頭穴透刺對運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠下丘腦色氨酸羥化酶、單胺氧化酶A的影響

張 淼，李虹霖，徐 飛

（1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150001；2．黑龍江省醫(yī)院康復(fù)科，黑龍江哈爾濱150036）

頭穴透刺對運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠下丘腦色氨酸羥化酶、單胺氧化酶A的影響

張 淼1，李虹霖1，徐 飛2

（1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150001；2．黑龍江省醫(yī)院康復(fù)科，黑龍江哈爾濱150036）

目的：探討頭穴透刺對運(yùn)動(dòng)性疲勞大鼠下丘腦色氨酸羥化酶（TPH）、單胺氧化酶A（MAO－A）表達(dá)的影響。方法：取8周齡健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，除12只作空白對照組外，其他大鼠造疲勞力竭模型，隨機(jī)分為模型組、頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組，每組12只。共進(jìn)行游泳大鼠模型訓(xùn)練4周后，觀察各組大鼠力竭游泳后力竭時(shí)間；采用Western blot方法比較各組大鼠下丘腦組織TPH、MAO－A表達(dá)。結(jié)果：與模型組相比，針刺治療組小鼠的力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著延長（P＜0.05）。傳統(tǒng)針刺組和頭穴透刺組均能顯著降低TPHmRNA的表達(dá)，增強(qiáng)MAO－AmRNA的表達(dá)，與模型組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；頭穴透刺組在降低TPHmRNA表達(dá)，增強(qiáng)MAO－AmRNA表達(dá)方面優(yōu)于傳統(tǒng)針刺組，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：頭穴透刺能降低大鼠下丘腦組織中的TPHmRNA表達(dá)，增強(qiáng)MAO－AmRNA表達(dá)。

運(yùn)動(dòng)性疲勞；頭穴；透刺；TPH；MAO－A；大鼠

運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體各種復(fù)雜內(nèi)在變化的一種綜合外在表現(xiàn)，是機(jī)體在長時(shí)間的運(yùn)動(dòng)后，其生理現(xiàn)象在運(yùn)動(dòng)過程中表現(xiàn)為機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力下降，使其運(yùn)動(dòng)能力不能持續(xù)在特定的運(yùn)動(dòng)水平和/或預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。對運(yùn)動(dòng)性疲勞防治的研究是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)關(guān)注的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。大量研究［1－2］顯示，中醫(yī)藥對運(yùn)動(dòng)性疲勞有良好的防治前景。本組研究采用針刺預(yù)處理方法，觀察頭穴透刺對運(yùn)動(dòng)性疲勞的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取8周齡健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±10）g。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，大鼠質(zhì)量合格證書編號：SCXK（黑）2008004。

1.2 試劑和儀器 試劑主要有TPH抗體和MAO抗體，均購自于millipore公司，熒光定量Realtime PCR試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，均購自于takara公司產(chǎn)品。主要儀器有電子天平（賽多科斯，萬分之一）、水浴鍋、游泳箱（55cm×55cm×40cm）、秒表。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組 將48只大鼠隨機(jī)分為4組，每組2只，分別為空白對照組、模型組、頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組。

1.3.2 造模方法 模型組和治療組方法參見文獻(xiàn)［3－4］建立疲勞力竭模型，空白對照組適應(yīng)性訓(xùn)練1周，正常飼養(yǎng)。

1.3.3 治療方法 頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組大鼠每天在針刺預(yù)處理1h后進(jìn)行造模。每只大鼠針刺前束縛固定，參照中國針灸學(xué)會實(shí)驗(yàn)針灸研究會制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》選穴。頭穴透刺組：針刺雙側(cè)百會透太陽、雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15min，出針1h后進(jìn)行造模。傳統(tǒng)針刺組：針刺雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15min，出針1h后進(jìn)行造模?？瞻讓φ战M：正常飼養(yǎng)不給予任何處置。模型組：正常造模，造模前后均不給予任何治療。共進(jìn)行4周的游泳大鼠模型訓(xùn)練，每周游6d。第1周每天游30min，每周遞增30min。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般狀況 觀察造模后各組大鼠的精神狀態(tài)、體毛、體質(zhì)量、大小便及活動(dòng)情況等。

1.4.2 力竭游泳實(shí)驗(yàn) 第4周末進(jìn)行力竭性游泳，記錄游泳時(shí)間，力竭標(biāo)準(zhǔn)以大鼠游泳的協(xié)調(diào)動(dòng)作消失，水淹沒鼻尖，身體下沉，至再次浮出水面的時(shí)間超過10s，并連續(xù)3次者。

