高艷秀 陳復(fù)生 郭 珍 楊穎瑩 李潤(rùn)潔
(河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院,鄭州 450001)
花生是世界上主要的優(yōu)質(zhì)食用植物油料品種之一,花生籽仁的主要成分是蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物,其含量分別為24%~36%、50%左右和10%~23%[1]?;ㄉ鞍撞粌H所含氨基酸種類比較齊全,而且所含人體必須氨基酸的比例較高[1]。目前,國(guó)內(nèi)外花生加工普遍基于油脂為中心,因此花生中蛋白的利用率較低。傳統(tǒng)的堿溶酸沉法生產(chǎn)的花生蛋白純度不高,且蛋白質(zhì)萃取率較低[2]。Luisi等[3]首次提出用反膠束萃取蛋白質(zhì)的概念;Leser[4]等利用AOT/異辛烷體系萃取分離大豆和向日葵中的油和蛋白質(zhì)。在國(guó)內(nèi),孫秀平等[5]對(duì) AOT、SDS、CTAB和TritonX-100 4種表面活性劑所形成的反膠束體系萃取花生蛋白進(jìn)行了研究,結(jié)果表明:不同的表面活性劑,所形成的反膠束“水池”大小不同,蛋白質(zhì)萃取率也不同,表面活劑性的濃度對(duì)蛋白萃取率有直接的影響。
本試驗(yàn)研究AOT、SDS、DTAC 3種反膠束體系萃取花生蛋白質(zhì)的最佳后萃工藝條件,通過(guò)色差分析,從宏觀上比較不同花生蛋白產(chǎn)品色澤的差異,進(jìn)一步通過(guò)對(duì)比3種不同花生蛋白質(zhì)的掃描電鏡照片,分析其微觀結(jié)構(gòu)的差異,以期找到最適合萃取花生蛋白的反膠束體系,為工業(yè)化應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。
1.1 材料與試劑
全脂花生粉(過(guò)60目篩):河南帝鑫食品有限公司,將花生仁經(jīng)過(guò)短時(shí)翻炒去紅衣(保證蛋白未變性的條件下),然后粉碎。
二—(2-乙基己基)琥珀酸酯磺酸酯(AOT):上海海曲化工廠;十二烷基硫酸鈉(SDS)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀:天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;十二烷基三甲基氯化銨(DTAC):廈門市先端科技有限公司;卡爾費(fèi)休液:天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心;異辛烷、正辛醇、正庚烷、正己醇:天津市博迪化工有限公司。
1.2 儀器和設(shè)備
GL-20L高速冷凍離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器有限公司;ZSD-2J自動(dòng)水分滴定儀:上海安亭電子儀器廠;pH211酸度計(jì):意大利HANNA;BS210S電子天平:Sartorius,German;THZ-82B氣浴恒溫振蕩器:江蘇省金壇市瑞華儀器廠;移液槍:Eppendof公司;UV-1901紫外分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;KQ-250B超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;90-2恒溫磁力攪拌器:上海亞榮生化儀器廠;LGJ-18冷凍干燥機(jī):北京四環(huán)科學(xué)儀器廠;CR-400色彩色差計(jì):日本柯尼卡美能達(dá);JSM-5610掃描電鏡:日本電子株式會(huì)社。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 原料的主要成分分析
蛋白質(zhì)含量測(cè)定,GB/T 5009.5—2003;油脂含量測(cè)定,GB/T 5009.6—2003;水分含量測(cè)定,GB/T 5009.3—2003。
1.3.2 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
以牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn),紫外分光光度計(jì)測(cè)定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)蛋白液在280 nm處吸光值,以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)吸光值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.3.3 反膠束溶液的配制
AOT反膠束體系的配制:稱取一定量AOT,置于100 mL錐形瓶中,同時(shí)加入有機(jī)溶劑異辛烷,在磁力攪拌器上攪拌至AOT完全溶解,待溶液透明后,加入適量(0.02~0.20 mL/mL)含 0.2 mol/L KCl的KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,搖床振蕩,室溫下靜置12 h,若溶液透明則為反膠束體系(溶液底部有少量水不影響[6]);反之則不是,需要重復(fù)上述步驟重新配制,直至溶液透明[7]。
