蚤休醇提物對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響

宋 強金 曼肖 陽楊劉英姿劉 丹林 歡李旭偉胥正敏

1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機能實驗中心，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000

蚤休醇提物對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響

宋 強1，2金 曼1，2肖 陽1，2楊劉英姿1，2劉 丹1，2林 歡1，2李旭偉1胥正敏3

1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機能實驗中心，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000

目的：研究蚤休醇提物對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)阻滯作用。方法：觀察蚤休醇提物對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅和傳導(dǎo)速度的影響。結(jié)果：0.0075g/ml，0.0175g/ml，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/ml 5種濃度的蚤休醇提物均使坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅變小 （P＜0.01），傳導(dǎo)速度變慢 （P＜0.01）并最終使坐骨神經(jīng)動作電位消失。結(jié)論：蚤休醇提物能阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)。

蚤休醇提物；離體蟾蜍坐骨神經(jīng)；復(fù)合動作電位；阻滯

蚤休（manyleaf paridis rhizome）出自明·陳嘉謨《本草蒙筌》。別名七葉一枝花、重樓。為百合科植物華重樓或七葉一枝花的根莖。華重樓分布華南、華東、西南及陜西、山西、甘肅、河南、湖北、西藏等地。七葉一枝花分布四川、貴州、云南、西藏等地?？?，寒，有小毒。入心、肝經(jīng)。清熱解毒，消腫，定驚，止咳［1］。相關(guān)研究表明，蚤休在熱板法［2］實驗中能顯著提高小鼠的痛閾值；在醋酸扭體法［3］實驗中能有效減少扭體次數(shù)。說明蚤休具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛、活血作用［4］?？赡芘c抑制一些內(nèi)源性炎癥介質(zhì)，阻滯神經(jīng)傳導(dǎo)有關(guān)，表現(xiàn)為鎮(zhèn)痛效應(yīng)［5］。本研究從電生理學(xué)的角度，觀察不同濃度蚤休醇提液對蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動作電位的影響，以進一步探討蚤休醇提液鎮(zhèn)痛作用的可能機制。

1 材料和方法

1.1 實驗試劑 任氏液（NaC1 6.5 g，KC1 0.14 g，CaCl20.12 g；NaHCO30.20 g；NaH2PO40.01g加蒸餾水至1000 m1，所用試劑均為化學(xué)純，購自成都科龍化工試劑廠）；蚤休（購自四川南充市百姓大藥房）；95%乙醇溶液；85%乙醇溶液；75%乙醇溶液 （以上3種乙醇溶液均購自北京貞玉民生藥業(yè)有限公司）。

1.2 實驗儀器 超聲波提取器（上海比郎儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海禾青儀器設(shè)備有限公司）；恒溫水浴箱（天津艾維歐科技發(fā)展有限公司）；BL－420F生物機能實驗系統(tǒng) （四川成都泰盟科技有限公司）；神經(jīng)屏蔽盒 （四川成都泰盟科技有限公司）；電子天平Model：ES6000－1（沈陽龍騰電子有限公司生產(chǎn)）。

1.3 蚤休醇提物提取 取100g蚤休藥材浸泡于400ml95%乙醇溶液中24小時，將其放入超聲波提取器中，設(shè)置溫度為25℃，提取40分鐘，過濾，將濾液保存于4℃的冰箱中，濾渣再次浸泡，重復(fù)上述步驟，分別將濾渣浸泡于85%、75%的乙醇溶液中，得初提液1167ml。將初提液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸餾30分鐘，得液體113ml，將所得液體置于37℃水浴箱中，水浴5小時，烘干，得固體8.7g。用任氏液分別配置0.0075g/ml，0.0175 g/ml，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/m l的蚤休溶液。

1.4 實驗動物分組 中華大蟾蜍24只，雌雄兼用，體重80～100g，由川北醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，隨機分為6組（任氏液組，0.0075g/ml，0.0175 g/m l，0.0250g/ml，0.0500g/ml，0.1000g/m l蚤休溶液組），每組6只。

1.5 坐骨神經(jīng)標本制備 將蟾蜍進行稱重，搗毀腦和脊髓，分離坐骨神經(jīng)3～5cm，盡量將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈，神經(jīng)干脊柱端和足端用棉線結(jié)扎，置于任氏液中浸泡孵育10分鐘以穩(wěn)定其興奮性。

