普萘洛爾對映體對點(diǎn)燃的作用及機(jī)制

李曉玲 張 慶 華 堅(jiān) 岳 旺 張繼國

(1青島市立醫(yī)院，山東 青島 266011；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，山東 青島 266021；3.泰山醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，山東 泰安 271016)

普萘洛爾是心腦血管疾病常用β-受體阻斷劑，也可用于焦慮癥、精神分裂癥等神經(jīng)精神疾病治療[1-4]。點(diǎn)燃模型主要用于藥物成癮及癲癇發(fā)作的研究[5-7]。岳旺等于1984年報導(dǎo)普萘洛爾可抗電休克和抑制點(diǎn)燃發(fā)作[8]，1987年Gellman[9]又提出普萘洛爾作為β受體拮抗劑對點(diǎn)燃發(fā)作無效。目前普萘洛爾對點(diǎn)燃是否有效仍存在爭議，其作用機(jī)制是通過β-受體阻斷還是膜穩(wěn)定作用亦待闡明。本實(shí)驗(yàn)對手性普萘洛爾左右旋對映體單體進(jìn)行作用研究，以便證明普萘洛爾的作用及所作用的靶點(diǎn)。

1 材 料

1.1 動 物

雌性Wistar大鼠，體重(180±10)g；昆明種小鼠，體重(22±3)g，雌雄兼有，由青島市藥品檢驗(yàn)所動物中心提供。

1.2 藥 品

戊四唑(pentylenetetrazole, PTZ)，Sigma公司產(chǎn)品；氨基脲(Semicarbaz SCZ)，北京制藥廠出品；鹽酸普萘洛爾(propranolol hydrochloride)，北京第二制藥廠生產(chǎn)。

1.3 儀 器

隔離器SS-102J，為日本光電公司生產(chǎn)；腦立體定向儀，江灣I型C，由第二軍醫(yī)大學(xué)生產(chǎn)；SMUP-PC生物信號處理系統(tǒng)，為上海醫(yī)科大學(xué)生產(chǎn)；生理藥理多用儀，YSD-4型，蚌埠醫(yī)學(xué)院和蚌埠無線電二廠聯(lián)合生產(chǎn)。

1.4 方 法

1.4.1氨基脲誘發(fā)的小鼠驚厥模型(SCZS)

昆明小鼠♂♀ 兼用，體重為(20±3)g，200 mg/kg尾靜脈注射預(yù)處理。SCZS大致分四期：⑴陣攣；⑵狂奔；⑶后肢強(qiáng)直；⑷死亡。首次強(qiáng)直驚厥后，未死亡者可以再次繼續(xù)狂奔，隨即強(qiáng)直驚厥。在120 min內(nèi)小鼠死亡70～90%。約2/3小鼠未經(jīng)陣攣即突然狂奔，數(shù)秒后出現(xiàn)后肢強(qiáng)直，個別可直接發(fā)生強(qiáng)直接性驚厥。本研究以狂奔和后肢強(qiáng)直驚厥為觀察指標(biāo)，計(jì)數(shù)給予SCZ后120 min內(nèi)驚厥發(fā)生率、死亡率或潛伏期。實(shí)驗(yàn)全過程盡量做到：室溫相對恒定;保持室內(nèi)安靜；每鼠一籠。

1.4.2大鼠PTZ點(diǎn)燃模型的制備

Wistar大鼠♀，體重(180±10)克，實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，自由飲水。用NS新鮮配制1.75%的PTZ溶液，腹腔注射(ip)亞驚厥劑量35 mg/kg[10]，隔日一次，測定ip 1 h內(nèi)行為變化。采用Ono分級法(Ono’s stage)[10]分為Ⅵ級：0級無發(fā)作；1級頭部抽搐或點(diǎn)頭；2級全身肌陣攣；3級頭部抽搐伴前肢抽搐；4級陣攣驚厥間有后肢的站立；5級站立伴跌倒發(fā)作；6級全身陣攣強(qiáng)直驚厥。5次連續(xù)出現(xiàn)2級或者2級以上者，即為點(diǎn)燃大鼠，用于實(shí)驗(yàn)。點(diǎn)燃大鼠分別ip左、右旋普萘洛爾各0.25，0.75， 1.50 mg/kg(n=9)，測定1h內(nèi)行為變化。計(jì)算Ono’s 6級(全身陣攣強(qiáng)直驚厥)發(fā)生百分率。

