子宮脫垂患者子宮主韌帶和陰道前壁組織神經(jīng)絲蛋白的表達(dá)及意義

歐陽玲 劉 潔 董 武 周 洋 李 博

子宮脫垂患者子宮主韌帶和陰道前壁組織神經(jīng)絲蛋白的表達(dá)及意義

歐陽玲＊?jiǎng)?潔 董 武1周 洋 李 博

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110004；1遼寧省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽110016）

目的 探討子宮脫垂（Uterine prolapse，UP）患者子宮主韌帶和陰道前壁中神經(jīng)絲蛋白（Neurofilament protein，NFP）組織的表達(dá)及其與子宮脫垂臨床因素的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法對50例子宮脫垂患者的子宮主韌帶和陰道前壁組織中神經(jīng)絲蛋白表達(dá)進(jìn)行測定，并與10例對照組組織對比，結(jié)合子宮脫垂的臨床參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示子宮脫垂患者陰道壁、主韌帶組織中神經(jīng)絲蛋白表達(dá)的陽性率為28.0%、32.0%，明顯低于對照70.0%、80.0%，Ⅱ度子宮脫垂患者陰道壁、主韌帶組織中神經(jīng)絲蛋白表達(dá)陽性表達(dá)率明顯低于Ⅲ＋Ⅳ度子宮脫垂組（45.45%vs14.29%、50.0%vs17.86%）。結(jié)論 子宮脫垂患者子宮主韌帶和陰道前壁組織中神經(jīng)絲蛋白表達(dá)下降，并與脫垂程度相關(guān)，提示神經(jīng)絲蛋白可能在子宮脫垂的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。

子宮脫垂；神經(jīng)絲蛋白；免疫組織化學(xué)

盆腔器官脫垂（pelvic organ prolapse，POP）是嚴(yán)重影響中老年婦女生活質(zhì)量的一種常見病。目前POP的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，神經(jīng)生理學(xué)和病理學(xué)研究表明，POP患者存在支配盆底組織的神經(jīng)損傷［1］。神經(jīng)絲（neurofilament，NF）蛋白是神經(jīng)元特異性結(jié)構(gòu)蛋白和細(xì)胞骨架的主要成分，神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)及功能很大程度上取決于神經(jīng)絲蛋白的分布及結(jié)構(gòu)變化［2］，這一成分的分布及結(jié)構(gòu)發(fā)生改變都可能引起盆腔組織的神經(jīng)發(fā)生退行性改變，致盆底組織的神經(jīng)調(diào)節(jié)異常，組織抗張能力下降，對盆底支撐作用減弱，導(dǎo)致盆底臟器脫垂。本研究通過免疫組織化學(xué)染色方法檢測50例子宮脫垂與10例非子宮脫垂患者的主韌帶及陰道前壁組織中神經(jīng)絲蛋白的表達(dá)，探討神經(jīng)絲蛋白表達(dá)異常與子宮脫垂發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

材料和方法

1.研究對象

50例子宮脫垂患者的主韌帶、膨出陰道前壁組織及10例非脫垂患者的主韌帶及陰道前壁組織來自2008年11月至2010年11月間中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦科手術(shù)切除的組織。依據(jù)1996年國際尿控協(xié)會(huì)公布的POP-Q分度標(biāo)準(zhǔn)，Ⅱ度22例，Ⅲ度13例，Ⅳ度15例，患者年齡為32-76歲，其中絕經(jīng)前9例，絕經(jīng)后41例。另取非脫垂組10例作對照，子宮脫垂組與對照組在年齡、產(chǎn)次及絕經(jīng)狀態(tài)等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 免疫組織化學(xué)染色

神經(jīng)絲蛋白鼠抗人單克隆抗體（NF-L＋H，產(chǎn)品編號：MAB-0136，克隆號：2F11）購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑及S-P試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。運(yùn)用過氧化物酶（S-P）法行免疫組織化學(xué)染色。步驟如下：切片常規(guī)脫蠟至水，高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，一抗4℃孵育過夜，DAB染色，蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作為陰性對照。

