一例香豬感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒的診斷與防控

楊通蓮 汪忠榮 梁美英

（1.從江縣動物疫病預防控制中心，貴州從江 557400；2.黔東南州動物疫病預防控制中心，貴州凱里 556000）

豬繁殖與呼吸綜合征常稱豬藍耳病，由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種高度接觸性傳染病[1]。該病毒可感染不同品種、性別和年齡的豬，典型癥狀：母豬高熱和繁殖障礙；仔豬與肥育豬呼吸道困難，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失。2020年8月15日某合作社香豬場向縣動物疫病預防控制中心報告，該場飼養(yǎng)的153日齡香豬有4頭不食，用阿莫西林和卡拉霉素等治療未見好轉(zhuǎn)?？h級獸醫(yī)技術(shù)人員立即到現(xiàn)場進行調(diào)查、采樣送獸醫(yī)實驗室檢測，現(xiàn)將有關(guān)診斷情況報告分析。

1 材料

1.1 病料

無菌采集發(fā)病香豬肝臟、肺臟、脾臟、扁桃體和淋巴結(jié)等組織。

1.2 試劑

豬藍耳病變異株病毒直接擴增RT-qPCR抗原檢測試劑盒（批號：20191016414，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所）由貴州省動物疫病預防控制中心贈送，豬瘟通用型熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號：CSFV200313401）購于上?？祆`生物科技有限公司。

2 方法

2.1 細菌分離培養(yǎng)

在凈化工作臺中，無菌操作，挑取肺臟，腎臟和心臟樣品接種到LB培養(yǎng)基，在生化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h，然后觀察。

2.2 病毒核酸檢測

（1）根據(jù)試劑盒說明書操作，取10mg組織樣本放入1.5mlEP管中，加入500μl裂解液B1，用組織研磨器充分研磨。

（2）在研磨液中加入500μl裂解液B2混勻。

（3）常溫12000rpm離心2min，去150μl上清液于干凈的EP管中，即為模板。

（4）按說明書要求配制反應液和設置反應程序。

（5）結(jié)果判定

①豬藍耳病

陽性對照擴增曲線有明顯對數(shù)擴增曲線，且Ct值≤25，陰性對照擴增曲線無Ct值顯示，二者均成立才可判定試驗成立，否則無效。

陽性：檢測樣品Ct值≤30，為豬藍耳病毒變異株核酸陽性。陰性：樣品Ct值＞35或無數(shù)值，判為陰性?？梢桑喝?0＜Ct值≤35時為可疑，需重新對樣品裂解處理檢測，如仍為可疑，判為陽性，若重復檢測Ct值＞35，判為陰性。

②豬瘟

陽性對照擴增曲線有明顯對數(shù)擴增曲線，且Ct值＜30，陰性對照擴增曲線無Ct值或Ct值＞34或無擴增曲線，二者均成立才可判定試驗成立，否則無效。

陽性：檢測樣品Ct值＜30，為豬瘟核酸陽性。陰性：樣品Ct值＞34或無數(shù)值，判為陰性?？梢桑喝?0≤Ct值≤34時為可疑，需重新對樣品裂解處理檢測，如仍為可疑，判為陽性，若重復檢測Ct值＞35，判為陰性。

3 結(jié)果

3.1 病理剖解

剖檢1頭病豬可見：全身淋巴結(jié)出血、腫大；肺臟暗紅色，出血、腫脹；肺實變；心外膜有針尖大的出血點，喉頭和膀胱黏膜均有出血點；腎臟有出血點、腫大（圖1）；肝臟質(zhì)硬、腫大、暗紅色（圖2）；脾臟腫大、出血。

圖1 腎臟腫大、有出血

圖2 肝臟腫大、出血

3.2 細菌分離培養(yǎng)

培養(yǎng)24后觀察，未見細菌生長。

3.3 熒光PCR檢測

實時熒光RT-PCR檢測，結(jié)果豬藍耳病毒變異株核酸陽性（見圖3），豬瘟病毒核酸陰性。

4 防控措施

4.1 緊急接種豬藍耳病疫苗

對全場香豬群進行超劑量緊急免疫，按育肥豬2頭份每頭，種豬5頭份每頭接種，接種時在接種好的豬身上做好標記和免疫記錄，做到一頭不漏。

4.2 加強管理、改善飼養(yǎng)條件

首先對圈舍徹底清掃后，消毒。改變原飼養(yǎng)方式，原只喂精料的，現(xiàn)改為精料加青汁飼料（南瓜、紅薯藤等）。在飲用水中加入少量高錳酸鉀消毒。其次完善防疫設施，嚴格控制工作人員隨意進出，嚴防鳥類進入圈舍覓食，并對病豬作無害化處理。加強滅鼠滅蚊。

圖3 豬藍耳病擴增結(jié)果

5 討論

調(diào)查可知，該場存欄香豬280頭，其中母豬20頭，肥豬260頭，8月 日開始發(fā)病，期間死亡6頭，4頭病豬體溫平均41.1℃，確診后，病豬全部撲殺并無害化處理。豬藍耳病疫苗注射后一周后，疫情得到控制，未發(fā)現(xiàn)新病例，豬群食欲逐漸恢復，至8月底，其疫情完全獲得控制。

該場2019年8月建成，9月開始引進香豬，豬場離村公路局里不到100米，且在村寨入口處，同時本村公用垃圾池養(yǎng)殖場旁公路邊。場內(nèi)沒有更衣室，只有一道消毒池進場，管理不規(guī)范，其消毒池干枯，無消毒水，消毒池和消毒間形同虛設，外來人員可以進出隨便，存在重大的疫病傳播隱患，為此次疫病發(fā)生埋下了伏筆。一是豬場內(nèi)消毒設施缺乏，噴霧器等設備幾乎沒有，據(jù)工作人員介紹，場內(nèi)沒有進行定期消毒；二是沒有免疫程序，免疫根據(jù)政府每年的春秋兩防進行，場內(nèi)的技術(shù)人員為村防疫員，無專職技術(shù)員，免疫工作由其負責，導致免疫次數(shù)不夠，免疫病種少，造成豬場缺乏抵御重大疾病。飼養(yǎng)員是村里貧困戶，缺乏規(guī)模飼養(yǎng)場實踐經(jīng)驗，無疫病防控意識，豬發(fā)病后管理人員未引起重視，沒有采樣檢測確診，全憑借經(jīng)驗用抗生素治療。查閱獸醫(yī)免疫注射記錄，發(fā)現(xiàn)獸醫(yī)記錄不全，檢查場內(nèi)現(xiàn)有疫苗，部分疫苗真空度不夠，影響疫苗效價；觀察飲水，顏色泛黃、嘗試味苦，不符合飲用標準；飼料存放處，蠅多，天氣晝夜溫差較大等原因，導致豬群的抗病力下降。而最初發(fā)病的肥豬，據(jù)調(diào)查也是飼養(yǎng)在管理和通風最差的一棟育肥豬舍內(nèi)，綜合分析，應是多方面的原因共同作用，導致豬藍耳病的感染[2]。此次疫病的發(fā)生使我們更為清楚的認識到防疫工作和飼養(yǎng)管理同等重要，嚴格科學的防疫措施能有效的阻止病原的入侵，合理的免疫程序和有效的疫苗免疫，能保證豬群維持較高的抗體水平，進而增強抵御傳染病的能力，是創(chuàng)造經(jīng)濟效益的基礎。