HPLC法測定腎衰寧丸中鹽酸小檗堿的含量

姜啟娟 劉 暢 韓 宇

（1吉林省通化市食品藥品檢驗所，通化134000；2吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林132000）

HPLC法測定腎衰寧丸中鹽酸小檗堿的含量

姜啟娟1劉 暢1韓 宇2

（1吉林省通化市食品藥品檢驗所，通化134000；2吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林132000）

腎衰寧丸；鹽酸小檗堿；HPLC

腎衰寧丸是由太子參、黃連、丹參、半夏（制）、陳皮、茯苓、大黃等十味中藥組成。黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch．三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptisteeta Wall.Paeonia lactiflora Pall.的干燥根莖。主要成份為鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀等。用于濕熱痞滿，嘔吐吞酸等癥。與本品的功能主治有密切關(guān)系，是本制劑的主藥之一。因此，以黃連中鹽酸小檗堿作為含量測定指標來控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量具有合理性。我們采用反相高效液相色譜法測定黃連中鹽酸小檗堿的含量，方法簡便，易于操作，結(jié)果準確，重現(xiàn)性良好。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；AB265-S型電子天平，BSA224S型電子天平。

鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-200208，產(chǎn)地：中國藥品生物制品檢驗所，規(guī)格：供含量測定用），乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜柱依利特C18（4.6×200mm，5μm）；流動相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）；流速：0.8ml／min；檢測波長：349nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品及樣品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液制成每1ml含50μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約0.7g，精密稱定，精密加鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液50ml，稱定重量，加熱回流1小時，取出，放冷，再稱定重量，用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml置10ml量瓶中，用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備取不含黃連的陰性對照樣品照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.3 干擾試驗照上述色譜條件，吸取上述三種溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，進行測定。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照樣品溶液在此保留時間無干擾，證明此方法可行。

2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品溶液2、6、10、14、18μl測定，以進樣量和峰面積積分值進行回歸，得到回歸方程為Y＝4342997.059x-5331，r＝0.9999。結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.051～0.459μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗分別精密吸取同一供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，鹽酸小檗堿面積平均值為110425，其RSD＝0.15%。

2.6 穩(wěn)定性試驗分別精密吸取同一供試品溶液10μl，于0，2，4，8，12h進樣，測定鹽酸小檗堿平均峰面積值為1129755，其RSD＝0.20%。

2.7 重復(fù)性試驗取同一批樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備、測定，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為18.1mg／g，其RSD＝0.36%。

2.8 回收率試驗精密稱取已知含量的供試品（含量為18.16mg／g）6份，分別精密加入對照品溶液（0.451mg／ml）20ml，依法測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

如表1所示，測得鹽酸小檗堿的平均回收率為99.98%，RSD＝0.14%

2.9 樣品含量測定取3批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果（n＝4）

3 討論

3.1 流動相的選擇我們對乙腈-0.033mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）、乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）進行優(yōu)化試驗，結(jié)果，以乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）為流動相分離效果較好，保留時間適度，因此，確定其為本法的流動相。

3.2 提取方法的考察我們采用了鹽酸-甲醇（1∶100）混合溶液在60℃水浴加熱超聲提取。用鹽酸-甲醇（1∶100）混合溶液加熱回流提??；用鹽酸-乙醇70%（1∶100）混合溶液加熱回流提??；經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合溶液加熱回流提取方法測定含量高，分離效果好。因此我們采用正文所述的供試品溶液的制備方法。

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.19.103

1672-2779（2013）-19-0148-01

蘇 玲

2013-08-29）