2.2 結(jié)果判定

結(jié)果判定參照文獻(xiàn)［3］，神經(jīng)叢著色定位于胞漿為陽性表達(dá)。評分標(biāo)準(zhǔn)：0，不著色；1，淡黃色染色，NF分布稀疏，神經(jīng)纖維斷裂、碎片狀分布稀疏無規(guī)則；2，棕黃色染色，NF分布較密集，神經(jīng)纖維完整；3，棕褐色染色，NF分布密集呈網(wǎng)狀。0-1：為神經(jīng)絲蛋白陰性表達(dá)；2-3：為神經(jīng)絲蛋白陽性表達(dá)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，神經(jīng)絲蛋白表達(dá)和POP臨床病理特征的關(guān)系用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.神經(jīng)絲蛋白在陰道前壁組織中的表達(dá)陽性呈黃色或棕黃色，陽性表達(dá)呈規(guī)則密集分布，在神經(jīng)叢組織中也可見陽性表達(dá)。神經(jīng)絲蛋白在脫垂組呈現(xiàn)不規(guī)則碎片狀稀疏分布（圖1），而在非脫垂組呈規(guī)則密集連續(xù)分布（圖3）。在子宮脫垂組患者陰道前壁組織神經(jīng)絲蛋白表達(dá)水平為28.0%，而在非脫垂組陽性表達(dá)水平分別為70.0%。二者有顯著性差異（P＝0.011），見表2。

2.神經(jīng)絲蛋白在子宮主韌帶組織中的表達(dá)陽性呈黃色或棕黃色（圖2），而在非脫垂組呈規(guī)則密集連續(xù)分布（圖4）。在子宮脫垂組患者子宮主韌帶組織神經(jīng)絲蛋白表達(dá)水平為32.0%，而在非脫垂組陽性表達(dá)水平分別為80.0%。二者有顯著性差異（P＝0.005），見表2。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，POP-Q分度（ⅡvsⅢ＋Ⅳ，P＝0.015、0.016）子宮主韌帶及陰道前壁組織中神經(jīng)絲蛋白陽性表達(dá)率明顯下降，見表2。而神經(jīng)絲蛋白表達(dá)與患者絕經(jīng)狀態(tài)（P＝0.837、0.643）及陰道分娩次數(shù)（P＝0.368、0.710）不相關(guān)，見表2。

表1 脫垂組與非脫垂組患者的臨床參數(shù)比較Table 1 Co mparison of general conditions in POP and contr ol gr oup

表2 脫垂組與非脫垂組神經(jīng)絲蛋白的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系Table 2 The expression of Neur ofilament pr otein in POP and control gr oup

討 論

POP是中老年婦女的常見疾病，神經(jīng)生理學(xué)和病理學(xué)研究表明，POP的發(fā)生與盆底組織的神經(jīng)結(jié)構(gòu)及功能損傷密切相關(guān)。近年來，通過對POP大量的神經(jīng)電生理研究和病理學(xué)觀察研究，發(fā)現(xiàn)支配盆底肌的體神經(jīng)損傷和功能障礙是導(dǎo)致盆底肌的支托能力下降促使POP的發(fā)生重要原因［4，5］。位于盆腔的神經(jīng)是內(nèi)臟感覺神經(jīng)和自主神經(jīng)纖維，支配平滑肌和腺體［6］。盆腔的體神經(jīng)和自主神經(jīng)的走行和分布有一定的相關(guān)性，盆腔筋膜、韌帶等盆底支持組織受相應(yīng)神經(jīng)的支配，如果神經(jīng)損傷，則其對應(yīng)支配的盆底支持組織功能障礙，引起組織抗張能力下降，對盆底支撐作用減弱，導(dǎo)致盆腔臟器脫垂［7］。因此，我們推測POP患者可能不僅有盆底肌肉神經(jīng)分布的減少，也有盆底筋膜、韌帶及陰道黏膜神經(jīng)分布的減少。神經(jīng)元是神經(jīng)的基本結(jié)構(gòu)，而神經(jīng)絲蛋白是神經(jīng)元特異性結(jié)構(gòu)蛋白和細(xì)胞骨架的主要成分，神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)及功能很大程度上取決于神經(jīng)絲蛋白的分布及結(jié)構(gòu)變化［2］。有學(xué)者研究證明，大鼠中有盆底神經(jīng)纖維的斷裂缺失可引起盆底功能障礙［8］。那么在POP患者盆底支持組織是否也存在相應(yīng)的神經(jīng)纖維蛋白表達(dá)改變呢？本研究發(fā)現(xiàn)，POP患者的主韌帶及陰道前壁組織神經(jīng)絲蛋白的表達(dá)較對照組顯著減少，且在Ⅲ＋Ⅳ度脫垂POP患者的主韌帶及陰道前壁組織中表達(dá)明顯低于Ⅱ度脫垂組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示神經(jīng)絲蛋白表達(dá)下降，并與脫垂嚴(yán)重程度密切相關(guān)。同時(shí)，顯微鏡觀察POP組發(fā)現(xiàn)神經(jīng)纖維斷裂、碎片狀分布稀疏無規(guī)則，說明POP患者盆底組織中神經(jīng)纖維的減少、斷裂、無規(guī)則稀疏分布，導(dǎo)致支配的盆底組織的有效神經(jīng)纖維減少，致盆底組織的神經(jīng)調(diào)節(jié)異常，組織抗張能力下降，對盆底支撐作用減弱，進(jìn)而促進(jìn)POP的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，我們研究發(fā)現(xiàn)POP患者盆底結(jié)締組織神經(jīng)絲蛋白表達(dá)下降，并與POP-Q分度相關(guān)，盆底組織中神經(jīng)絲蛋白含量減少可能導(dǎo)致神經(jīng)元支配區(qū)域組織的神經(jīng)調(diào)節(jié)異常，抗張能力下降，支撐盆腔臟器能力下降，從而導(dǎo)致POP的發(fā)生。但神經(jīng)絲蛋白在POP發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制還不清楚，尚待進(jìn)一步深入研究。

