外源激素對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)中菌絲生長(zhǎng)的影響

王謙，劉敏，李淑萍，蘇巖

（河北大學(xué) 生物技術(shù)研究中心，河北 保定 071002）

毛頭鬼傘 （Coprinuscomatus）俗稱(chēng)雞腿菇，又名雞腿蘑、刺蘑菇［1－2］，屬真菌門(mén)，擔(dān)子菌亞門(mén)，層菌綱，傘菌目，鬼傘科，鬼傘屬［3］.毛頭鬼傘子實(shí)體蛋白含量高，營(yíng)養(yǎng)豐富，而且其菌絲體活性成分具有抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力和降血脂等多種功效［4－5］.近年來(lái)，大量研究表明，礦質(zhì)元素和外源激素能夠一定程度地影響食用菌菌絲體的生長(zhǎng).李林輝［6］的研究結(jié)果表明，補(bǔ)充適量的礦質(zhì)元素能夠促進(jìn)雞腿菇菌絲生長(zhǎng).外源激素因其可以提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和抗逆性早已被廣泛地應(yīng)用于農(nóng)業(yè).有關(guān)外源激素對(duì)食用菌菌絲體生長(zhǎng)影響的研究本課題組已經(jīng)開(kāi)展了很多年，研究結(jié)果表明：外源激素對(duì)食用菌如金福菇、大白樁菇等菌絲體的生長(zhǎng)具有較為明顯的促進(jìn)作用［7－8］.但是外源激素應(yīng)用到食用菌液體培養(yǎng)上的研究報(bào)道還很少.近年來(lái)，對(duì)于毛頭鬼傘液體培養(yǎng)方面的研究越來(lái)越多，液體菌種已被廣泛用于毛頭鬼傘的栽培中，為此，本課題組對(duì)外源激素對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響進(jìn)行了研究，探討有利于提高毛頭鬼傘液體菌種培養(yǎng)效率的幾種激素的適宜添加質(zhì)量濃度，以提高其生物量.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

毛頭鬼傘菌種為河北大學(xué)食藥用真菌研究所保藏菌種.

1.1.2 主要試劑

吲哚乙酸（IAA），赤霉素（GA），三十烷醇，2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D），萘乙酸（NAA）.

1.1.3 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1 000mL.

一級(jí)液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯150g、葡萄糖20g、麩皮5g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、酵母粉2.5g、維生素B11.5mg、水1 000mL.

二級(jí)液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯150g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、酵母粉2.5g、水1 000mL，加不同種類(lèi)不同質(zhì)量濃度的外源激素.

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法

將毛頭鬼傘斜面菌種接種到裝液量為100mL的250mL三角瓶中，25℃，160r／min恒溫振蕩培養(yǎng)120h，制得一級(jí)液體菌種，備用.

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

將IAA，GA，三十烷醇3種激素分別設(shè)置0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mg／L的質(zhì)量濃度梯度，將2，4－D，NAA 2種激素分別設(shè)置0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg／L的質(zhì)量濃度梯度，添加到二級(jí)液體培養(yǎng)基中，然后以10%的接種量將一級(jí)液體菌種接入100mL的二級(jí)搖瓶培養(yǎng)基中（三角瓶規(guī)格為250mL），25℃，160r／min振蕩培養(yǎng)120h.培養(yǎng)結(jié)束后，直接測(cè)定菌絲體鮮質(zhì)量.以菌絲體鮮質(zhì)量為主要依據(jù)篩選出適于毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的激素種類(lèi)及其質(zhì)量濃度［7－8］.菌絲體鮮質(zhì)量測(cè)定按照本研究所以往方法進(jìn)行，可以實(shí)時(shí)檢測(cè)發(fā)酵動(dòng)態(tài)，是較干質(zhì)量測(cè)定更為實(shí)用的快速測(cè)定方法［9］.