1.4.3 標(biāo)本采集及及熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)用1％戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉，麻醉滿意后固定于鼠板上，用含4％多聚甲醛緩沖液灌注固定取下丘腦。參照文獻(xiàn)［5］提取RNA。逆轉(zhuǎn)錄參照試劑盒說明書進(jìn)行操作。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)參照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模后，各模型組大鼠的飼料、飲水量均有所減少，體毛干枯，體質(zhì)量緩慢增長，活動(dòng)減少，眼裂變小，瞇眼明顯，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍。

2.2 各組力竭時(shí)間結(jié)果比較 見表1。

表1 各組力竭時(shí)間結(jié)果比較（±s，n＝12）s

表1 各組力竭時(shí)間結(jié)果比較（±s，n＝12）s

注：與模型組比較，＃＃P＜0.01；與傳統(tǒng)針刺組比較，△P＜0.05。

組 別力竭時(shí)間組 別力竭時(shí)間空白組 422．06±30．21 傳統(tǒng)針刺組348．84±25．17＃＃頭穴透刺組381．52±27．65＃＃△模型組 304．20±24．59

2.3 各組下丘腦組織中TPH、MAO－AmRNA表達(dá)的影響 見表2。

表2 各組下丘腦組織中TPH、MAO－AmRNA表達(dá)的影響（±s，n＝12）

表2 各組下丘腦組織中TPH、MAO－AmRNA表達(dá)的影響（±s，n＝12）

注：與模型組比較，＃＃P＜0.01；與傳統(tǒng)針刺組比較，△P＜0.05。

actin空白組 0．838 0±0．133 1 0．574 8±0．002 9頭穴透刺組0．733 8±0．093 9＃＃△0．678 9±0．021 8＃?！鱾鹘y(tǒng)針刺組0．838 6±0．163 4＃＃0．357 6±0．008 6＃＃模型組 0．957 9±0．018 5 0．133 8±0．006 1組 別TPH/β－actin MAO－A/β－

3 結(jié)論

運(yùn)動(dòng)性疲勞尚屬中醫(yī)學(xué)“虛證”范疇。［6－7］針刺具有疏通經(jīng)絡(luò)，激發(fā)正氣，改善血液循環(huán)，抗脂質(zhì)過氧化，清除自由基，調(diào)節(jié)免疫功能，糾正代謝紊亂，糾正運(yùn)動(dòng)性神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫調(diào)節(jié)紊亂等作用。本研究發(fā)現(xiàn)，頭穴透刺能降低大鼠下丘腦組織重的TPH mRNA表達(dá)，增強(qiáng)MAO－A mRNA表達(dá)，其抗運(yùn)動(dòng)性疲勞機(jī)制可能與此有關(guān)。

［1］岳麗軍，姜麗紅．慢性疲勞綜合征的中西醫(yī)研究概況［J］．長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（2）：230－231．

［2］周建輝，李玲，歐陽靜萍．桂枝四逆散對小鼠耐缺氧能力和抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)研究［J］．吉林中醫(yī)藥，2009，29（10）：908－909．

［3］肖明珠，郭慶芳．動(dòng)物運(yùn)動(dòng)性疲勞方法學(xué)研究之一：同刺激方法對大鼠跑臺運(yùn)動(dòng)疲勞及恢復(fù)期糖代謝的影響［J］．中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2003，17（4）：334－338．

［4］Ohba H，Takda H，Musha H，et al．Effects of prolonged strenuous exercise on plasma levels of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide in healthy men［J］．American Heart Journal，2001，141（5）：751－758．

［5］孫薇，吳博，石偉彬，等．刺五加膠囊對抑郁大鼠海馬組織TH、TPH表達(dá)的影響［J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11（22）：4247－4249．

［6］李海燕，方劍喬．5－羥色胺及其相關(guān)代謝物與運(yùn)動(dòng)性中樞疲勞［J］．長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25（1）：65－67．

［7］林楠，鐘琳琳，李娜．人參花提取物抗疲勞作用的研究［J］．長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（3）：336－337．

R246

A

1007－4813（2013）02－0194－02

2012－11－19）

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目資助課題（編號：12511506）。

張 淼（1973－），女，在站博士后，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：針刺防治老年性疾病。