1.6 動作電位引導(dǎo)并記錄 將孵育后的神經(jīng)干慢慢沿培養(yǎng)皿壁取出，瀝干其水分，搭到神經(jīng)屏蔽盒的電極上，測定動作電位振幅和傳導(dǎo)速度。再將神經(jīng)干取出屏蔽盒，放入不同濃度四數(shù)九里香溶液中浸泡2分鐘，沿管壁輕輕取出，瀝干其水分并防止刮傷神經(jīng)。將該神經(jīng)干依照之前的位置搭在電極上，在位于刺激電極與引導(dǎo)電極的神經(jīng)干上分別放置浸濕藥液（0.0075g/m l，0.0175 g/ml，0.0250g/ml，

0.0500g/ml，0.1000g/ml蚤休溶液）的小棉條，用BL－420F生物機能實驗系統(tǒng)每隔2分鐘檢測動作電位相關(guān)值。動作電位速度測定需要測量兩個電極之間距離。單個動作電位及傳遞速度測定儀器設(shè)置值：方式，單刺激；延時，5.00ms；波寬，0.05ms；強度，1.00V；頻率，10KHz；采樣率，1.25ms/div。

1.7 數(shù)據(jù)處理 記錄各組給藥前與浸泡后坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅與傳導(dǎo)速度，實驗數(shù)據(jù)用±s描述，采用配對t檢驗進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果

2.1 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響隨著藥物作用時間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的振幅逐漸變小，具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.01）。藥物濃度越大，動作電位振幅的變化越大 （見表1）。

表1 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響

2.2 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的影響隨著藥物作用時間的延長，5種濃度的藥物均使得坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的傳導(dǎo)速度逐漸變小，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。藥物濃度越大，動作電位傳導(dǎo)速度的變化越大，神經(jīng)傳導(dǎo)速度的改變與神經(jīng)動作電位振幅的改變基本同步 （見表2）。

表2 蚤休溶液對蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的影響

3 討論

本實驗通過離體實驗方法，觀察了蚤休醇提物對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位傳導(dǎo)的影響。實驗結(jié)果表明蚤休醇提物對坐骨神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)具有明顯阻滯的作用，提示阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)是蚤休的鎮(zhèn)痛作用可能的機制之一。

有關(guān)蚤休的化學(xué)成分，張宏武等［6］從蚤休醇提物中分離并鑒定出七葉一枝花根含蚤休甙、薯蕷皂甙，薯蕷皂甙元的3－葡萄糖甙、3－鼠李糖葡萄糖甙、3－鼠李糖阿拉伯糖葡萄糖甙和3－四糖甙，娠二烯醇酮－3－查考茄三糖甙等多種皂甙。蚤休的活性成分極性較大，含量較小，化學(xué)成分研究進展較為困難，對于蚤休的鎮(zhèn)痛藥理機制及現(xiàn)代中藥藥學(xué)的開發(fā)探索，還可做進一步的深入研究。

［1］李經(jīng)緯，區(qū)永欣，余瀛鰲，等.簡明中醫(yī)辭典 ［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2001：15－16.

［2］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學(xué)，第3版 ［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：883－913.

［3］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：484－484.

［4］柳燕，竇昌貴.蚤休合劑鎮(zhèn)痛抗炎活血作用實驗研究 ［J］.時珍國醫(yī)國藥，2005，16（8）：736－737.

［5］Abbott FV，F(xiàn)ranklin KB.Noncompetitive antagonism of morphine analgesia by diazepam in the formalin test［J］.Pharmacol Biochem Behav，1986，24（2）：319－321.

［6］張宏武，鄒鐘梅，徐麗珍，等.蚤休脂溶性化學(xué)成分的研究 ［J］.西北藥學(xué)雜志.2004，19（4）：161－162.

Effects of manyleaf paridis rhizome on Com pound Action Potential of Sciatic Nerve of Toad

Objective：To study the blockade effect of manyleaf paridis rhizome on action potential of sciatic nerve of toad.Methods：The influence of manyleaf paridis rhizome on amplitude and conduction velocity of compound action potential of sciatic nerve of toad was observed in vitro.Results：The decoction of manyleaf paridis rhizome in five different concentrations（0.0045g/ml，0.009 g/ml，0.0175 g/ml，0.035g/ml，0.069g/m l）could decrease the amplitude（P＜0.01）and slow down the conduction velocity（P＜0.01）.The action potential of sciatic nerve vanished at last.Conclusion：manyleaf paridis rhizome can block the conduction of action potential of nerve.

manyleaf paridis rhizome；Sciatic nerve of toad in vitro；Compound action potential；Blockade

R282.74

A

1007－8517（2013）09－0026－02

2013.03.28）

川北醫(yī)學(xué)院2012年大學(xué)生科研項目。

宋強，川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系2010級本科學(xué)生，e－mail：875373158＠qq.com。

李旭偉（1980－），漢，碩士研究生，四川富順人，講師，研究方向為心血管生理與神經(jīng)電生理學(xué)。E－mail：lxwhi＠qq.com