急性腦梗死患者血清脂聯(lián)素、過氧化物酶體增殖物活化受體γ、氧化型低密度脂蛋白及單核細(xì)胞CD36、CD54表達(dá)的關(guān)系

周禮圓，藍(lán) 嬌，李燕華，龐 剛，李呂力，林慧瓊

（1.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心，廣西南寧 530021；3.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科，廣西南寧 530021）

急性腦梗死患者血清脂聯(lián)素、過氧化物酶體增殖物活化受體γ、氧化型低密度脂蛋白及單核細(xì)胞
CD36、CD54表達(dá)的關(guān)系

周禮圓1，藍(lán) 嬌2，李燕華1，龐 剛3，李呂力1，林慧瓊1

（1.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣西南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院科研實(shí)驗(yàn)中心，廣西南寧 530021；3.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)外科，廣西南寧 530021）

目的 探討急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）患者血清脂聯(lián)素、過氧化物酶體增殖物活化受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ）、氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）及單核細(xì)胞CD36、CD54表達(dá)的特點(diǎn)，并分析其相關(guān)性。方法選擇ACI患者（ACI組）31例、健康體檢者（對照組）27例，檢測血脂，ELISA方法測定血清脂聯(lián)素、PPARγ、ox-LDL濃度，流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周靜脈血單核細(xì)胞CD36、CD54表達(dá)。結(jié)果ACI組血清脂聯(lián)素、PPARγ、HDL-C低于對照組，ox-LDL、CD36、CD54、TG、LDL-C高于對照組（均P＜0.01）。相關(guān)分析顯示，血清脂聯(lián)素水平與PPARγ、ox-LDL呈正相關(guān)（r=0.939、0.934，P＜0.01），PPARγ與ox-LDL呈正相關(guān)（r=0.945，P＜0.01），CD36與CD54呈正相關(guān)（r=0.760，P＜0.01）。結(jié)論ACI患者血清脂聯(lián)素、PPARγ降低，ox-LDL、CD36、CD54升高，血脂異常，其相互網(wǎng)絡(luò)調(diào)控是相互促進(jìn)、相互制約的，在ACI發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

腦梗塞；脂聯(lián)素；過氧化物酶體增殖物激活受體

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是腦梗死的主要病因之一，脂聯(lián)素是與AS發(fā)生關(guān)系最為密切的因子之一，是AS發(fā)生的獨(dú)立危險因素。過氧化物酶體增殖物活化受體γ（peroxisome proliferatoractivated receptor gamma，PPARγ）和AS之間的聯(lián)系是多方面的，可能是通過對內(nèi)皮功能的保護(hù)、對脂肪細(xì)胞分化和脂質(zhì)代謝的影響、抑制平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移、對炎性趨化因子的作用以及穩(wěn)定斑塊的功能來發(fā)揮作用的。CD36是識別、吞噬氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL），使巨噬細(xì)胞泡沫化，AS形成的主要清道夫受體。為探討急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）患者血清脂聯(lián)素、PPARγ、ox-LDL及單核細(xì)胞CD36、CD54表達(dá)特點(diǎn)及其相關(guān)性，我們進(jìn)行了相關(guān)研究?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2010年6月—2011年6月在我院神經(jīng)內(nèi)科住院的ACI患者31例，男性18例，女性13例，年齡43～75歲，平均（61.90±9.72）歲?；颊呔鶠槭状伟l(fā)病，在14d內(nèi)就診，均符合1995年全國第四屆腦血管病會議制定的各類腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，并經(jīng)頭顱CT或MRI檢查證實(shí)。合并糖尿病10例，高血壓病21例，冠心病5例。另選27例健康體檢者作為對照組，男性20例，女性7例，年齡40～60歲，平均（50.59±5.90）歲，無糖尿病、高血壓病、冠心病病史。2組均排除急性或慢性感染、腫瘤、腎衰竭等其他慢性疾病患者以及由一些少見原因如藥物、代謝疾病、感染、血管病變、煙霧病、靜脈血栓等引起的腦梗死。

1.2 檢測方法：抽取受試者清晨空腹靜脈血5mL，分離血清保存于-80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測脂聯(lián)素、PPARγ、ox-LDL，試劑盒由美國R＆D公司提供；全自動生化分析儀檢測血脂。

1.3 血液標(biāo)本制備：ACI組患者入院后次日取晨空腹血2mL（肝素抗凝），取100μL全血分別加入CD36、CD54抗體20μL室溫避光孵育15min，加入1×溶血素1mL（美國BD公司提供），室溫避光孵育8min，離心5min（300g/min），棄上清，以磷酸緩沖液2mL漂洗，同速離心5min，棄去上清后加入300μL磷酸緩沖液上機(jī)檢測。免疫試劑異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的單克隆抗體CD36-FITC、CD54-FITC及陰性對照羊抗鼠IgG-FITC均由美國BD公司提供。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測：使用美國BD公司生產(chǎn)的FACSCzlibur型流式細(xì)胞儀，上機(jī)后收集1×104個細(xì)胞，以前向角及側(cè)向角圈出單核細(xì)胞，按CD36+和CD54+細(xì)胞占單核細(xì)胞比例表示外周血CD36和CD54的表達(dá)水平。用美國BD公司軟件Cell Quest Plot分析點(diǎn)圖。

