腐竹中烏洛托品的高效氣相色譜檢測(cè)技術(shù)

王庭欣，王光沖

（河北大學(xué)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督學(xué)院，河北保定 071000）

腐竹營(yíng)養(yǎng)豐富并且口感清爽，是百姓桌上的家常菜.但是近期總有關(guān)于“不腐的腐竹”的相關(guān)報(bào)道，廠家在腐竹中非法添加了違禁添加劑烏洛托品等化工原料，其作用和雕白粉有些相似［1］，這將嚴(yán)重影響群眾的健康.在國(guó)外有專門(mén)的檢測(cè)食品接觸材料的烏洛托品含量的標(biāo)準(zhǔn)［2］，中國(guó)也明確禁止烏洛托品添加到食品當(dāng)中或在加工食品過(guò)程中使用.現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有一些分析烏洛托品的方法［3－8］，但腐竹中的烏洛托品的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法仍在探討研究當(dāng)中.本文依據(jù)高效氣相色譜檢測(cè)技術(shù)具有高靈敏度、高選擇性、高效能、準(zhǔn)確性好、所需試樣少、應(yīng)用范圍廣、快速方便等優(yōu)點(diǎn)，選擇使用高效氣相色譜法來(lái)檢測(cè)腐竹中烏洛托品的含量，通過(guò)本課題研究為腐竹中烏洛托品的含量檢測(cè)提供判別方法，同時(shí)為腐竹生產(chǎn)和流通環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制提供切實(shí)有效的可操作性判定依據(jù).

1 材料與方法

1.1 儀器

高效氣相色譜儀，GC－2014型，日本島津公司，配有氫火焰離子化探測(cè)器（FID）；數(shù)控微波萃取儀，南京貝帝實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；數(shù)控超聲波清洗儀，KQ－500DE型，昆山市超聲儀器有限公司；電子天平，AR1140型，梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；樣品粉碎機(jī)，ZN系列微型高速粉碎機(jī)，中南制藥機(jī)械廠；恒溫水浴鍋，上海比朗儀器有限公司；高速離心機(jī)，中國(guó)亞榮有限公司.

1.2 樣品與試劑

樣品：腐竹，河南省內(nèi)黃縣萬(wàn)利豆業(yè)有限公司提供.

試劑：烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)品為質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于99%的優(yōu)級(jí)純；三氯甲烷為色譜純；無(wú)水乙醇為分析純；石油醚為分析純.所有試劑均由保定市博愛(ài)欣試劑公司提供.

1.3 色譜條件

色譜柱：HP－5MS型毛細(xì)管柱30m×0.32mm，0.32μm；柱溫條件為200℃；載氣：氮?dú)?，體積分?jǐn)?shù)大于99.995%，流速為1.0mL／min；進(jìn)樣方式：分流（分流體積比30∶1），進(jìn)樣量為1.0μL；汽化室：溫度控制為200℃；

柱溫程序：初始溫度80℃，保持2min，以10℃／min的速率升溫至185℃，保持10min.

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

配制烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)品0.250 0g，以三氯甲烷定容至250mL的容量瓶中，配制成1.000 0g／L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液.

配制烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)溶液：吸取1.000 0g／L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5mL于50mL容量瓶中用三氯甲烷定容，配制成100mg／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別吸取100mg／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液1，2，3，4，5mL于5個(gè)10mL容量瓶中用三氯甲烷定容，配制成10，20，30，40，50，100mg／L的烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)系列溶液.

1.5 樣品的前處理

將腐竹樣品置于粉碎機(jī)中充分粉碎，然后用電子天平準(zhǔn)確稱取5g樣品，將稱取的樣品倒入具塞錐形瓶中.用量筒量取30mL石油醚倒入加有腐竹樣品的具塞錐形瓶，將塞子塞上放入數(shù)控超聲波清洗機(jī)中超聲30min，然后靜止15min后棄去上層清液，再重復(fù)超聲1次棄去上層清液.將殘?jiān)?0℃恒溫水浴鍋中蒸去石油醚，蒸干后在錐形瓶中準(zhǔn)確加入60mL三氯甲烷，將其轉(zhuǎn)入數(shù)控微波萃取儀中震蕩30min后過(guò)濾，取其濾液30mL于150mL雞心瓶中濃縮近干，然后用三氯甲烷將其移入5mL離心管中并定容，搖勻之后，放入離心機(jī)以4 000r／min的轉(zhuǎn)速離心10min，取其上清液進(jìn)樣.

1.6 回收率和精密度的測(cè)定

選取腐竹樣品2份，其中一份加入烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)溶液，另一份作為對(duì)照.按1.5的方法將腐竹樣品前處理后，在高效氣相色譜儀上測(cè)烏洛托品的濃度，再通過(guò)公式計(jì)算該實(shí)驗(yàn)的回收率和變異系數(shù).

回收率＝（加標(biāo)樣品質(zhì)量濃度－樣品質(zhì)量濃度）／加入標(biāo)品的換算質(zhì)量濃度×100%；變異系數(shù)RSD＝標(biāo)準(zhǔn)差／樣品質(zhì)量濃度均值×100%.

2 結(jié)果

2.1 溶劑的選擇和保留時(shí)間的測(cè)定

由烏洛托品的性質(zhì)可知，烏洛托品極易溶于水、無(wú)水乙醇、三氯甲烷等溶劑.但哪種溶劑效果較好，是需要從實(shí)驗(yàn)中鑒別的，因此本實(shí)驗(yàn)先對(duì)烏洛托品的溶劑進(jìn)行了選擇，以水、無(wú)水乙醇、三氯甲烷分別做溶劑，所得色譜見(jiàn)圖1～3.

