梭毒隱翅蟲脂溶性成分的氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析

摘要：采用氯仿為溶劑超聲輔助提取梭毒隱翅蟲（Paederus fuscipes Curtis）的脂溶性成分， 并采用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了分析鑒定。結(jié)果共檢出92種脂溶性成分，并鑒定出其中的48種， 可鑒定成分相對(duì)百分含量之和達(dá)到83.41%，其中相對(duì)百分含量較高的有（Z）—13—二十二酰胺（12.79%）、二十四烷（9.13%）、二十八烷（8.76%）、油酸乙酯（8.06%）、（Z）—9—十八烯酰胺（5.57%）。

關(guān)鍵詞：梭毒隱翅蟲（Paederus fuscipes Curtis）；脂溶性成分；氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用

中圖分類號(hào)：O657.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439—8114（2012）19—4366—03

梭毒隱翅蟲（Paederus fuscipes Curtis）隸屬于毒隱翅蟲屬（Paederus），該屬已知種類超過250種[1]， 產(chǎn)自世界各地，已報(bào)道的毒隱翅蟲有21種[2]。毒隱翅蟲體內(nèi)含有強(qiáng)烈接觸毒物，呈強(qiáng)酸性[3]，觸及皮膚可導(dǎo)致皮炎，出現(xiàn)癢紅腫痛、水皰，可阻止細(xì)胞有絲分裂，抑制鼠類的癌腫瘤，已成為一種試驗(yàn)性抗菌素[4]。隱翅蟲含毒素雖危害人體皮膚，但在醫(yī)學(xué)上又發(fā)現(xiàn)隱翅蟲毒素可以毒攻毒，既能迅速破壞組織，又能迅速完整地使其復(fù)原，從而治療人體皮膚多種疾病。在《中藥大辭典》中藥名為花蟻蟲，能解毒、殺蟲、止癢、治神經(jīng)性皮炎、癬瘡。

毒隱翅蟲的毒液化學(xué)成分復(fù)雜，除以上3種毒素外，還含有醛類、醌類、萜類等物質(zhì)[4，5]。為了更好地了解貴州毒隱翅蟲中毒液所含的化學(xué)成分，采用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用方法對(duì)貴州產(chǎn)的梭毒隱翅蟲的脂溶性成分進(jìn)行了分離、鑒定并測定其相對(duì)含量，為貴州毒隱翅蟲的利用和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

梭毒隱翅蟲（Paederus fuscipes Curtis）于2009年8月購自貴州羅甸；氯仿為分析純。

1.2 儀器

KQ—500DE數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Agilent 6890—5973氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）；AL204型電子天平（梅特勒—托利多公司）。

1.3 脂溶性成分提取

梭毒隱翅蟲干燥后粉碎，過60目篩。取毒隱翅蟲粉末約1 g置于250 mL具塞錐形瓶中，加入100 mL氯仿溶液，超聲輔助提取30 min，提取結(jié)束后靜置，用氯仿補(bǔ)足減失的重量，混勻。將氯仿提取物過濾，取濾液1 mL采用0.45 μm微孔濾膜過濾置于專用樣品瓶中，待GC/MS測定。另取濾液10 mL置于干凈的表面皿中，揮干氯仿至恒重，減除表面皿重量得氯仿提取物中脂溶性成分含量為0.6 mg/mL， 由此計(jì)算毒隱翅蟲干燥蟲體中脂溶性成分含量為60 mg/g。

1.4 GC—MS分析

色譜條件：HP—5MS（5%苯取代甲基硅酮）色譜柱（30 m×0.25 mm ×0.25 μm）；程序升溫：初始柱溫為70 ℃，以8 ℃/min升至180 ℃，再以1 ℃/min升至200 ℃，以2 ℃/min升至250 ℃保持5 min；汽化室溫度260 ℃；載氣為高純He，流速1 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；分流比20∶1。

質(zhì)譜條件：離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；電離方式為EI，電子能量70 eV；溶劑延遲4 min；質(zhì)量掃描范圍30～500 amu。

2 結(jié)果與分析

用峰面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對(duì)初始閾值≥13.60，初始峰寬≥0.08的化合物峰進(jìn)行積分并鑒定，用美國Wiley、NIST05兩種數(shù)據(jù)庫的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索比對(duì)，并進(jìn)行人工圖譜解析得出化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果共有92個(gè)化合物得到積分，其中48個(gè)成分得到鑒定，其相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和占總數(shù)的83.41%，揮發(fā)油的總離子流圖見圖1，鑒定結(jié)果見表1。未鑒定成分中未見含量較高成分。

從圖1可以看出，梭毒隱翅蟲脂溶性成分中含有大量的各式化合物，可檢出的成分達(dá)92個(gè)，在動(dòng)物體內(nèi)存在如此種類眾多的脂溶性成分比較少見。從表1中可以看出，梭毒隱翅蟲脂溶性成分中有48種化合物得以鑒定，其結(jié)構(gòu)大致可以分為4類：①脂肪烴類，包括烷、烯、炔，特別是直鏈烷烴較多，且成系列；②酰胺類，含有多種脂肪酰胺類化合物，說明氮元素含量高；③酯；④醛與酮。這4類占可鑒定成分中的絕大多數(shù)，脂肪烴類物質(zhì)有13種，其中二十四烷含量高達(dá)9.13%；酰胺類物質(zhì)有6種，包括含量最高的（Z）—13—二十二酰胺（12.79%）以及（Z）—9—十八烯酰胺（5.57%）；酯類物質(zhì)8種；醛與酮10種。

酰胺類化合物是具有多方面生物活性的一類物質(zhì)，大量文獻(xiàn)表明脂肪酰胺具有中樞抑制作用，脂肪酰胺類物質(zhì)作為內(nèi)源性生物活性脂質(zhì)參與生物體的多種功能的調(diào)節(jié)[6—9]。此外，脂肪酰胺不僅保持了原有胺類或生物胺的活性，而且減少了其作用位點(diǎn)，提高了藥物的安全性，由此表明脂肪酰胺類化合物作為藥物開發(fā)具有美好的前景。毒隱翅蟲中含有大量的脂肪酰胺類化合物，為將毒隱翅蟲開發(fā)成藥物提供了一定參考。同時(shí)，從毒隱翅蟲中發(fā)現(xiàn)斑蝥素（Cantharidin），斑蝥素是一類具有強(qiáng)烈抗癌效果的物質(zhì)，主要來源于芫青科昆蟲，毒隱翅蟲中含有斑蝥素也為毒隱翅蟲具有一定的抗癌效果提供了理論支持。

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)梭毒隱翅蟲脂溶性有效成分的分析鑒定及含量測定，對(duì)綜合開發(fā)利用該藥用資源提供了科學(xué)的依據(jù)。GC—MS聯(lián)用技術(shù)廣泛用于動(dòng)、植物揮發(fā)油、精油及低極性化合物的分析，用該方法分析梭毒隱翅蟲的脂溶性成分，非常全面地獲得了相關(guān)信息，是分析梭毒隱翅蟲的脂溶性成分的有效手段。

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