2 結(jié)果與分析

不同質(zhì)量濃度的IAA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見(jiàn)表1和圖1.結(jié)果表明：IAA的加入對(duì)毛頭鬼傘菌絲的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為35.96g，菌球數(shù)量也最高.菌絲體鮮質(zhì)量提高了15.85%，因此IAA使用時(shí)適宜的質(zhì)量濃度為0.5mg／L.

不同質(zhì)量濃度的GA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見(jiàn)表2和圖2.結(jié)果表明：GA對(duì)毛頭鬼傘菌絲的生長(zhǎng)促進(jìn)作用很明顯，當(dāng)質(zhì)量濃度為1.5mg／L時(shí)，不論菌絲體鮮質(zhì)量還是菌球數(shù)量都達(dá)到最高，菌絲體鮮質(zhì)量為42.59g，較不添加時(shí)提高了37.21%，且與其他質(zhì)量濃度存在極顯著性差異，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來(lái)越小，因此GA使用時(shí)適宜的質(zhì)量濃度為1.5mg／L.

表1 不同質(zhì)量濃度IAA對(duì)毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.1 Multiple comparison of different mass concentration IAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖1 不同質(zhì)量濃度的IAA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.1 Effect of different mass concentration IAA on Coprinuscomatus in liquid culture

圖2 不同質(zhì)量濃度的GA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.2 Effect of different mass concentration GA on Coprinuscomatus in liquid culture

表2 不同質(zhì)量濃度GA對(duì)毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.2 Multiple comparison of different mass concentration GA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同質(zhì)量濃度的三十烷醇對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見(jiàn)表3和圖3.結(jié)果表明：當(dāng)三十烷醇質(zhì)量濃度為0.5mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為39.35g，較不添加時(shí)提高了26.77%，且與其他質(zhì)量濃度存在顯著性差異，菌球數(shù)量也最高，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來(lái)越小.因此，三十烷醇使用時(shí)適宜的質(zhì)量濃度為0.5mg／L.

不同質(zhì)量濃度的2，4－D對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見(jiàn)表4和圖4.結(jié)果表明：2，4－D的質(zhì)量濃度在0～0.8mg／L時(shí)，隨著質(zhì)量濃度的提高菌絲生長(zhǎng)加快，質(zhì)量濃度為0.8mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，菌球數(shù)量也高，但與質(zhì)量濃度為0.6mg／L時(shí)差異不顯著，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來(lái)越小，并且當(dāng)超過(guò)1mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量反而比添加激素前低.當(dāng)2，4－D質(zhì)量濃度為0.6mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量提高了7.73%.因此2，4－D使用時(shí)適宜的質(zhì)量濃度為0.6mg／L.

表3 不同質(zhì)量濃度三十烷醇對(duì)毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.3 Multiple comparison of different mass concentration triacontanol on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖3 不同質(zhì)量濃度的三十烷醇對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.3 Effect of different mass concentration triacontanol on Coprinuscomatus in liquid culture

圖4 不同質(zhì)量濃度的2，4－D對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.4 Effect of different mass concentration 2，4－D on Coprinuscomatus in liquid culture

表4 不同質(zhì)量濃度2，4－D對(duì)毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.4 Multiple comparison of different mass concentration 2，4－D on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同質(zhì)量濃度的NAA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見(jiàn)表5和圖5.結(jié)果表明：隨著NAA質(zhì)量濃度的增大，對(duì)毛頭鬼傘菌絲的生長(zhǎng)促進(jìn)作用明顯，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.4mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為41.92g，較不添加時(shí)提高了35.05%，且與其他質(zhì)量濃度存在顯著性差異，菌球數(shù)量也最高，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來(lái)越小.因此，NAA使用時(shí)適宜的質(zhì)量濃度為0.4mg／L.