圖1 水為溶劑的烏洛托品色譜Fig.1 Labeling chromatogram of methenamine in water

圖2 無(wú)水乙醇為溶劑的烏洛托品色譜Fig.2 Labeling chromatogram of methenamine in anhydrous ethanol

圖3 三氯甲烷為溶劑的烏洛托品色譜Fig.3 Labeling chromatogram of methenamine in chloroform

從實(shí)驗(yàn)所得色譜圖的峰型及實(shí)際實(shí)驗(yàn)的檢出限角度考慮，可以看出以三氯甲烷為溶劑的色譜效果較好，因此該實(shí)驗(yàn)采用三氯甲烷為溶劑.且從以三氯甲烷為溶劑的色譜圖（圖3）中可以看出烏洛托品的保留時(shí)間為8.920min.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在1.3所述色譜條件下進(jìn)樣分析，以X軸為濃度，Y軸為峰面積做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到烏洛托品的標(biāo)準(zhǔn)范圍和相關(guān)系數(shù)等指標(biāo).所得數(shù)據(jù)如表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4.

表1 烏洛托品的標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)Tab.1 Methenamine experimental data of the standard curve

圖4 烏洛托品的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Standard curve of methenamine

對(duì)表1中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理得烏洛托品標(biāo)液的線性方程、測(cè)試范圍及相關(guān)系數(shù)（表2）.

表2 烏洛托品標(biāo)液的線性范圍和相關(guān)系數(shù)Tab.2 Linear ranges and correlation coefficient of the standard solution of methenamine

如表2所示，烏洛托品在其測(cè)試范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.997 7，標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見(jiàn)圖5.

圖5 烏洛托品標(biāo)準(zhǔn)色譜Fig.5 Labeling chromatogram of the standard methenamine

2.3 回收率

選用腐竹樣品為空白樣品，加入一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液，充分混勻，按照本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，所得腐竹樣品色譜圖如圖6，加標(biāo)樣品色譜圖如圖7所示，測(cè)得烏洛托品的回收率如表3所示.

圖6 腐竹樣品色譜Fig.6 Labeling chromatogram of the methenamine in samples of Yuba

圖7 加標(biāo)腐竹樣品色譜Fig.7 Labeling chromatogram of the samples of Yuba add standard substance

表3 測(cè)得的腐竹樣品回收率數(shù)據(jù)Tab.3 Recovery rate of methenamine in samples of Yuba

由表3中腐竹樣品所測(cè)得的回收率數(shù)據(jù)，可知此樣品前處理及測(cè)定方法是準(zhǔn)確可行的，依據(jù)此種方法可以對(duì)腐竹中的烏洛托品含量進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析.

2.4 精密度

取腐竹樣品按照本實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其烏洛托品含量進(jìn)行測(cè)定，所測(cè)得數(shù)據(jù)如表4所示.

表4 測(cè)得的腐竹樣品變異度Tab.4 RSD of methenamine in Yuba samples

由表4腐竹樣品所測(cè)得變異度（RSD%）數(shù)據(jù)可知該方法測(cè)得腐竹樣品中烏洛托品的含量的變異度為5.00%，其變異度小于10%.說(shuō)明該方法精密度較好，符合實(shí)驗(yàn)的分析要求.

3 討論

本文對(duì)腐竹中烏洛托品的含量檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了研究.該文所示方法的檢出限以3倍信噪比計(jì)算為1mg／L.在其線性范圍內(nèi)相關(guān)性可達(dá)到0.997 7，回收率為104.02%，變異系數(shù)為5.00%.上述指標(biāo)均滿足實(shí)驗(yàn)分析要求，因此可認(rèn)為本文所述方法是準(zhǔn)確可靠的，可應(yīng)用于腐竹中烏洛托品的含量檢測(cè).

鑒于對(duì)腐竹等食品中烏洛托品的檢測(cè)并無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，許多學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了探討研究，有關(guān)于腐竹中烏洛托品的檢測(cè)論文發(fā)表［9－10］，其樣品前處理中同時(shí)用到了三氯甲烷和無(wú)水乙醇做烏洛托品的溶劑.本文通過(guò)對(duì)樣品的前處理的多次研究，對(duì)烏洛托品的萃取劑和溶劑做了選擇.本文曾先后用水、無(wú)水乙醇、三氯甲烷分別做萃取劑及溶劑來(lái)萃取檢測(cè)腐竹中的烏洛托品，以保留時(shí)間和峰面積等為指標(biāo)，得出的結(jié)果是用三氯甲烷為萃取劑及溶劑效果最佳.同時(shí)與其他所述檢測(cè)方法相比，該種方法實(shí)驗(yàn)中只用了三氯甲烷一種溶劑同時(shí)作為萃取劑和溶劑，從而有效避免了因更換溶劑所帶來(lái)的不必要誤差.本方法具有方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、成本低的優(yōu)點(diǎn)，可以滿足對(duì)腐竹中烏洛托品含量的準(zhǔn)確檢測(cè)，適合于中國(guó)質(zhì)監(jiān)部門(mén)及食品監(jiān)管的相關(guān)部門(mén)對(duì)腐竹中是否添加違禁添加劑烏洛托品的鑒別工作，同時(shí)也為腐竹生產(chǎn)與流通中的質(zhì)量控制提供了比較準(zhǔn)確可靠的判定依據(jù).

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