SDS反膠束體系的配制:稱取一定量SDS,置于100 mL錐形瓶中,同時(shí)加入有機(jī)溶劑異辛烷/正辛醇(體積比4∶1)和適量(0.02~0.20 mL/mL)含 0.25 mol/L KCL的 KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,超聲波振蕩至SDS完全溶解,溶液透明則為反膠束體系;反之則不是,需要重復(fù)上述步驟重新配制,直至溶液透明。
DTAC反膠束體系的配制:稱取一定量DTAC,置于100 mL的錐形瓶中,同時(shí)加入有機(jī)溶劑正庚烷/正己醇(體積比4∶1)和適量(0.02~0.20 mL/mL)含0.05 mol/L KC1的 KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,超聲波振蕩至DTAC完全溶解,溶液透明則為反膠束體系;反之則不是,需要重復(fù)上述步驟重新配制,直至溶液透明。
1.3.4 Karl-fischer法測(cè)定反膠束體系的W0值
利用自動(dòng)水分滴定儀,在滴定瓶中加入適量的無(wú)水甲醇(甲醇液面要超過(guò)電極的鉑片,約20~30 mL),用卡爾費(fèi)休氏溶液將甲醇中的水分滴去,然后再用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確向甲醇溶液中加入10μL蒸餾水,再用卡爾費(fèi)休氏溶液滴至終點(diǎn),以標(biāo)定卡爾費(fèi)休氏溶液的滴定度,重復(fù)標(biāo)定3次以上。用微量注射器吸取待測(cè)反膠束溶液50μL,迅速加入到滴定瓶中,用卡爾費(fèi)休氏溶液滴定至終點(diǎn),讀取反膠束溶液中所含水分的體積[8]。W0值為反膠束中的水分含量的摩爾數(shù)與表面活性劑的摩爾數(shù)之比。
式中:W0為反膠束溶液中增溶水和表面活性劑的摩爾比率。
1.3.5 前萃試驗(yàn)
取按1.3.3節(jié)配制好的反膠束溶液置于錐型瓶中,按照表1中的前萃條件,加入一定量花生粉(精確到0.000 1 g),在一定的超聲溫度、超聲功率條件下,超聲一定時(shí)間,然后以約3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心分離10 min。萃取體系分為2層,上層為萃入蛋白質(zhì)的反膠束層,下層為殘?jiān)?,除去殘?jiān)?,所得上清液用UV-1901紫外分光光度計(jì)在280 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(以萃取前的反膠束溶液作為空白樣),然后與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì),得出蛋白質(zhì)的濃度,計(jì)算出不同條件下的蛋白前萃率[8],蛋白前萃率按式(2)計(jì)算。
3種反膠束體系的前萃最優(yōu)工藝條件見表1。
表1 3種反膠束體系的最優(yōu)前萃工藝條件
1.3.6 后萃試驗(yàn)
取一定體積前萃試驗(yàn)制備的前萃液,加入等體積、一定KCl濃度、pH值的 KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液。在一定的溫度、功率條件下,超聲一定時(shí)間,然后在5 000 r/min條件下離心10 min,用梨形分液漏斗分液,下層水相即為后萃液。用UV-1901紫外分光光度計(jì)在280 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(以緩沖溶液作為空白樣)。然后與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì),得出蛋白質(zhì)的濃度。從而可計(jì)算出蛋白后萃率[8]。蛋白后萃率按式(3)計(jì)算。
1.3.7 花生蛋白樣品的制備
AOT反膠束體系制備花生蛋白:按照1.3.5和1.3.6的方法計(jì)算不同反膠束體系萃取花生蛋白的前萃率和后萃率,然后用1.3.6制得的后萃液,用透析袋在4℃的條件下,透析48 h以上,其間換水6~8次,然后將透析好的蛋白質(zhì)水溶液在冷凍干燥機(jī)上面冷凍干燥得到花生蛋白的產(chǎn)品。
SDS反膠束體系制備花生蛋白的步驟同AOT反膠束體系制備花生蛋白。
DTAC反膠束體系制備花生蛋白的步驟同AOT反膠束體系制備花生蛋白。
1.3.8 不同花生蛋白的色差分析
使用美能達(dá)色彩色差計(jì)CR-400測(cè)定蛋白樣品的色澤,以L*a*b*法表示蛋白的色澤。L*范圍為0~100(從黑到白,表示明度),a*(從綠到紅,-a~+a),b* (從藍(lán)到黃,-b~+b)。3個(gè)方向三維立體分別評(píng)價(jià)。每個(gè)樣品測(cè)定3次,測(cè)定L、a、b值,3次結(jié)果取平均值,并用SAS軟件進(jìn)行顯著性分析。
1.3.9 不同花生蛋白的掃描電鏡顯微結(jié)構(gòu)研究
