關(guān)于血小板及其有關(guān)參數(shù)檢測的幾點(diǎn)體會

李文華

關(guān)于血小板及其有關(guān)參數(shù)檢測的幾點(diǎn)體會

李文華

目前, 血細(xì)胞分析儀檢測血小板及其有關(guān)參數(shù)存在著許多值得關(guān)注的問題, 本文就建立顯微鏡計數(shù)法和血涂片染色顯微鏡檢查法相結(jié)合的復(fù)檢制度、建立本實驗室的復(fù)檢范圍、建立本實驗室的參考值范圍、血小板形態(tài)學(xué)的診斷技巧問題以及抗凝劑的問題等方面進(jìn)行了討論并總結(jié)了幾點(diǎn)體會,以期引起關(guān)注。

血細(xì)胞分析儀；血小板； 顯微鏡計數(shù)；血涂片

血小板及其有關(guān)參數(shù)的檢測, 是臨床工作中血液常規(guī)檢測的重要項目之一, 對某些疾病特別是血液系統(tǒng)疾病的診斷、治療和療效觀察具有及其重要的參考價值。其檢查的主要內(nèi)容有血小板計數(shù)、血小板比容(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板體積分布密度(PDW)等。目前, 國內(nèi)醫(yī)院檢驗科絕大部分采用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測。血細(xì)胞分析儀具有快速、方便、重復(fù)性好、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn), 但在實際工作中, 仍然存在許多值得關(guān)注的問題。作者在多年的工作經(jīng)驗中結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn), 總結(jié)出以下幾點(diǎn)體會, 報告如下。

1 建立顯微鏡計數(shù)法和血涂片染色顯微鏡檢查法相結(jié)合的復(fù)核制度

由于血細(xì)胞分析儀檢測血小板及其參數(shù)受很多因素影響, 如采血因素(采血不暢、血液凝集可致血小板計數(shù)假性減低)、儀器因素(試劑空白背景未達(dá)要求、白細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞、溶血劑殘留等可引起血小板假性增高)、抗凝劑因素(抗凝劑過量可使血小板溶脹、崩解, 從而影響計數(shù)及參數(shù)分析)、標(biāo)本儲存溫度(室溫儲存, 低溫可激活血小板, 影響計數(shù)分析及MPV值), 標(biāo)本放置時間(標(biāo)本放置時間過長易產(chǎn)生巨大血小板, 引起血小板計數(shù)偏低), 患者因素(正常血小板大小、形態(tài)之間變異較大), 試劑質(zhì)量(稀釋液不新鮮, 雜質(zhì)和微生物的污染也會影響血小板及MPV值)。綜上所述, 血小板及其參數(shù)的測定會產(chǎn)生一定的誤差。為了檢測結(jié)果的更加準(zhǔn)確, 利用顯微鏡計數(shù)法和血涂片染色顯微鏡檢查法進(jìn)行復(fù)查校正勢在必行。

2 建立本實驗室的復(fù)檢范圍

在多年的工作中, 作者發(fā)現(xiàn), 血細(xì)胞計數(shù)中血小板計數(shù)最為困難, 這是因為：第一, 血小板體積小, 其形態(tài)學(xué)的識別特別容易受其他雜物的干擾。第二, 血小板在體外易于粘附、聚集和變性破壞。血液分析儀檢測血小板及其參數(shù)方便快捷, 重復(fù)性好, 是目前臨床篩檢疾病的主要檢驗儀器, 但是儀器不能將血小板及其他類似大小的物質(zhì)(如紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片或灰塵等雜質(zhì))完全區(qū)別開來［1］。所以, 當(dāng)檢測結(jié)果太高或太低時需要復(fù)檢。常用方法是：①用相差顯微鏡計數(shù)經(jīng)草酸銨稀釋液稀釋后的血小板, 作為血小板計數(shù)參考方法進(jìn)行復(fù)核。②用同一份血液標(biāo)本制備良好血涂片, 觀察血小板的數(shù)量、形態(tài)和分布情況, 進(jìn)行核對。各個實驗室應(yīng)建立自己的復(fù)檢范圍。有報告稱, 當(dāng)PLT<50×109/L時, 血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果明顯低于顯微鏡檢測結(jié)果［2］。應(yīng)該根據(jù)血小板體積分布直方圖以及檢測結(jié)果與臨床資料相符合的程度等方面確定是否需要復(fù)檢以及復(fù)檢的范圍。一般認(rèn)為PLT>600×109/L或PLT<100×109/L時需要復(fù)檢, 以確定檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3 由于血細(xì)胞分析儀的型號、分析測試原理不同, 各醫(yī)院應(yīng)建立自己實驗室的參考值范圍