2 結(jié)果

2.1 2組檢測指標(biāo)比較：ACI組脂聯(lián)素、PPARγ均低于對照組，ox-LDL及單核細(xì)胞CD36、CD54表達(dá)均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。ACI組高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）低于對照組，三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），2組總膽固醇（total cholesterol，TC）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1，2。

表1 2組檢測指標(biāo)比較Table 1 Com parison of indexes between ACI group and control group

表2 2組血脂檢測指標(biāo)比較Table 2 Comparison of lipids between ACI group and control group（ˉx±s，mmol/L）

2.2 相關(guān)性分析：ACI患者的血清脂聯(lián)素水平與PPARγ、ox-LDL呈正相關(guān)（r=0.939、0.934，P＜0.01），PPARγ與ox-LDL呈正相關(guān)（r=0.945，P＜0.01），CD36與CD54呈正相關(guān)（r=0.760，P＜0.01）。

3 討論

腦梗死是一種多因素疾病，AS是腦梗死的重要病理基礎(chǔ)。脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞釋放的最豐富的脂肪因子，對細(xì)胞外刺激和代謝改變作出反應(yīng)。脂聯(lián)素通過抑制生長因子介導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、抑制黏附分子在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)、減少泡沫細(xì)胞的形成等多種途徑而達(dá)到抗AS的作用。有研究［2］發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者血清脂聯(lián)素水平明顯下降。本研究亦提示腦梗死患者血清脂聯(lián)素水平明顯低于健康對照者，三酰甘油水平明顯高于健康對照者，低水平的脂聯(lián)素導(dǎo)致三酰甘油水平升高，減弱了增加脂肪酸β氧化、抑制血管平滑肌細(xì)胞和外周單核細(xì)胞的增殖及抑制巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)變作用，從而促進(jìn)了腦AS［3］。

過氧化物酶體增殖物激活受體屬Ⅱ型核受體超家族成員，是配體活化的轉(zhuǎn)錄因子之一。PPARγ作為一種重要的核受體，在血管平滑肌細(xì)胞、巨噬泡沫細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上均有PPARγ的表達(dá)。PPARγ的生物學(xué)功能復(fù)雜多樣，PPARγ對AS的抑制作用主要表現(xiàn)為抑制炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)細(xì)胞增生和遷移。PPARγ配體或激動劑可減少炎癥因子白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)，抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子、核因子（nuclear factor-κB，NF-κB）和轉(zhuǎn)錄活化因子的活性；此外，PPARγ能夠明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子1、CD54、血管細(xì)胞黏附分子1表達(dá)，這有助于抑制慢性炎癥，調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，防止AS的形成［4-5］。腦缺血再灌注損傷動物模型的腦組織中存在PPARγmRNA及蛋白表達(dá)下調(diào)，并存在動態(tài)變化，PPARγ與腦缺血炎性損傷機(jī)制有關(guān)，而PPARγ激活劑應(yīng)用后，可以減少缺血再灌注腦組織梗死體積及中性粒細(xì)胞的浸潤［6］。本研究提示腦梗死患者血清PPARγ水平明顯低于健康對照者，CD54表達(dá)明顯高于健康對照者，兩者共同參與了AS的形成及ACI的炎性損害。

CD36抗原是B族清道夫受體，CD36生物學(xué)作用涉及AS、炎癥和脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)等多個方面。CD36對ox-LDL具有特異性，介導(dǎo)約40％的ox-LDL脂質(zhì)入胞。有研究［7］發(fā)現(xiàn)，CD36與ox-LDL結(jié)合后被內(nèi)吞加工，通過促分裂素原活化蛋白激酶p38依賴途徑激活PPARγ。PPARγ作為參與脂代謝的轉(zhuǎn)錄因子及CD36受體啟動因子參與調(diào)節(jié)CD36mRNA轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)單核細(xì)胞分化和攝取ox-LDL。ox-LDL通過CD36和PKC依賴途徑激活巨噬細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB。觸發(fā)炎癥因子如TNF-α/β等的分泌。在這些細(xì)胞因子的刺激下，CD54表達(dá)明顯增加，增加AS斑塊局部炎癥反應(yīng)，促進(jìn)AS形成［8］。本研究中ACI組患者血清ox-LDL含量、單核細(xì)胞CD36和CD54表達(dá)均高于健康對照者，與文獻(xiàn)報道一致。提示ACI患者AS斑塊形成及炎癥反應(yīng)活躍。