采用掃描電子顯微鏡(SEM)方法觀察花生分離蛋白的微觀結(jié)構(gòu),并對(duì)不同方法制備的花生分離蛋白進(jìn)行比較。直接取適量樣品,用雙面膠固定在載玻片上,在150Ao下噴金,通過(guò)JSM-5610掃描電鏡在20 KV觀察、照相。
2.1 原料主要成分測(cè)定結(jié)果
原料中主要成分及其含量見表2。
表2 原料主要成分及質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)
2.2 蛋白質(zhì)定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線
繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線是為了得出蛋白質(zhì)的濃度,從而可計(jì)算出不同條件下的蛋白前萃率。蛋白質(zhì)定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。
圖1 蛋白質(zhì)定量分析標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.3 緩沖溶液pH值對(duì)花生蛋白后萃率的影響規(guī)律研究
分別配制 pH為7、7.5、8、8.5、9、9.5的KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,按照1.3.6進(jìn)行操作。其中,AOT反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:超聲時(shí)間為40 min、超聲溫度40℃、超聲功率240 W、KCl濃度1.5 mol/L;SDS反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:超聲時(shí)間40 min、超聲溫度45℃、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L;DTAC反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:超聲時(shí)間20 min、超聲溫度30℃、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L。試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
圖2 緩沖溶液pH值對(duì)花生蛋白后萃率的影響
由圖2可以看出,隨著緩沖溶液pH值的增大,花生蛋白后萃率先逐漸增大,然后減小。AOT反膠束體系的最佳pH值為8.5,SDS和DTAC反膠束體系的最佳pH值都為9,此時(shí)蛋白后萃率達(dá)到最大。后萃取過(guò)程中,水相的pH值高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI),蛋白質(zhì)所帶的電荷與反膠束內(nèi)壁所帶的電荷性質(zhì)相同,由于靜電斥力,使溶入反膠束的蛋白質(zhì)反向萃取出來(lái)。且pH值越高蛋白質(zhì)分子表面所帶電荷的密度越大,斥力越強(qiáng),蛋白質(zhì)從反膠束內(nèi)釋放的速率越快,因此后萃率就越高。但是當(dāng)pH值過(guò)高時(shí),蛋白質(zhì)易變性,會(huì)使蛋白質(zhì)的萃取率降低。
2.4 超聲時(shí)間對(duì)花生蛋白后萃率的影響規(guī)律研究
將超聲時(shí)間分別設(shè)定為 10、20、30、40、50、60 min,按照1.3.6進(jìn)行操作。其中,AOT反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為8.5、超聲溫度40℃、超聲功率240 W、KCl濃度1.5 mol/L;SDS反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲溫度45℃、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L;DTAC反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲溫度30℃、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L。試驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。
圖3 超聲時(shí)間對(duì)花生蛋白后萃率的影響
由圖3可以看出,隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng),蛋白后萃率先逐漸增大,再迅速減小。兩種陰離子表面活性劑AOT和SDS形成的反膠束體系,最佳萃取時(shí)間為40 min,而陽(yáng)離子表面活性劑DTAC形成的反膠束體系,最佳萃取時(shí)間為20 min,此時(shí),蛋白后萃率達(dá)到最大值。很明顯,陽(yáng)離子表面活性劑形成的反膠束最佳萃取時(shí)間低于陰離子的。這可能與表面活性劑本身的結(jié)構(gòu)差異有關(guān)。
2.5 超聲溫度對(duì)花生蛋白后萃率的影響規(guī)律研究