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圖 版 說 明

圖1 NFP在POP組陰道前壁中陽性表達(dá)SP×400

圖2 NFP在POP組主韌帶中陽性表達(dá)SP×400

圖3 NFP在對照組主韌帶中陽性表達(dá)SP×400

圖4 NFP在對照組陰道前壁中陽性表達(dá)SP×400

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Expressions of NFP in Anterior Vaginal Wall Tissue of pelvic or gan prolapse （i mmunohistochemistr y sp method，400× magnification）.

Fig.2 Expressions of NFP in Cardinal Ligament Tissue of pelvic organ prolapse （immunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Fig.3 Expressions of NFP in Anterior Vaginal Wall Tissue of non-POP group（i mmunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Fig.4 Expressions of NFP in Cardinal Ligament Tissue of non-POP group （i mmunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Expressions and significance of neurofilament in car dinal ligament and anterior vaginal wall tissue of uterine prolapse

Ouyang Ling＊，Liu Jie，Dong Wu1，Zhou Yang，Li Bo
（Depart ment of Obstetrics and Gynecology，Shengjing Hospital，China Medical Universit y，Shenyang 110004；1Depart ment of Obstetrics and Gynecology，The People’s Hospital of Liaoning Province，Shenyang 110016，China）

Objective To investigate t he expression of neur ofilament pr oteins in car dinal ligament and anterior vaginal wall of patients with uterine prolapse（UP），and to examine their relationship with clinicopat hologic feat ures.Methods I mmunohistochemical staining was applied t o deter mine neur ofila ment pr otein expression in 50 cases of uterine prolapse and 10 controls；and t he correlation of neur ofila ment pr otein expression with clinical parameters was also analyzed.Results The positive expression rate of neurofilament pr otein 32.0%and 28.0%respectively in car dinal liga ment and anterior vaginal wall of up，significantly lower than in controls（80.0%and 70.0%respectively，P＜0.05）.Patients with lower neurofilament protein expression had advanced stage of up（Ⅱ versusⅢ＋Ⅳ，P＝0.016，0.015）.Conclusion Neurofilament pr otein expression is decreased in car dinal liga ment and anterior vaginal wall of up（P＜0.05）.Its expression is closely correlated with the stage of up，so it may play an i mportant role in the pathogenesis of up.

Uterine pr olapse；Neur ofila ment protein；Immunohistochemistry

R329

A

10.3870／zgzzhx.2012.02.007

2011-02-10

2011-04-01

遼寧省教育廳科研項(xiàng)目資助（L2010648）；中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛享醫(yī)院研究基金（MA04）

歐陽玲，女（1964年），瑤族，主任醫(yī)師。

＊通訊作者：（To who m correspondence should be addressed）