胃癌組織中F框/WD-40域蛋白7和Cyclin E蛋白的表達(dá)

李向壘，王貴吉 ，裴迎新，張 琪，王夏飛

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科 鄭州450052 2)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室 鄭州450001

#通訊作者，男，1954年6月生，本科，教授，研究方向:消化道腫瘤，E-mail:pyx@zzu.edu.cn

F 框/WD-40 域蛋白7 (F-box/WD repeat-containing protein 7，F(xiàn)BXW7)對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)程、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化起著重要的調(diào)節(jié)作用，很多腫瘤中都存在FBXW7 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的紊亂［1-2］。Cyclin E 在調(diào)控細(xì)胞由G1期進(jìn)入S 期的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，從而引發(fā)腫瘤［3］。該研究通過免疫組化SP 法檢測(cè)75例胃癌組織中FBXW7和Cyclin E 蛋白的表達(dá)，以期探討FBXW7 和Cyclin E 蛋白與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2010年6月至2011年6月手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本75例，其中男45例，女30例，年齡24～80(55.9±11.1)歲。術(shù)后病理診斷明確，術(shù)前均未行放、化療及靶向治療。病理學(xué)類型:腺癌65例，印戒細(xì)胞癌10例。分化程度:高、中分化41例，低分化34例。浸潤(rùn)深度:T1(腫瘤侵犯固有層、黏膜肌層或下層)和T2(腫瘤侵犯固有層)24例，T3(腫瘤穿透漿膜下結(jié)締組織，未侵犯臟層腹膜或臨近結(jié)構(gòu))和T4(腫瘤侵犯臟層腹膜或臨近結(jié)構(gòu))51例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例;TNM 分期:Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期42例。癌旁正常組織標(biāo)本25例，取自距腫瘤邊緣大于5 cm 的正常組織，其中男15例，女10例，年齡24～80(56.3±12.5)歲。所有標(biāo)本均常規(guī)固定、石蠟包埋，4 μm 厚連續(xù)切片。

1.2 FBXW7 和Cyclin E 蛋白的檢測(cè) 采用免疫組化SP 法。FBXW7 鼠抗單克隆抗體為美國(guó)Santa Cruz 公司產(chǎn)品，Cyclin E 兔抗單克隆抗體為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，通用型SP 試劑盒和DAB 顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。FBXW7 和Cyclin E 一抗均稀釋80 倍使用。嚴(yán)格按說明書步驟進(jìn)行操作，以PBS 代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 FBXW7 和Cyclin E 均以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。選擇5 個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200 個(gè)細(xì)胞，F(xiàn)BXW7 陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)＜20%為陰性，≥20%為陽(yáng)性;Cyclin E 陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)＜5%為陰性，≥5%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 處理數(shù)據(jù)，2 種胃組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率、不同臨床病理特征胃癌患者2 種蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)，胃癌組織中FBXW7、Cyclin E 表達(dá)的關(guān)聯(lián)性采用Pearson 列聯(lián)系數(shù)表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達(dá) 見圖1、表1。

2.2 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

2.3 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 見表3。

圖1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7(A)和Cyclin E(B)蛋白的表達(dá)(SP，×400)

表1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達(dá) 陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)(%)

表2 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

續(xù)表

表3 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性

3 討論

許多疾病的發(fā)生都以泛素蛋白酶體對(duì)蛋白質(zhì)的異常降解為基礎(chǔ)。FBXW7 在泛素蛋白酶體降解途徑中具有重要作用，是一種廣泛的抑癌蛋白。FBXW7 含有3 個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域:F-box、WD40 重復(fù)序列和D 結(jié)構(gòu)域。F-box 可與S 期激酶相關(guān)蛋白1(SKP1)相互作用; WD40 重復(fù)序列與靶蛋白上磷酸-降解決定子相互作用，介導(dǎo)FBXW7 與靶蛋白結(jié)合; D 結(jié)構(gòu)域的功能是促進(jìn)FBXW7 二聚化［4］。FBXW7 表達(dá)缺失會(huì)導(dǎo)致Cyclin E、MYC、Aurora-A等物質(zhì)的蓄積，加快癌細(xì)胞增殖［5］。研究［6］發(fā)現(xiàn)FBXW7 mRNA 在大腸癌組織中的表達(dá)明顯低于正常大腸組織。Wertz 等［7］發(fā)現(xiàn)FBXW7 缺陷的卵巢癌和結(jié)腸癌細(xì)胞中MCL1 蛋白的表達(dá)增高，更易于對(duì)抗微管藥物產(chǎn)生耐受，并證實(shí)FBXW7 在泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的MCL1 蛋白降解中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。國(guó)外有文獻(xiàn)［8］報(bào)道，在胃癌組織中，F(xiàn)BXW7 的低表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良有關(guān)。該研究結(jié)果顯示:胃癌組織中FBXW7 的表達(dá)降低，且與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有關(guān)，提示FBXW7 與胃癌的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。

Cyclin E 在調(diào)控細(xì)胞由G1期進(jìn)入S 期的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用，對(duì)DNA 及中心體的復(fù)制也有一定的影響。Cyclin E 隨著細(xì)胞周期不同時(shí)相有序地合成和降解是保證細(xì)胞周期順利進(jìn)行的重要條件，其過度表達(dá)可加速細(xì)胞由G1期進(jìn)入S 期，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控并最終形成腫瘤［3］。Cyclin E 在宮頸癌、卵巢癌、乳癌、肝細(xì)胞癌、肺癌、胃癌、大腸癌等多種惡性腫瘤中呈過度表達(dá)，且與腫瘤的惡性程度及預(yù)后有關(guān)。千新來等［9］發(fā)現(xiàn)Cyclin A 和Cyclin E 在HPV16E7 陽(yáng)性乳癌組織中的陽(yáng)性率較高。Kouraklis等［10］發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中Cyclin E 高表達(dá)與Lauren分型、淋巴結(jié)浸潤(rùn)、腫瘤直徑＞5 cm、淋巴管浸潤(rùn)和血管浸潤(rùn)有關(guān)。該研究結(jié)果表明，Cyclin E 在胃癌組織中的表達(dá)升高，且與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有關(guān)，提示Cyclin E 與胃癌的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。

Cyclin E 由泛素FBXW7 介導(dǎo)的蛋白酶體進(jìn)行調(diào)節(jié)。一些腫瘤中FBXW7 基因常發(fā)生缺失或突變，Cyclin E 就不能被有效降解［11］。Ekholm-Reed等［12］認(rèn)為FBXW7 功能狀態(tài)是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中Cyclin E 水平的必要條件，F(xiàn)BXW7 的功能異常足以導(dǎo)致Cyclin E 失調(diào)節(jié)。該研究結(jié)果顯示胃癌組織中FBXW7 與Cyclin E 蛋白的表達(dá)呈負(fù)關(guān)聯(lián)。

綜上所述，F(xiàn)BXW7 和Cyclin E 與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)FBXW7 和Cyclin E 的表達(dá)將有助于胃癌的預(yù)后判斷。

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