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      畬族與漢族乙肝患者HBV拉米夫定和阿德福韋天然耐藥分析

      2013-01-22 07:23:24吳根鳳浙江省景寧縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科景寧323500
      關(guān)鍵詞:阿德福拉米夫定畬族

      吳根鳳 浙江省景寧縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 景寧 323500

      乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的傳染性疾病。通過血液與體液傳播,具有慢性攜帶狀態(tài)。乙型肝炎病毒感染可引起肝臟炎癥和纖維化,嚴(yán)重者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌,是嚴(yán)重的社會(huì)和公共衛(wèi)生問題。HBV感染呈世界性流行,不同地區(qū)HBV感染流行強(qiáng)度不同,主要治療方法是抗病毒治療[1]。2005年—2010年,中國(guó)年報(bào)告乙肝發(fā)病98萬(wàn)~118萬(wàn)例[2]。根據(jù)2010年慢性乙型肝炎病毒治療專家委員會(huì)制定的《慢性乙型肝炎抗病毒治療專家共識(shí)》,核苷(酸)類似藥物(NUCs)如拉米夫定和阿德福韋逐漸成為乙肝臨床抗病毒治療的的常規(guī)一線藥物,而NUCs類藥物存在耐藥變異率高的特性[3],因此,對(duì)HBV感染者使用拉米夫定和阿德福韋治療前進(jìn)行用藥篩選十分必要。現(xiàn)對(duì)我縣畬族與漢族乙肝患者HVB拉米夫定和阿德福韋天然耐藥情況進(jìn)行分析。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 2009年6月—2011年4月在本院初診確診感染HBV的患者100例,診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[4],其中畬族50例,均來自本縣畬族聚居自然村;漢族50例;男62例,女38例;年齡20~59歲,平均38歲。檢查HBsAg陽(yáng)性均超過6個(gè)月,HBV-DNA陽(yáng)性伴有肝功能受損,無服用拉米夫定或阿德福韋等核苷(酸)類似藥物治療史。

      1.2 儀器與試劑

      1.2.1 試 劑 HBV-DNA定量檢測(cè)的引物及探針,均由杭州艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心提供;DNA提取試劑盒及擴(kuò)增試劑、基因芯片由寶生物工程(大連)有限公司提供。

      1.2.2 儀 器 日本TaKaRa擴(kuò)增儀、ABI3500XL測(cè)序儀、Roche Light Cycle熒光定量擴(kuò)增儀、安捷倫MX3000P熒光定量PCR分析儀。

      1.3 方 法 采用一次性添加促凝劑真空采血管采集患者靜脈血3mL,37℃水浴8min,4 000r/min離心5min,分離血清1mL于滅菌微量離心管轉(zhuǎn)移。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增乙型肝炎病毒(HBV)的P基因片段,使芯片上特異性核酸探針(檢測(cè)探針包括rt180、rt181、rt204、rt173、rt233、rt236)與HBV病毒特定基因進(jìn)行雜交、洗脫,通過生物信號(hào)放大檢測(cè)技術(shù),使用儀器研讀結(jié)果。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 不同數(shù)據(jù)組間比較及構(gòu)成比采用Pearson Chi-square Test(χ2)和Fisher's Exact Test,P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析完成。

      2 結(jié)果

      2.1畬族與漢族HBV患者攜帶天然耐藥突變率比較 100例血清樣本分析,共檢到天然耐藥患者10例,天然耐藥率為10%(10/100);其中畬族2例,耐藥率4.0%(2/50);漢族8例,耐藥率16.0%(8/50)。畬族天然耐藥率明顯低于漢族,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.000,P<0.05)

      2.2畬族與漢族HBV天然耐藥基因類型分布結(jié)果通過對(duì)10例天然耐藥患者攜帶的HBV耐藥基因類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,其中2例畬族患者攜帶的天然耐藥HBV株耐藥基因突變位點(diǎn)均為對(duì)拉米夫定耐藥的rt204,其協(xié)同位點(diǎn)rt173、rt180以及阿德福韋耐藥相關(guān)基因rt181、rt233、rt236均未發(fā)生突變,rt204突變類型為rtM204I;分析8例漢族患者攜帶的天然耐藥HBV株耐藥基因突變位點(diǎn),其中1例對(duì)拉米夫定及阿德福韋均耐藥,5例對(duì)拉米夫定耐藥,2例對(duì)阿德福韋耐藥,見表1。