將超聲溫度分別設(shè)定為25、30、35、40、45、50℃,按照1.3.6進(jìn)行操作。其中,AOT反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為8.5、超聲時(shí)間40 min、超聲功率240 W、KCl濃度1.5 mol/L;SDS反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間40 min、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L;DTAC反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間20 min、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L。試驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。
圖4 超聲溫度對(duì)花生蛋白后萃率的影響
由圖4可以看出,隨著萃取溫度的升高,蛋白后萃率先逐漸增大,達(dá)到某個(gè)特定溫度后,蛋白后萃率達(dá)到最大值,再繼續(xù)升高溫度,后萃率有所減小。其原因是溫度升高時(shí),分子運(yùn)動(dòng)速率加快,反膠束與水相之間的分子運(yùn)動(dòng)也加快,傳質(zhì)推動(dòng)力增大,加快了蛋白質(zhì)的萃取,因此萃取率升高。當(dāng)溫度繼續(xù)升高,萃取率變化不大,此時(shí)萃取已經(jīng)達(dá)到平衡,另外,溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致蛋白變性。
2.6 超聲功率對(duì)花生蛋白后萃率的影響
將超聲功率分別設(shè)定為 150、180、210、240、270、300 W,按照1.3.6進(jìn)行操作。其中,AOT反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為8.5、超聲時(shí)間40 min、超聲溫度40℃、KCl濃度1.5 mol/L;SDS反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間40 min、超聲溫度45℃、KCl濃度1.5 mol/L;DTAC反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間20 min、超聲溫度30℃、KCl濃度1.5 mol/L。試驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。
圖5 超聲功率對(duì)花生蛋白后萃率的影響
由圖5可以看出,隨著超聲功率的增大,蛋白后萃率先逐漸增大然后減小。原因是在后萃過(guò)程中存在較大的界面阻力,使用超聲波可以起到強(qiáng)化作用,超聲波功率越大,空化作用和機(jī)械作用越強(qiáng)烈,分子擴(kuò)散速度也就越大[9],同時(shí)空化所產(chǎn)生的微射流會(huì)促進(jìn)蛋白質(zhì)向反膠束的表面擴(kuò)散,降低了蛋白從反膠束中向水相中擴(kuò)散的阻力,因此可以促進(jìn)蛋白質(zhì)的浸出和傳質(zhì),提高蛋白質(zhì)的萃取率。但是,當(dāng)超聲功率足夠大時(shí),增加了全脂花生粉中油脂的運(yùn)動(dòng),從而阻礙了蛋白質(zhì)的滲出。
2.7 KCl濃度對(duì)花生蛋白后萃率的影響
分別配制 KCl濃度為 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mol/L的 KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,按照1.3.6進(jìn)行操作。其中,AOT反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為8.5、超聲時(shí)間40 min、超聲溫度40℃、超聲功率240 W;SDS反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間40 min、超聲溫度45℃、超聲功率270 W;DTAC反膠束體系的后萃工藝條件設(shè)定為:緩沖溶液pH值為9、超聲時(shí)間20 min、超聲溫度30℃、超聲功率270 W。試驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。
圖6 KCl濃度對(duì)花生蛋白后萃率的影響
由圖6可以看出,當(dāng)KCl濃度逐漸增大的過(guò)程中,蛋白后萃率迅速增大,隨著KCl濃度繼續(xù)增大,蛋白后萃率逐漸減小,并趨于平穩(wěn)。3種體系的最佳離子濃度均為1.5mol/L。這是由于隨著離子濃度的增大,反膠束內(nèi)表面的雙電層變薄,靜電引力也就減弱;另一方面,減小了表面活性劑極性頭之間的排斥作用,導(dǎo)致反膠束變小[9]。這兩方面的效應(yīng)都會(huì)使蛋白質(zhì)在反膠束中的溶解性下降,更容易從反膠束中反萃出來(lái),從而后萃率得到提高。但是KCl離子濃度越大,反膠束的W0值則會(huì)越小,使得反膠束極性核所包含的蛋白質(zhì)隨著減少的水分而被帶出,故后萃率開始減??;另外,鹽濃度過(guò)高時(shí),對(duì)蛋白質(zhì)會(huì)產(chǎn)生鹽析作用,也會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)后萃率降低[10]。
