃度依賴性，且至真方含藥血清可明顯抑制HCT-8/VCR細(xì)胞生長。

2.2.4 益氣養(yǎng)陰解毒方 嚴(yán)魯萍等[22]用流式細(xì)胞儀檢測移植瘤耐藥細(xì)胞P糖蛋白(P-gp)與bcl-2的表達(dá)情況，結(jié)果表明,益氣養(yǎng)陰解毒方具有部分逆轉(zhuǎn)白血病K562/A02移植瘤多藥耐藥性的作用，其逆轉(zhuǎn)機(jī)制與降低bcl-2表達(dá)、促進(jìn)耐藥細(xì)胞凋亡有關(guān)。

3 結(jié)語

根據(jù)耐藥譜可分為原藥耐藥(PDR)和多藥耐藥(MDR)。PDR只對(duì)誘導(dǎo)的原藥產(chǎn)生耐藥,而對(duì)其他藥物不產(chǎn)生交叉耐藥。而MDR是一種藥物誘發(fā),而同時(shí)對(duì)其他多種結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制完全不同的抗癌藥物產(chǎn)生交叉耐藥。如何通過逆轉(zhuǎn)MDR提高腫瘤治療的臨床療效,已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。

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