      3討 論

      景寧畬族自治縣是全國(guó)唯一一個(gè)畬族自治縣,居民以漢族和畬族為主。全縣常住畬族人口3萬(wàn)人,本次研究采集的畬族標(biāo)本均來自于畬族聚居的畬族自然村,居民以務(wù)農(nóng)為主,交通相對(duì)封閉,人口流動(dòng)性不大,使得畬族HBV感染者在HBV-DNA水平及同為rtM204I。

      總之,在本次景寧畬族自治縣HBV感染人群對(duì)拉米夫定及阿德福韋的天然耐藥調(diào)查中,畬族天然耐藥率為4.0%,漢族16.0%。漢族人群乙肝病毒天然耐藥率明顯高于畬族人群,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.000,P<0.05)。故而,應(yīng)根據(jù)具體情況選擇抗病毒治療方案,而在抗病毒藥物使用前以及使用過程中,對(duì)耐藥基因的隨時(shí)檢測(cè),也是必須的,這不僅能夠使抗病毒藥物發(fā)揮最大的效用,及時(shí)控制病情,更能夠有效降低患者HBV的耐藥率。但本課題研究樣本總量較少,整體族群天然耐藥發(fā)生率有待進(jìn)一步加大樣本量進(jìn)行觀察比較。病毒基因型上存在差異。調(diào)查表明,麗水地區(qū)畬族人群感染HBV以B和C型為主,其中C型基因占比大于B型,與同一地區(qū)的漢族人群相比具有顯著差異;麗水地區(qū)畬族人群中,B型感染者較C型感染者HBV-DNA拷貝數(shù)低,HBeAg陽(yáng)性率低,預(yù)示B型感染者較C型感染者的病毒活動(dòng)性弱,肝臟損害輕,預(yù)后好[5]。而HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(ccc DNA)與患者血清中HBV-DNA含量呈正相關(guān)[6]。由此畬族和漢族在抗病毒治療方案的選擇和療效的判斷上可以存在差異。

      研究表明,未經(jīng)拉米夫定治療的乙肝患者亦存在較高的YMDD變異率,臨床上應(yīng)用抗病毒治療前應(yīng)對(duì)患者進(jìn)行是否存在耐藥基因變異進(jìn)行檢測(cè)[7]。而漢族相對(duì)于畬族,在人員流動(dòng)性以及接觸人群上都較為廣泛,使其感染HBV的概率增加,而隨著核苷(酸)類似藥物(NUCs)如拉米夫定和阿德福韋在乙肝臨床抗病毒治療一線的使用,感染高變異的耐藥株可能性也隨之增加。本研究中,漢族患者樣本中就存在1例對(duì)拉米夫定和阿德福韋同時(shí)耐藥的菌株。同時(shí),畬族自然村的民族聚居特性,使得感染到同一類型HBV株的可能性增加,在本研究中,2例畬族患者樣本中檢到的HBV天然耐藥位點(diǎn)變異類型即

      [1]李晨,萬(wàn)謨彬.慢性乙型病毒性肝炎抗病毒治療指南的比較和解讀[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志,2010,30(12):1085-1086.

      [2]崔富強(qiáng),王富珍,吳振華,等.中國(guó)2005-2010年報(bào)告乙型病毒性肝炎發(fā)病分析[J].中國(guó)疫苗和免疫,2011,(6):483-486.

      [3]慢性乙型肝炎抗病毒治療專家委員會(huì).慢性乙型肝炎抗病毒治療專家共識(shí)[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志,2010,4(1):49-53.

      [4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中國(guó)肝臟病雜志(電子版),2011,3(1):40-52.

      [5]蔣衛(wèi)平,李旭明,趙志鋼,等.畬族人群感染乙型肝炎病毒基因型及相關(guān)調(diào)查[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2011,12(2):202-203.

      [6]張文杰,毛維武,田淑菊,等.乙型肝炎病毒標(biāo)志物定量檢測(cè)及肝組織病理學(xué)檢測(cè)應(yīng)用于慢性乙肝病毒性肝炎患者的臨床意義[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(13):1507-1509.

      [7]王莉,陸籠輝.未經(jīng)拉米夫定治療而發(fā)生乙型肝炎病毒YMDD變異的臨床分析[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,8(1):26-27.

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