1.4.3大鼠杏仁核點(diǎn)燃模型的制備

Wister大鼠♀，按40 mg/kg-1ip注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠，按照K?nig圖譜確定大鼠左右杏仁核，插入直徑為0.25 mm的絕緣雙極電極，用牙托粉固定在顱骨表面。術(shù)后連續(xù)3天ip青霉素10萬u, 預(yù)防感染。大鼠術(shù)后恢復(fù)2周，采用400 μA單相方波,波寬1 ms，頻率為60 Hz，持續(xù)時間1 s刺激大鼠，記錄到后放電時程(afterdischarge duration，ADD) 和發(fā)作強(qiáng)度。發(fā)作強(qiáng)度按Racine分級[10]分為5級：①閉眼、嗅、動胡須及面部抽搐；②咀嚼、點(diǎn)頭伴面部抽搐；③抬一側(cè)前肢及陣攣；④站立伴有兩側(cè)前肢的陣攣；⑤站立、跌倒伴有全身的陣攣。連續(xù)出現(xiàn)3次Ⅴ級發(fā)作反應(yīng)即為點(diǎn)燃大鼠。點(diǎn)燃大鼠(n=9)分別ip普萘洛爾0.25，0.75,1.50 mg/kg,30 min后測定ADD。計(jì)算Racine分級和發(fā)作百分率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 普萘洛爾對小鼠SCZS的影響

表1 普萘洛爾對小鼠SCZS的影響

注：全部小鼠均用SCZ 200mg/kg iv 提前60分鐘預(yù)處理★★P<0.01。

2.2 普萘洛爾對PTZ點(diǎn)燃的影響

普萘洛爾左旋體ip有抑制PT點(diǎn)燃作用，降低Ono分級和6級發(fā)作百分率(P﹤0.01)，并在一定劑量范圍內(nèi)呈量效關(guān)系(表2)。普萘洛爾右旋體對PTZ點(diǎn)燃無影響(表2)。

表2 普萘洛爾對PTZ點(diǎn)燃的影響

注：與給藥前對照組比較★★P<0.01

2.3 普萘洛爾對杏仁核點(diǎn)燃的影響

左旋體普萘洛爾ip有抗杏仁核點(diǎn)燃作用，降低Racine分級和發(fā)作百分率(P<0.01)，并在一定劑量范圍內(nèi)呈量效關(guān)系(表3)。消旋體普萘洛爾在7.5 mg/kg的較大劑量有抗杏仁核點(diǎn)燃作用。

表3 普萘洛爾對杏仁核點(diǎn)燃的影響

3 討 論

普萘洛爾又名心得安,是心腦血管臨床應(yīng)用經(jīng)典β-腎上腺素受體阻斷劑，因有不成對碳原子而具有手性，即左旋、右旋和消旋對映體三種，臨床使用消旋產(chǎn)品。普萘洛爾具有特異性β-受體阻斷和非特異膜穩(wěn)定作用，均可產(chǎn)生中樞抑制，具有抗焦慮、抗成癮[1-7]等多種中樞神經(jīng)活性，前文曾報告普萘洛爾抗驚厥和最大電休克有量效關(guān)系[11]。但一直缺乏足夠證據(jù)證明普萘洛爾通過β受體還是膜穩(wěn)定作用發(fā)揮抗點(diǎn)燃的中樞作用機(jī)制。

本結(jié)果證明左旋體普萘洛爾有抗PTZ點(diǎn)燃和抗杏仁核點(diǎn)燃作用，并有量效關(guān)系。說明中樞β-受體參與點(diǎn)燃過程。右旋體普萘洛爾則無抗PTZ點(diǎn)燃及杏仁核點(diǎn)燃作用。氨基脲誘發(fā)的驚厥模型(SCZS)是一種降低腦內(nèi)抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)GABA而誘發(fā)驚厥的模型[8]。本研究在小鼠SCZS驚厥模型測定左右旋體及消旋體的作用與在點(diǎn)燃模型中的作用相吻合。

構(gòu)效關(guān)系研究已證明，作用于受體的具有手性結(jié)構(gòu)的藥物，僅有一種立體構(gòu)型可選擇性與特定受體的空間構(gòu)型相契合，手性藥物普萘洛爾僅左旋體可特異作用于β-受體，右旋體無效，但兩者均具有非特異的膜穩(wěn)定作用，臨床應(yīng)用的普萘洛爾即為消旋體，兩類對映化合物各占一半。有效藥物成分應(yīng)為左旋體，因手性藥物拆分成本較高，故常用廉價消旋體。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，普萘洛爾通過阻斷中樞β受體抑制點(diǎn)燃發(fā)作。此研究結(jié)果對普萘洛爾的臨床應(yīng)用有指導(dǎo)意義。

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