表5 不同質(zhì)量濃度NAA對(duì)毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.5 Multiple comparison of different mass concentration NAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖5 不同質(zhì)量濃度的NAA對(duì)毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.5 Effect of different mass concentration NAA on Coprinuscomatus in liquid culture

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明：在液體培養(yǎng)基中分別添加IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA，其對(duì)毛頭鬼傘菌絲體的生長(zhǎng)有不同程度的影響.當(dāng)液體培養(yǎng)基中IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA 的質(zhì)量濃度分別為0.5，1.5，0.5，0.6，0.4mg／L時(shí)，菌絲體生物量最大.在5種激素中，當(dāng)GA的質(zhì)量濃度為1.5mg／L時(shí)，菌絲體鮮質(zhì)量最大，增幅最大，為37.21%，其次是NAA、三十烷醇.

［1］吳巧風(fēng)，劉敬娟，陳京，等.雞腿菇營(yíng)養(yǎng)成分的分析［J］.食品工業(yè)科技，2005，26（8）：161－163.

WU Qiaofeng，LIU Jingjuan，CHEN Jing，et al.Analysis of nutrients ofCoprinuscomaus（Mull.ExFr.）Gray［J］.Science and Technology of Food Industry，2005，26（8）：161－163.

［2］姚毓婧，張勁松，楊仁智，等.雞腿菇子實(shí)體多糖分離純化工藝及結(jié)構(gòu)研究［J］.微生物學(xué)通報(bào) ，2007，34（6）：1071－1076.

YAO Yujing，ZHANG Jinsong，YANG Renzhi，et al.Optimum isolation and structural analysis of polysaccharide from the fruiting bodies ofCoprinuscomatus［J］.Microbiology，2007，34（6）：1071－1076.

［3］卯曉嵐.中國(guó)大型真菌［M］.鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000：226.

［4］余杰，崔鵬舉，邢立剛，等.富硒雞腿菇菌粉對(duì)糖尿病小鼠免疫功能及抗氧化能力的影響［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2009，31（2）：198－200.

YU Jie，CUI Pengju，XING Ligang，et al.Effects of selenium－enriched mycelia powder fromCoprinuscomatuson immunity and antioxidation function in diabetic mice［J］.Acta Nutrimenta Sinica，2009，31（2），198－200.

［5］刑福國(guó)，王海霞，韓春超，等.雞腿蘑多糖免疫功能的初步研究［J］.食品科學(xué)，2003，24（6）：139－141.

XING Fuguo，WANG Haixia，HAN Chunchao，et al.Primary study on immunity of the polysaccharides ofCoprinuscoma－tus［J］.Food Science，2003，24（6）：139－141.

［6］李林輝.礦質(zhì)元素對(duì)毛頭鬼傘菌絲體生長(zhǎng)的影響［J］.菌物研究，2007，5（3）：161－164.

LI Linhui.Effect of mineral nutrients on the mycelia growth ofCoprinuscomatus［J］.Journal of Fungal Research，2007，5（3）：161－164.

［7］王謙，楊棟慧，尹紅芳，等.激素類(lèi)物質(zhì)對(duì)大白樁菇菌絲生長(zhǎng)的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，28（5）：533－535.

WANG Qian，YANG Donghui，YIN Hongfang，et al.Effects of several different hormones on the mycelia growth ofLeucopaxillusgiganteus［J］.Journal of Hebei University：Natural Science Edition，2008，28（5）：533－535.

［8］王謙，劉敏，徐嘯晨，等.外源激素對(duì)金福菇菌絲營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，32（3）：286－290.

WANG Qian，LIU Min，XU Xiaochen，et al.Effect of different exogenous hormones on the mycelia growth ofTricholoma lobayenseHeim［J］.Journal of Hebei University：Natural Science Edition，2012，32（3）：286－290.

［9］王謙，閆蕾蕾，王永利，等.金頂側(cè)耳的深層液體培養(yǎng)及相關(guān)檢測(cè)［J］.菌物系統(tǒng)，2002，21（1）：102－106.

WANG Qian，YAN Leilei，WANG Yongli，et al.Submerged culture and related nutrient solution determination ofpleurotuscitrinopileatus［J］.Mycosystema，2002，21（1）：102－106.