2.8 驗(yàn)證試驗(yàn)
根據(jù)以上的研究可得到3種不同反膠束體系的后萃工藝條件,根據(jù)單因素試驗(yàn)研究,并根據(jù)實(shí)際情況做適當(dāng)調(diào)整,做重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)。得到了3種反膠束體系萃取花生蛋白的最佳后萃工藝條件及后萃率,如表3所示。
表3 3種反膠束體系萃取花生蛋白的最佳后萃工藝條件
2.9 不同反膠束體系制備的花生蛋白樣品色差分析結(jié)果
如表4所示,不同花生蛋白的色差分析中,AOT反膠束體系制備的花生蛋白L值最大,a值最小,可見PPI2的色澤是最好的。不同反膠束體系制備的花生蛋白與堿溶酸沉法制備的相比,其L、a、b值都存在顯著性差異。通過(guò)表4中的數(shù)據(jù)可以看出,AOT反膠束制備的花生蛋白的色澤最好,而堿溶酸沉法制備的花生蛋白的色澤最差。
表4 不同花生蛋白的色差分析結(jié)果
2.10 不同反膠束體系制備的花生蛋白的掃描電鏡照片(SEM)結(jié)果
不同反膠束體系制備的花生蛋白樣品的掃描電境照片如圖7所示。通過(guò)掃描電鏡照片可以看出,4種花生蛋白從微觀結(jié)構(gòu)上有些差異。堿溶酸沉法提取的花生蛋白主要呈片狀,也有球狀結(jié)構(gòu),而不同反膠束體系、不同萃取工藝所制備的花生蛋白結(jié)構(gòu)均不相同,這可能與反膠束溶液的pH值,W0,離子強(qiáng)度以及表面活性劑所帶的電荷種類有關(guān)。如在反膠束溶液的pH值條件下,反膠束與蛋白質(zhì)之間產(chǎn)生親水、疏水作用,而使部分蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,導(dǎo)致蛋白質(zhì)粒度減?。籛0的大小也影響這反膠束萃取蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的大小,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量大,蛋白質(zhì)的體積就大,在傳遞增溶過(guò)程中產(chǎn)生的障礙也越大,因此反膠束所萃取的蛋白質(zhì)粒度也較小。總之,研究說(shuō)明了反膠束特殊的微環(huán)境條件下,表面活性劑所帶的電荷與蛋白質(zhì)分子所帶的電荷產(chǎn)生靜電作用,蛋白質(zhì)分子所帶的電荷產(chǎn)生靜電作用,離子強(qiáng)度與蛋白質(zhì)之間產(chǎn)生靜電作用,表面活性劑在有機(jī)相中所形成的反膠束數(shù)目及大小等都會(huì)使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,如有序結(jié)構(gòu)α-螺旋,β-折疊及β-轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)的減少,無(wú)序結(jié)構(gòu)的增加,以及氨基酸的分解等變化,從而導(dǎo)致反膠束相制備的蛋白粒度較堿溶酸沉法制備的蛋白小,從而溶解度就較好。進(jìn)一步說(shuō)明了反膠束制備的花生蛋白較堿溶酸沉制備的好。
圖7 不同PPI樣品的掃描電鏡顯微照片
3.1 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn),得到了3種反膠束體系后萃花生蛋白的最佳工藝條件。AOT反膠束體系后萃取花生蛋白的最佳工藝條件為:緩沖溶液pH值8.5、萃取時(shí)間40 min、萃取溫度40℃、超聲功率240 W、KCl濃度1.5 mol/L,此時(shí)蛋白后萃率為83.17%;SDS反膠束體系后萃取花生蛋白的最佳工藝條件為:緩沖溶液pH值9、萃取時(shí)間40 min、萃取溫度45℃、超聲功率270 W、KCl濃度1.5 mol/L,此時(shí)蛋白后萃率為82.62%;DTAC反膠束體系后萃取花生蛋白的最佳工藝條件為:緩沖溶液pH值9、萃取時(shí)間20 min、萃取溫度30℃、超聲功率270 W、KCl濃度 1.5 mol/L,此時(shí)蛋白后萃率為73.18%。結(jié)果表明,AOT反膠束體系后萃取花生蛋白的萃取率最大。
3.2 通過(guò)對(duì)不同反膠束體系制備的花生蛋白的色差進(jìn)行分析,并與堿溶酸沉法制備的花生蛋白相比較,發(fā)現(xiàn)不同花生蛋白樣品的L、a、b值都存在顯著性差異。得出AOT反膠束體系制備的花生蛋白色澤是最好的,而堿溶酸沉法制備的花生蛋白的色澤較差。
3.3 掃描電鏡照片的結(jié)果顯示,堿溶酸沉法制備的花生蛋白的微觀結(jié)構(gòu)主要呈片狀,部分呈球狀,而反膠束體系制備的花生蛋白,粒度都明顯減小。
3.4 最適合萃取花生蛋白的反膠束體系是AOT反膠束體系。
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