脂聯(lián)素、PPARγ、ox-LDL與CD36、CD54存在相互網(wǎng)絡(luò)調(diào)控作用，脂聯(lián)素既可抑制成熟巨噬細(xì)胞的功能，又能減少巨噬細(xì)胞前體細(xì)胞的生成，從而減少泡沫細(xì)胞形成。脂聯(lián)素抑制單核細(xì)胞與血管內(nèi)皮的黏附，下調(diào)巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36表達(dá)，抑制巨噬細(xì)胞對ox-LDL的攝取，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的裂解，從而抑制血管平滑肌細(xì)胞和外周單核細(xì)胞的增殖及巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)變，抑制AS形成［3，9］。PPARγ激動劑能夠增加人類、ob/ob小鼠及培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞的脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)及分泌，通過抑制TNF-α的效應(yīng)，作用于脂聯(lián)素的啟動子，從而促進(jìn)脂聯(lián)素的表達(dá)［10］。與此同時，PPARγ在血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)，可通過抑制血管壁炎癥及抑制平滑肌細(xì)胞增殖、遷移，從而抑制AS形成。另一方面，CD36與ox-LDL結(jié)合后通過促分裂素原活化蛋白激酶p38依賴途徑激活在單核/巨噬細(xì)胞PPARγ的表達(dá)，通過上調(diào)CD36的表達(dá)，增加細(xì)胞膽固醇的流入，促進(jìn)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的形成。

在AS的炎癥反應(yīng)中，脂聯(lián)素、PPARγ通過影響細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB信號通路，抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管細(xì)胞黏附分子1、E-選擇素及CD54等在主動脈內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)，抑制內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)而影響AS的形成［11-12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素與PPARγ、ox-LDL三者之間呈顯著正相關(guān)，CD36與CD54呈顯著正相關(guān)。提示腦梗死急性期AS斑塊不穩(wěn)定及炎癥活躍狀態(tài)，AS斑塊病變壞死、活動釋放較多ox-LDL，誘導(dǎo)單核細(xì)胞CD36表達(dá)及觸發(fā)炎癥因子表達(dá)，增加CD54持續(xù)增高表達(dá)水平，加速AS泡沫細(xì)胞形成及炎癥反應(yīng)，而腦梗死急性期低水平的脂聯(lián)素和PPARγ減弱其抗AS作用，脂聯(lián)素、PPARγ、ox-LDL與CD36、CD54在ACI患者AS形成過程中是相互促進(jìn)、相互制約的，其相互網(wǎng)絡(luò)調(diào)控途徑有待進(jìn)一步研究。

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（本文編輯：劉斯靜）

RELATIONSHIP OF SERUM ADIPONECTIN，PEROXISOME PROLIFERATOR-ACTIVATED RECEPTOR GAMMA，OXIDIZED LOW DENSITY LIPOPROTEIN AND CD36，CD54 EXPRESSION IN MONOCYTESOF PATIENTSW ITH ACUTE CEREBRAL INFARCTION

ZHOU Liyuan1，LAN Jiao2，LIYanhua1，PANG Gang3，LILvli1，LIN Huiqiong1
（1.Department of Neurology，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China；2.Research Center of Medical Science，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China；3.Department of Neurosurgery，the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Guangxi，Nanning 530021，China）

Objective To observe the serum level of adiponectin，peroxisome proliferatoractivated receptor gamma（PPARγ），oxidized low density lipoprotein（ox-LDL）and CD36，CD54 expression in monocytes of patients with acute cerebral infarction（ACI），and analyze their correlation. M ethods Lipids were measured in 31 patients with ACI（ACI group）and 27 healthy subjects（control group），serum concentrations of adiponectin，PPAR-γand ox-LDLweremeasured by using ELISA，CD36，CD54 expression in monocytes were measured by using flow cytometry，and the corelation analysis was done between them.Results Compared to the control group，serum concentration of adiponectin and PPARγ，HDL-C decreased，while ox-LDL，CD36，CD54，TG，LDL-C increased in ACI group（all P＜0.01）.Correlation analysis showed that serum concentration of adiponectin was positively corelated with PPARγand ox-LDL（r=0.939，0.934，0.945，all P＜0.01），and CD36 was positively corelated with CD54（r=0.760，P＜0.01）.Conclusion In patientswith ACI，the serum levels of adiponectin，PPARγ were decreased，CD36，CD54 expression inmonocyteswere increased，dyslipidemia，adiponectin，PPARγ，ox-LDL，CD36，and CD54 expression ofmonocyte may influence mutually and play an important role in the occurrence and development of ACI.

brain infarction；adiponectin；peroxisome proliferator-activated receptors

R743.33

A

1007-3205（2013）11-1368-04

2013-04-16；

2013-06-17

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題（Z2009164）

周禮圓（1973-），女，壯族，廣西南寧人，廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事神經(jīng)內(nèi)科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.11.003