血細(xì)胞分析儀測試原理主要有電阻抗法、激光散射分析法, 流式分析法等。不同的儀器, 不同的測試原理, 血小板計數(shù)的體積范圍不同, 如Coulter Hmx將2-25 fl作為計數(shù)血小板的體積范圍。也有儀器將2~30 fl作為血小板體積計數(shù)范圍不等, 故應(yīng)用不同的血細(xì)胞分析儀, 參考值范圍應(yīng)有所不同。如劃定的范圍較小, 易把大的血小板漏計, 引起血小板假性減少；如劃定的范圍較大時, 易小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片以及微粒等計入血小板, 引起血小板假性增高。所以, 各實驗室有根據(jù)儀器型號不同建立本實驗室參考值范圍的必要。

4 血小板形態(tài)學(xué)診斷技巧的問題

無論是顯微鏡計數(shù)法還是血細(xì)胞分析儀計數(shù)法計數(shù)血小板均可能出現(xiàn)計數(shù)誤差, 通過顯微鏡觀察血涂片中血小板形態(tài)及分布情況, 可以大致估計血小板的數(shù)量。一般地, 正常情況下, 在血涂片厚薄適中、紅細(xì)胞分布均勻區(qū)域即體尾交界處, , 每個油鏡視野約有8~15個血小板, 或每20~30個紅細(xì)胞見到1個血小板, 這就可以表明血小板數(shù)在一個大致的正常范圍。如果發(fā)現(xiàn)血小板散在罕見, 血小板減少無疑。有時我們會遇到采血不順利或速度太慢, 血小板聚集成片或成條索狀聚集, 分布不均, 應(yīng)用低倍鏡或高倍鏡觀察全片, 特別是片尾部, 否則會誤認(rèn)為減少。一張血涂片除了能觀察血小板數(shù)量外, 也能觀察血小板大小、形態(tài), 有無巨大血小板以及畸形血小板, 結(jié)合MPV、PCT、PDW等, 對于某些血液系統(tǒng)疾病, 如ITP、MDS,原發(fā)性血小板增多癥、骨髓增殖性疾病, 血小板無力癥, 巨血小板綜合征等具有重要意義。

5 關(guān)于抗凝劑問題

由于乙二胺四乙酸(EDTA)鹽, 對血細(xì)胞形態(tài)和計數(shù)影響較小, 國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)1993年文件建議,血細(xì)胞計數(shù)用EDTA-K2做抗凝劑, 用量為EDTA-K2·2H2O, 1.5~2.2 mg (445±0.85 μmol)/ml血液。目前, EDTA-K2抗凝劑在臨床已經(jīng)廣泛使用, 近年來, 有關(guān)EDTA-K2依賴性血小板減少的報道越來越多, 引起臨床更多關(guān)注。主要原因有兩點(diǎn)：第一, EDTA-K2可導(dǎo)致血小板活化, 引起血小板膜表面某種隱匿性抗原表位發(fā)生構(gòu)象改變, 與血漿中自身抗體結(jié)合, 形成血小板聚集體［3］。第二, EDTA-K2可是血液發(fā)生免疫介導(dǎo),產(chǎn)生冷抗血小板抗體, 直接作用于血小板膜蛋白Ⅱb/Ⅲa上,誘導(dǎo)產(chǎn)生“衛(wèi)星現(xiàn)象”。無論是血小板聚集, 還是“衛(wèi)星現(xiàn)象”,血細(xì)胞分析儀均不能識別凝集的血小板, 導(dǎo)致血小板檢測結(jié)果假性降低。發(fā)現(xiàn)這種情況一定要用不同方法進(jìn)行復(fù)核。例如用枸櫞酸鹽抗凝血或用末梢血草酸銨稀釋后, 顯微鏡重新計數(shù), 以防止漏診、誤診, 為臨床提供準(zhǔn)確無誤的結(jié)果。

血細(xì)胞分析儀檢測血小板及其參數(shù)的方法雖然快速、重復(fù)性好, 但只能作為常規(guī)篩檢手段, 其結(jié)果異常時, 仍需要結(jié)合血涂片染色和顯微鏡計數(shù)法來復(fù)核結(jié)果。各醫(yī)院檢驗科應(yīng)重視血小板形態(tài)學(xué)的培訓(xùn)工作, 在工作強(qiáng)度日益增大的情況下, 保證檢驗質(zhì)量仍是十分重要的任務(wù), 希望引起有關(guān)方面的高度重視。

［1］ 熊立凡.臨床檢驗基礎(chǔ).第3版.人民衛(wèi)生出版社, 2003:85.

［2］ 李海榮 手工法與血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板的比較.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2009,6(8):614.

［3］ 高瓊.EDTA鹽依賴性血小板減少癥1例分析.中國誤診學(xué)雜志, 2012,12(3):584.

122000 遼寧省朝陽市第二醫(yī)院檢驗科